Composicin qumica microbiana y diseo de medios de cultivo

Composicin qumica de la biomasa microbiana

BACTERIAS, HONGOS, LEVADURAS
Carbono Oxgeno Nitrgeno Hidrogeno Fsforo Azufre C O N H P S 50% 20 % 8% 8% 5% 3%

Masa seca
El hidrgeno y el oxgeno se encuentran en el agua

Composicin tpica de compuestos orgnicos e inorgnicos de m.o.

Compuesto Bacteria (% base seca)
Promedio

Levaduras (% base seca)

Promedio

Hongos (% base seca)

Promedio

Carbono Nitrgeno Protenas Carbohidratos Lpidos Acidos nucleicos Cenizas

48 12.5 55 9 7 23 6

46-52 10-14 50-60 6-15 5-10 15-25 4-10

48 7.5 40 38 8 8 6

46-52 6-8.5 35-45 30-45 5-10 5-10 4-10

48 6 32 49 8 5 6

45-55 4-7 25-40 40-55 5-10 2-8 4-10

Composicin tpica de compuestos orgnicos e inorgnicos de m.o.

Constituyentes inorgnicos
Elemento Fsforo Azufre Potasio Magnesio Sodio Calcio Fierro Cobre Manganeso Molibdeno Total Cenizas Bacteria 2-3 0.2-1.0 1-4.5 0.1-0.5 0.5-1 0.01-1.1 0.02-0.2 0.01-0.02 0.001-0.01 -------7-12 g/100 g en peso seco Hongos Levaduras 0.4-4.5 0.8-2.6 0.1-0.5 0.01-0.24 0.2-2.5 1-4 0.1-0.3 0.1-0.5 0.02-0.5 0.01-0.1 0.1-1.4 0.1-0.3 0.1-0.2 0.01-0.5 --------0.002-0.01 --------0.0005-0.007 --------0.0001-0.0002 2-8 5-10

Funciones en los microorganismos

Cultivo de microorganismos

Caja Petri Cultivo superficial

Biorreactor Medio Lquido

CRECIMIENTO

Medio cultivo definido Medio de cultivo complejo

Nutrientes
Sustancias utilizadas por los microorganismos para crecer Catabolismo (ruptura de biomolculas, ATP) Anabolismo (sntesis de biomolculas)

Clasificacin de Nutrientes
Macroelementos macronutrientes
Microelementos Micronutrientes u Ologoelementos Elementos traza

Factores de crecimiento

Macronutrientes macroelementos

Estn en el medio de cultivo en gran cantidad >5 g/L

Son C, O, H, N, S, P, Ca, Mg K Conforman el 95% en peso seco de una clula microbiana

Macronutrientes o macroelementos
Carbono. Principal fuente de energa para las clulas Sustrato o nutriente limitante junto con el N Fuentes: Glucosa, sacarosa, cidos grasos, maltosa, lactosa, celulosa, xilano, aceites, almidn etc.
Nitrgeno, azufre, fsforo. Fuentes de N: Nitratos, Cloruro de amonio, urea peptonas y extracto de levadura Fuentes de S: Aminocidos como cistena y metionina, Sulfatos Fuentes de P: Fosfatos

Otros Macronutrientes
Fuentes
K+: Cloruros (KCl, KClO3 Clorato de potasio), KHCO3 Ca2+: CaCl2, CaCO3

Mg2+: Mg SO4
Fe2+ y Fe3+: Fe SO4; Fe2 (SO4)3

Micronutrientes u oligoelementos
Se requieren en g <0.5g/L Usualmente, son elemetos traza en el agua y componentes de medios de cultivo. Mn, Zn, Co, Mo, Ni y Cu deben estar disponibles en cantidades de g.

Funciones de Micronutrientes u
oligoelementos

Zn2+: se localiza en el centro activo de

algunas enzimas. Mn2+: facilita a muchas enzimas la catlisis de la transferencia de los grupos fosfato. Mo2+: necesario para fijar nitrgeno. Co2+: componente de la vitamina B12. Cu2+: tiene funciones en algunas enzimas de xido-reduccin.

Factores de crecimiento
Sustancias precursoras de constituyentes orgnicos que el m.o. no es capaz de sintetizar
Purinas and pirimidinas: sntesis de cidos nucleicos
Cepas auxotrofas de uracilo,

Aminoacidos: sntesis de aminocidos y protenas

Cepas auxotrofas de uracilo, metionina, lisina, etc

Vitaminas: como coenzimas en reacciones enzimticas

Crecimiento y formacin de producto

Sustratos o Nutrientes
S1(g/L) S2 Sn

Clulas Biomasa
X (g/L)

Clula

Productos
P1 (g/L) P2 Pn

Crecimiento microbiano: Descripcin qumica

Etanol, Lctico, enzimas etc

CaHbOc + NH3 + O2
Fuente Carbono energa Fuente Nitrgeno

CaHbOc Nd+ CO2 + H2O C

Biomasa Productos del metabolismo

Datos de composicin celular

Bacterias C0.53 ; N0.12 ; O0.19 ; H0.07 Levaduras C0.47 ; N0.075 ; O0.31 ; H0.065

Medios de Cultivo

Medio sinttico o definido

Son medios en que se conocen todos los componentes. Los medios definidos se emplean ampliamente en investigacin ya que con frecuencia se requiere conocer qu est metabolizando el m.o. en estudio.

Formulacin de medios de cultivo

Consiste en calcular cuanta fuente de carbono, nitrgeno, fosfro requiere un microorganismo para crecer El diseo de medios de cultivo es respecto al C, N, P, S, ya que estos macronutrientes controlan la velocidad de crecimiento.

Biomasa (clulas)

Productos

Rendimiento biomasa sustrato (YX/S)

YX/S = X s
Biomasa producida (Xf X0) Sustrato consumido (S0 Sf)

Rendimiento de biomasa producida por fuente de carbono consumida

M.o. aerobio = 0.5 gbiomasa /1g sustrato

M.o. anaerobio = 0.1 biomasa /1g sustrato

Rendimiento = Yx/s = 0.5 gBM/1gsustrato

m.o. aerobio

50% Biomasa + 50% produccin de metabolitos y mantenimiento celular.

Sustrato (S0)
m.o. anaerobio
Rendimiento = Yx/s = 0.1gBM/1gsustrato

10% Biomasa + 90% produccin de metabolitos y mantenimiento celular.

Rendimiento biomasa sustrato (YX/S)

YX/S

X s

Biomasa producida (Xf X0) Sustrato consumido (S0 Sf)

Rendimiento producto sustrato (Yp/S)

YX/S = P s

Producto producido (Pf P0) Sustrato consumido (S0 Sf)

Para disear medios de cultivo

Es necesario conocer la composicin celular

Cantidad de C = 50% Cantidad de N = 8% Cantidad de P = 5% Cantidad de S = 3%

El hidrgeno y el oxgeno constituyen el agua

Ejercicio 1
Disear un medio de cultivo para un m.o. hetertrofo simple anaerobio.
Fuente de C: glucosa Fuente de N: cloruro de amonio, NH4Cl Fuente de S: sulfato de magnesio, MgSO4 Fuente de P: fosfato cido de potasio, KH2PO4 La clula bacteriana tiene 50% C, 8% N, 5% P y 3% S.

Qu cantidad de cada uno de los compuestos se tiene que aadir a 1 L de agua para producir 20 g/L de biomasa?

Glucosa
20 g biomasa L

Solucin
0.5 g C g biomasa 180 g Glucosa 72 g C = 25 g/L

NH4Cl

20 g biomasa L

0.08 g C g biomasa

53.5 g NH4Cl 14 g N

= 6.1 g/L

MgSO4
20 g biomasa L

0.03 g C g biomasa

120.3 g MgSO4 32 g S

= 2.25 g/L

KH2PO4
20 g biomasa L

0.05 g C g biomasa

136 g KH2PO4 30.9 g P

= 4.42 g/L

Rendimiento
Glucosa 20 g biomasa g biomasa 25 g/L 0.5 g C 72 g C 180 g Glucosa =

Si el m.o. fuera aerobio, entonces se requieren 50 g Glucosa

Ejercicio 2
Formular y disear un medio de cultivo para una bacteria mesoflica, hetertrofa simple y anaerobia estricta, basado en 100 g/L de fuente de carbono. Cuntos g/L de biomasa se producirn en 1 L de medio diseado?
Hetertrofa simple, anaerobia estricta. Fuente de C: glucosa Fuente de N: cloruro de amonio, NH4Cl Fuente de S: sulfato de magnesio, MgSO4 Fuente de P: fosfato de potasio, K2HPO4

Curva de crecimiento
mpo de Incubacin Cell / ml 0 1 2 3 4 5 1,7*1010 6 1,5*1010 1,3*108 2,4*108 1,2*109 1,4*1010 1,5*1010

Crecimiento y formacin de producto

Producto asociado al crecimiento METABOLITOS PRIMARIOS

Crecimiento y formacin de producto

Producto NO asociado al crecimiento METABOLITOS SECUNDARIOS