ELEMENTOS BIOLGICOS DE RECONOCIMIENTO MOLECULAR

Un biosensor se define como un dispositivo compacto de anlisis que incorpora un elemento de reconocimiento biolgico (cido nucleico, enzima, anticuerpo, receptor, tejido, clula) o biomimtico (PIMs, aptmeros, PNAs) asociado a un sistema de transduccin que permite procesar la seal producida por la interaccin entre el elemento de reconocimiento y el analito.

Funcionamiento General de Biosensores

Elementos de reconocimiento molecular

Componente de un biosensor con capacidad de reconocer e interaccionar con el analito o microorganismo de inters.

Clasificacin de biosensores segn el elemento de reconocimiento

Sensores biocatalticos Enzimas Clulas, tejidos y orgnulos subcelulares Sensores de bioafinidad Anticuerpos Receptores y canales inicos Lectinas Clulas

 cidos

nucleicos Aptmeros cidos nucleicos peptdicos (PNAs) Polmeros de impresin molecular

Sensores Biocatalticos
Son

los biosensores mejor conocidos y los ms aplicados. Utilizacin de biocatalizadores que favorecen la formacin de productos conocidos Regeneracin y reutilizacin del biocatalizador.

Enzimas
Protenas

qumicas Producen la unin de un sustrato al sitio activo y la formacin de los productos. Son reutilizables

catalizadoras de reacciones

VENTAJAS DE LAS ENZIMAS COMO ELEMENTO DE RECONOCIMIENTO

Elevada

selectividad. Respuesta rpida. Elevada variedad de enzimas disponibles. Autorregenerables. Algunas resultan econmicas. Simplicidad de construccin de los dispositivos.

Clulas, tejidos y orgnulos subcelulares Clulas Clulas bacterianas, fngicas, protozoos o clulas procedentes de organismos superiores. Poseen en su interior mltiples sistemas multienzimticos en su medio natural. Se pueden utilizar para detectar la presencia de compuestos relacionados con el crecimiento como vitaminas, azcares, cidos orgnicos o compuestos nitrogenados, o bien para detectar compuestos que inhiben la respiracin microbiana como contaminantes ambientales o sustancias txicas. Las clulas viables pueden metabolizar diversos compuestos orgnicos dando lugar a la aparicin de distintos productos como amonio, dixido de carbono o cidos que pueden ser monitorizados mediante distintos transductores.

 Orgnulos

Subcelulares Contienen determinados sistemas enzimticos completos, como es el caso de cloroplastos completos, tilacoides o mitocondrias. Determinados agentes txicos como plaguicidas, metales pesados o detergentes actan sobre estos sistemas enzimticos inhibindolos, de modo que estos orgnulos o sus membranas internas pueden utilizarse como biosensores para detectar este tipo de compuestos.

 Tejidos

Existen determinados tejidos vegetales que debido a su funcin fisiolgica en el organismo son una fuente de determinadas enzimas o sistemas enzimticos. Algunos ejemplos que aparecen en la literatura cientfica son la utilizacin de rodajas de patata (ricas en la enzima polifenol oxidasa) junto con electrodos de oxgeno para la determinacin de mono y polifenoles, o de homogeneizados del hongo Agaricus bisporus para la determinacin de alcohol.

VENTAJAS E INCONVENIENTES DE TEJIDOS COMO ELEMENTOS DE RECONOCIMIENTO

Ventajas o Bajo coste. o Evitan procesos de extraccin y purificacin de enzimas. o No requieren la adicin de cofactores para la regeneracin enzimtica. o Simplicidad de construccin. o Elevada estabilidad. o Vida til larga. o Elevada actividad. Inconvenientes o Baja sensibilidad. o Respuesta lenta. o Limitada selectividad.

Sensores de Bioafinidad
Interaccin

del analito, con el elemento de reconocimiento. En esta interaccin, no se consume sustrato, ni se generan productos.

Tipos de reactivos de bioafinidad

Anticuerpos

(inmunosensores) Protena que se une de manera selectiva a un antgeno especifico, tambin reconoce haptenos Analitos: antgenos y haptenos Es de un solo uso.

 Receptores

y canales inicos La unin del analito a estos receptores produce la formacin decanales a travs de los que se genera un flujo de iones. Pueden utilizarse para determinar compuestos txicos

 Lectinas

Las lectinas son un grupo de protenas que se unen de manera selectiva y reversible a distintos sacridos, como los oligosacridos que se encuentran en las paredes celulares bacterianas.

 Clulas

En la membrana de estas se encuentran receptores, que al unirse con el ligando correspondiente dan una respuesta. Algunos compuestos txicos, se unen de manera especfica a receptores, bloqueando los sistemas de seales, impidiendo la unin del ligando correspondiente, de esta manera se puede detectar la presencia de estos compuestos

 cidos

Nucleicos Los biosensores para el anlisis de ADN se basan en el proceso de hibridacin, que es la unin de una cadena de ADN con su cadena complementaria. Estos biosensores, tambin conocidos como gene chips se usan para el reconocimiento y cuantificacin de ADNs Este tipo de elementos de reconocimiento pueden utilizarse para la deteccin de organismos modificados genticamente y microorganismos patgenos.

 Aptmeros

Un aptmero es una secuencia de oligonucletidos (ADN o ARN) de cadena sencilla, sintetizada artificialmente, capaz de reconocer diversas molculas diana con una afinidad y especificidad elevadas.

 cidos

nucleicos peptdicos Molculas que mimetizan al ADN y ARN Su esqueleto es neutro, lo que reduce la repulsin electrosttica durante el proceso de hibridacin, estableciendo enlaces ms fuertes con las hebras de ADN y molculas de ARN que reconocen, que los correspondientes a las hibridaciones naturales. Este elemento de reconocimiento se utiliza en la deteccin de microorganismos patgenos.

 Polmeros

de impresin molecular Se trata de materiales biomimticos que reproducen de un modo ms bsico el mecanismo de reconocimiento de los sistemas biolgicos (hormona-receptor, enzima-sustrato, antgeno-anticuerpo).

Inmovilizacin del elemento de reconocimiento

Una etapa clave en la construccin de un biosensor es la inmovilizacin del elemento de reconocimiento sobre una membrana o matriz, que a su vez se fija a la superficie del transductor. Este material de base puede actuar nicamente como soporte del componente biolgico o participar adems en la transmisin de la seal al sistema de transduccin (por ejemplo, mediante la inclusin de mediadores para las reacciones redox).

Mtodos de inmovilizacin Mtodos de inmovilizacin fsica Adsorcin Atrapamiento Mtodos de inmovilizacin qumica Inmovilizacin mediante enlace covalente Inmovilizacin a travs de una capa intermedia