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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO TECNOLGICO CTC DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA E ENGENHARIA DE ALIMENTOS - EQA

DISCIPLINA: ENGENHARIA BIOQIMICA

PROFESSOR: AGENOR FURIGO JUNIOR


SEMESTRE: 2005.2

Acadmicos: Cristiane Gallucci Rosana Leite Thiago G. Trossini

Histrico
Introduo

Sumrio

Conceitos
Classificao e Nomenclatura

Fatores que Influenciam a Atividade Enzimtica


Enzimas X Catalisadores Qumicos

Aplicaes
Concluso

Referncias

HISTRICO

Catlise biolgica incio sc. XIX digesto da carne: estmago; digesto do amido: saliva. Dcada de 50 Louis Pasteur - concluiu que a fermentao do acar em lcool pela levedura era catalisada por fermentos = enzimas Eduard Buchner (1897) extratos de levedo podiam fermentar o acar at lcool; enzimas funcionavam mesmo quando removidas da clula viva.

James Sumner (1926) Isolou e cristalizou a urease; Cristais eram de protenas; Postulou que todas as enzimas so protenas. John Northrop (dcada 30) Cristalizou a pepsina e a tripsina bovinas; Dcada de 50 sc. XX 75 enzimas isoladas e cristalizadas; Ficou evidenciado carter protico. Atualmente + 2000 enzimas so conhecidas.

INTRODUO

Definio: Catalisadores biolgicos; Longas cadeias de pequenas molculas chamadas aminocidos. Funo: Viabilizar a atividade das clulas, quebrando molculas ou juntando-as para formar novos compostos. Com exceo de um pequeno grupo de molculas de RNA com propriedades catalticas, chamadas de RIBOZIMAS, todas as enzimas so PROTENAS (globulares, de estrutura terciria).

Estrutura Enzimtica

Holoenzima

Protena
Ribozimas Apoenzima ou Apoprotena

Cofator
Pode ser: on inorgnico molcula orgnica

RNA

Coenzima Se covalente Grupo Prosttico

ENZIMAS: Apresentam alto grau de especificidade;

So produtos naturais biolgicos;


Reaes baratas e seguras; So altamente eficientes, acelerando a velocidade das reaes (108 a 1011 + rpida); So econmicas, reduzindo a energia de ativao; No so txicas;

Condies favorveis de pH, temperatura, polaridade do solvente e fora inica.

CONCEITOS

As enzimas... Aceleram reaes qumicas

H2O2

Catalase

H2O +

O2

Ex: Decomposio do H2O2 Condies da Reao Sem catalisador Platina Enzima Catalase Energia livre de Ativao KJ/mol Kcal/mol 75,2 18,0 Velocidade Relativa 1

48,9
23,0

11,7
5,5

2,77 x 104
6,51 x 108

No so consumidas na reao

H2O2

Catalase

H2O + O2

E+S

E+P

Atuam em pequenas concentraes

1 molcula de Catalase

decompe 5 000 000 de molculas de H2O2 pH = 6,8 em 1 min

Nmero de renovao = n de molculas de substrato convertidas


em produto por uma nica molcula de enzima em uma dada unidade de tempo.

No alteram o estado de equilbrio Abaixam a energia de ativao; Keq no afetado pela enzima. No apresenta efeito termodinmico global G no afetada pela enzima.

Energia de ativao sem enzima


Diferena entre a energia livre de S e P

Energia de ativao com enzima

Caminho da Reao

Emil Fischer (1894): alto grau de especificidade das enzimas originou Chave-Fechadura , que considera que a enzima possui sitio ativo complementar ao substrato.

Koshland (1958): Encaixe Induzido, enzima e o o substrato sofrem conformao para o encaixe. O substrato distorcido para conformao exata do estado de transio.

NOMENCLATURA E CLASSIFICAO

Sculo XIX - poucas enzimas identificadas Adio do sufixo ASE ao nome do substrato: Ex: - gorduras (lipo - grego) LIPASE - amido (amylon - grego) AMILASE

Nomes arbitrrios:
- Tripsina e pepsina proteases

1955 - Comisso de Enzimas (EC) da Unio Internacional de Bioqumica (IUB) nomear e classificar. Cada enzima cdigo com 4 dgitos que caracteriza o tipo de reao catalisada:

1 dgito - classe
2 dgito - subclasse 3 dgito - sub-subclasse

4 dgito - indica o substrato

FATORES QUE INFLUENCIAM A ATIVIDADE ENZIMTICA

A atividade enzimtica influenciada por: pH; temperatura;

concentrao das enzimas;


concentrao dos substratos; presena de inibidores.

pH O efeito do pH sobre a enzima deve-se s variaes no estado de ionizao dos componentes do sistema medida que o pH varia. Enzimas grupos ionizveis, existem em estados de ionizao.

TEMPERATURA temperatura dois efeitos ocorrem: (a) a taxa de reao aumenta, como se observa na maioria das reaes qumicas; (b) a estabilidade da protena decresce devido a desativao trmica. O efeito da temperatura depende: - pH e a fora inica do meio; - a presena ou ausncia de ligantes.

A temperatura tima para que a enzima atinja sua atividade mxima, a temperatura mxima na qual a enzima possui uma atividade cte. por um perodo de tempo.

CONCENTRAO DAS ENZIMAS


Velocidade de transformao do S em P qtidade de E.

Desvios da linearidade ocorrem: Presena de inibidores na soluo de enzima; Presena de substncias txicas; Presena de um ativador que dissocia a enzima; Limitaes impostas pelo mtodo de anlise.
Recomenda-se: Enzimas com alto grau de pureza; Substratos puros; Mtodos de anlise confivel.

CONCENTRAO DOS SUBSTRATOS [S] varia durante o curso da reao medida que S convertido em P. Medir Vo = velocidade inicial da reao.

[E] = cte. vo [S] pequenas Vo linearmente. [S] maiores Vo por incrementos cada vez menores. Vmax [S] Vo insignificantes. Vmax atingida E estiverem na forma ES e a [E] livre insignificante, ento, E saturada com o S e V no com de [S].

Vmax

[S]

PRESENA DE INIBIDORES
Inibidor qualquer substncia que reduz a velocidade de uma reao enzimtica.

INIBIDORES

REVERSVEIS

IRREVERSVEIS

COMPETITIVOS

NO COMPETITIVOS

INCOMPETITIVOS

CINTICA ENZIMTICA

Cintica Enzimtica estudada para:


Determinar as constantes de afinidade do S e dos

inibidores;
Conhecer as condies timas da catlise; Ajudar a elucidar os mecanismos de reao;

Determinar a funo de uma determinada enzima em


uma rota metablica.

Victor Henri (1903): E + S ES

Em 1913: Leonor Michaelis -Enzimologista Maud Menten - Pediatra

E+S

K1 K-1

ES

Kp

E+P

Etapa rpida

Etapa lenta

ENZIMAS X CATALISADORES QUMICOS

Caracterstica Especificidade ao substrato Natureza da estrutura Sensibilidade T e pH

Enzimas alta complexa alta

Catalisadores Qumicos baixa simples baixa

Condies de reao (T, P e pH)


Custo de obteno (isolamento e purificao) Natureza do processo

suaves
alto batelada

drstica (geralmente)
moderado contnuo

Consumo de energia
Formao de subprodutos Separao catalisador/ produtos Atividade Cataltica (temperatura ambiente) Presena de cofatores Estabilidade do preparado Energia de Ativao Velocidade de reao

baixo
baixa difcil/cara alta sim baixa baixa alta

alto
alta simples baixa no alta alta baixa

APLICAES

TIPOS DE APLIES INDUSTRIAIS


Alimentos Raes animais Papel e celulose Couro Txtil

ALIMENTOS Indstria de azeite de oliva: - Aplicao de polygalacturonase e pectinesterase na melhoria de aspectos organolpticos e estabilidade a longo prazo.

Panificao:
- Melhoria de cor, sabor e estrutural atravs de preparado enzimtico que contm alfa-amilase fngicas. Atua sobre a farinha de trigo, acelerando o processo de fermentao devido a uma maior formao de acares para o fermento.

RAES ANIMAIS

Utilizao de enzimas nas raes para leites durante o perodo de lactao: - Emprego de Xilanase, Beta-glucanase e Alpha-amylase com o objetivo de digesto de amido e, em decorrncia disso, ganho de peso e abate precoce.

INDSTRIA DE PAPEL E CELULOSE

Remoo de depsitos em mquinas de papel:

- Substituio de lcalis e cidos fortes por enzimas com o objetivo de assegurar a integridade fsica dos funcionrios e cumprir leis ambientais.

INDSTRIA DO COURO
Uma das primeiras partes do processo de transformao de uma pele em couro a eliminao dos plos que ainda venham agarrados. O processo usado at agora envolvia sulfureto de sdio, um qumico com um cheiro to intenso que impossvel passar por uma fbrica de curtumes sem dar por ela.

Em alternativa, foi sugerido indstria que passe a usar enzimas o mau cheiro desaparece e a carga poluente dos efluentes eliminada.

INDSTRIA TXTIL

Usa-se a amilase bacteriana (Bacillus subtilis e Bacillus lichenformis) estvel ao calor para eliminar a goma dos produtos txteis, substituindo os cidos e lcalis na hidrlise do amido.

OUTRAS APLICAES

Indstria de Cosmticos
Produtos de Limpeza Inativao Enzimtica

CONCLUSO

Ampla aplicabilidade da atividade enzimtica Vantagens frente aos catalisadores qumicos Importncia de fatores externos Necessidade de maiores estudos para viabilizar o uso de diversas enzimas

REFERNCIAS

- JUNIOR, AGENOR FURIGO; DIRLEY, DIEDRICH KIELING. Enzimas. Aspectos Gerais. Florianpolis, 2002.
- JUNIOR, AGENOR FURIGO; PEREIRA, ERNANDES BENEDITO. Enzimas e suas Aplicaes. Cintica Enzimtica. Florianpolis, 2001. -http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/ -http://www.suino.com.br/nutricao -http://www.aboissa.com.br/azeitedeoliva/enzima.htm -http://www.deb.uminho.pt/imprensa/curtumes.htm -http://www.mylner.com.br/enzimas.htm -http://www.novozymes.com/library/Publications/Biotimes_Sprog/pwhere.pdf