Qu son las bacterias?

Gram- Positivas
Acidos Teicicos o Teichricos

Cmo est formada la pared bacteriana? Bacterias

Protenas

Fosfolpidos

Qu forma tienen las bacterias? Gracias a la coloracin de gram podemos ver...

Esferas

Cocos gram positivos

En racimo Ej. Staphylococcus aureus

En cadena

Ej: Streptococcus spp

Diplococos-Gram-negativos

Diplococos Ej Neisseria sp

Bacilos gram-positivos

Bastones o cilindros

Bacilos Gram-negativos

Cmo definimos...?
Infeccin
Enfermedad infecciosa Colonizacin Contaminacin

Portacin

De acuerdo a la patogenicidad...

Patgenos primarios

Patgenos oportunistas

Flora Normal

Escherichia coli aislada de orina, qu tipo de patgeno es ? y de materia fecal?

Patgeno

Factores de patogenicidad

Adherencia (adhesinas, IgA proteasa)

Evasin

LPS

toxinas

(cpsula, protenas de superficie)

Los 5 pasos del diagnstico bacteriolgico

1- Seleccin y recoleccin de la muestra representativa 2- Seleccin del medio de transporte adecuado 3- Microscopa y cultivo 4- Identificacin del agente etiolgico 5- Determinacin de la susceptibilidad a los antibiticos

Cmo ayudo al laboratorio de bacteriologa para el diagnstico del agente etiolgico? Eligiendo la muestra clnica correcta
1- Debe ser material del sitio de infeccin real 2- Tomarla en el momento ptimo

3- Cantidad suficiente
4- Medio de transporte adecuado

5- Obtener la muestra antes de la administracin de antibiticos en lo posible

6-Rotular el envase

Una vez tomada la muestra....

...Microscopa
Examen en fresco Microscopio ptico GRAM Ziehl Nielsen

Microscopio de fluorescencia
Microscopio de fondo oscuro

Exmen en fresco

Glbulos rojos
Clulas epiteliales Glbulos blancos

Candidiasis

Tincin de Ziehl Nielsen

Tincin de gram

Microscopa de fluorescencia
Legionella pneumophila Anticuerpos conjugados Con isocianato de fluoresceina

Treponema pallidum

Microscopia de Campo Oscuro Fotografia amplificada

Medios de Cultivo
Medios para Propsitos generales

Se pueden separar colonias Agar Nutritivo

Caldo

Medios para todo propsito

Agar sangre con un aislamiento que produce hemlisis

Medios Enriquecidos
Con nutrientes para el crecimiento de bacterias fastidiosas

Agar Chocolate

Medios Selectivos y Diferenciales

Permiten ver una caracterstica fenotpica del microorganismo

Agar SS

Levine o EMB

Chapman

Medios Especiales
A-Aislamiento
Especialmente formulados para el aislamiento de algunas especies Ejemplo: micobacterias

B- Medio para determinar las sensibilidad a los antimicrobianos de casi todas las especies bacterianas: Meller Hinton

Caldo Tetrationato

Medios de Enriquecimiento
Son medios lquidos

Caldo Selenito

Agar SS

Medio Diferencial

IDENTIFICACIN SEGN CARACTERSTICAS METABLICAS

Utilizacin de azcares,

FENOTIPO

compuestos orgnicos,

oxgeno, etc.

IDENTIFICACIN SEGN CARACTERSTICAS GENTICAS GENOTIPO

Hibridacin de ADN

PCR

Identificacin del microorganismo por caractersticas fenotpicas

Indol

TSI
(-) (+)

Citrato (-) (+)

Desaminacin de fenilalanina

Decarboxilacin de aminocidos

Sistema API

Otros mtodos de tipificacin

Se utilizan anticuerpos especficos para detectar antgenos en la superficie de la envoltura bacteriana

Serotipificacin
Aglutinacin = positivo

1 gota de Ac

1 colonia aislada

Cmo definimos.....? Virotipo: poblacin bacteriana que se diferencia por sus factores de patogenicidad

Biotipo: cepas de la misma especie distinguibles por tests inmunolgicos

Serogrupo: diferenciacin segn los antgenos de superficie

CMO DEFINIMOS SEROLOGA?

Tcnica mediante la cual detectamos anticuerpos dirigidos contra un determinado microorganismo.

Deteccin de antgenos bacterianos

Co-aglutinacin

Aglutinacin con ltex

ELISA

Hibridacin con sonda de ADN

PCR
Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycobacterium tuberculosis, Streptococcus grupoA, SAMR

Ya caracterizamos al agente etiolgico..... Y ahora?

Debemos saber a cules antibiticos dicho agente es sensible o resistente

Cmo actan los antibiticos?

1. Inhibicin de la sntesis de la pared bacteriana. (Ejemplo: penicilina, cefalosporinas, vancomicina, teicoplanina, fosfomicina) 2. Distorsin de la funcin de la membrana celular (Ejemplo: polimixina B, colistn. Pared celular Membrana celular bacteriana bacteriana

Duplicacin del ADN

4. Inhibicin de la sntesis de cidos nucleicos. (Ejemplo: fluorquinolonas, rifampicina)

ADN

Transcripcin PABA ARNm

3. Inhibicin de la sntesis de protenas. (Ejemplo: aminoglicsidos, tetraciclina, cloranfenicol, macrlidos)

Traduccin

5. Accin como antimetabolitos (Ejemplo: sulfamida, trimetoprima).

Resistenciaintrnseca intrnseca Resistencia

ATB

Sensibilidad Sensibilidad
ATB

Resistenciaadquirida adquirida Resistencia

ATB

ENZIMA

x
ATB

ATB

ATB

x
ATB MODIFICADO

ATB

EFECTO

Noexiste existeblanco blancode deaccin accin No

Inhibicindel delcrecimiento crecimiento Inhibicin lisisbacteriana. bacteriana. oolisis

ATBmodificado modificadono nopuede puede ATB producirsu suefecto. efecto. producir

RESISTENCIA A LOS ANTIBIOTICOS 5 MECANISMOS GENERALES DE

RESISTENCIA A ANTIBITICOS

Permeabilidad disminuda

Eflujo activo

Inactivacin enzimtica

Modificacin del blanco de accin

Alteracin de una va metablica

Determinacin de la sensibilidad antibitica

1 - MTODOS DE DIFUSIN EN AGAR 2 - MTODOS DE DILUCIN CIM

CBM
3 - PODER BACTERICIDA DEL SUERO (PBS) 4 - CURVA DE MUERTE

Caso clnico
Paciente: nio de 9 meses Sntomas: fiebre de origen desconocido en los 2 das previos, dolor abdominal y diarrea. Comenz el tratamiento con eritromicina.

Observaciones:
Cadera derecha deformada, se realiza aspiracin de la misma Tincin de gram: cocos positivos en racimo. Cultivo: estafilococo beta hemoltico resistente a penicilina (cmo se supo esto ltimo?)

Medio: Agar Mueller Hinton Inculo: 107-108 UFC/ml Discos: de una determinada potencia de antimicrobiano

Fundamento de la tcnica de difusin

Cundo puedo usar la tcnica de difusin?

Bacterias de crecimiento rpido Enterobacterias, Staphylococcus Pseudomonas aeruginosa

Bacterias fastidiosas Neisseria gonorroheae frente a penicilina G, Streptococcus pneumoniae frente oxacilina Haemophilus influenzae b frente ampicilina.

Significado clnico

Bacterias sensibles

Bacterias moderadamente resistentes

Bacterias resistentes

Qu pas con el nio...?

Se lo trata con cefotaxime 150mg/kg por va IV Al sexto da... Por radiografa de rayos X se diagnostic una posible osteomielitis.

Intervencin quirrgica
Se drena cadera
Fludo seropurulento

Se le sigue administrando cefotaxime por va IV Pero......

A los 10 das despus de la intervencin quirrgica

El paciente est febril y no responde al tratamiento

qu tipo de muestra clnica tomara? pedira otro mtodo de determinacin de sensibilidad a los antibiticos?Por qu?

La osteomielitis es una enfermedad infecciosa que requiere dosis bactericidas del antibitico

CIM/CBM PBS Curva de muerte

Fundamento de la CIM
Este es el valor de CIM

Con los tubos lmpidos se realiza la CBM

Esta es la CIM

Gradiente de concentraciones en la tira g/ml

E-Test

La diferencia con el disco, es que el disco contiene una sla concentracin

Recordar que la tcnica de CBM consiste en 1) realizar la CIM en medio lquido y 2) subcultivar en un medio slido el contenido de todos los tubos que no muestran desarrollo visible en la determinacin de la CIM en medio lquido (tubos lmpidos). Es decir que primero se realiza la CIM en medio lquido y luego se toma una alcuota, generalmente de 10 l (0,01 ml) de todos los tubos que no muestran desarrollo a simple vista, y se siembra en una placa de agar.

Relevancia clnica de la CIM Para el tratamiento de las infecciones sistmicas la dosis del antibitico en suero debe ser 3 a 5 veces el valor de la CIM

Qu informacin obtengo?

CBM/CIM 2

Antibitico bactericida

Puedo tratar al nio con osteomielitis?

Cundo se pide una CBM?

Meningitis Endocarditis Osteomielitis

Por qu?

RELEVANCIA CLINICA DE LA CBM

PERMITE OBSERVAR 2 FENMENOS:

1 - TOLERANCIA: CBM/CIM 8ug/ml

2 - PERSISTENCIA

En el caso del nio con osteomielitis... Como no responda al tratamiento con cefotaxime, se le da una combinacin de oxacilina + gentamicina ...pero el tratamiento se complica

Curva de muerte

QUE INFORMACIN PUEDO OBTENER A PARTIR DE UNA CURVA DE MUERTE?

Efecto sinrgico
Efecto antagonista

Indiferencia

Volvamos a nuestro nio con osteomielitis...

Se sospecha que no responde al tratamiento con oxacilina porque la dosis no es la adecuada.

PBS

UTILIDAD DEL PBS

para evaluar la eficiencia de la teraputica antibitica PBS de 1/64 1/32 en pico del antibitico

100% curacin
Qu otras muestras clnicas se utilizan para medir la concentracin de antibitico?

OTROS METODOS DE DETERMINACION DE MECANISMOS DE RESISTENCIA

PRUEBA CROMOGNICA

HIBRIDACION CON SONDA DE ADN

PCR