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Faculdade de Engenharia Qumica

ENZIMAS - INTRODUO

Disciplina: Engenharia Bioqumica Prof. Moyss Ost Damm Martins, MSc

BIO10-329 Biofsica de Protenas Regente: Clia R. Carlini

Enzimas: como atuam ?


catalisadores classificao especificidade e mecanismos de ao regulao enzimtica inibidores e aplicaes

Ateno ! Use o modo apresentao de slides para ativar as animaes

Um pouco de Histria sobre enzimas:


1700:
Estudos da digesto de carnes por secrees do estmago.

1833:
Payen e Persoz: descobriram a converso do amido em acar pela saliva.

1850:
Louis Pasteur concluiu que leveduras catalisam a converso de acares em lcool.

1878:
Friedrich Wilhelm Khne cunha o nome "enzima", "en" = dentro e "zyme" = levedura.

1897:
Buchner descobriu que extratos de levadura podiam converter o acar em lcool, e que fermentos eram molculas.

1926:
J.B.Sumner cristaliza a primeira protena, urease, e demonstra que a atividade enzimtica uma caracterstica de molculas definidas.

Enzimas so protenas que agem como catalizadores biolgicos: Composto B (produto)


Reao catalisada pela enzima

enzima

Composto A (substrato)
Centro ativo ou stio cataltico de uma enzima a poro da molcula onde ocorre a atividade cataltica

Observe que no h consumo ou modificao permanente da enzima

Teoria da catlise
Considere as reaes:

A + B

v1 v-1

C v1 = v-1

No equilbrio da reao, as velocidades das reaes se igualam:

- concentraes de todos os reagentes no se alteram mais - pode se dizer que a reao terminou Catalisador acelera as velocidades de ambos os lados da reao - o ponto do equilbrio atingido mais rpido - o ponto do equilbrio no se altera, ou seja [reagentes] e de [produtos] no final da reao so as mesmas da reao no catalisada

- termodinmica da reao no se altera


Catalisador no consumido na reao pode atuar em [ ] baixas

Teoria da catlise

O grfico mostra a variao de energia ao longo de uma reao.

Energia de ativao ou barreira energtica:


Estado de transio

Energia

Energia de ativao

Reao no catalisada

quantidade de energia que preciso fornercer aos reagentes para a reao ocorrer

Estado de transio ou complexo ativado: Reao catalisada Produto (P)


forma molecular intermediria entre o reagente e o produto, existe somente no alto da barreira energtica. altamente instvel.

Substrato (S)

Progresso da reao

Um Catalisador diminui a barreira energtica criando percursos alternativos da reao para formao do estado de transio.

Enzimas so catalisadores biolgicos:


Equao geral de uma reao enzimtica

E + S

ES

P + E

representa o estado de transio

Que diferenas existem entre catalisadores inorgnicos, como ons metlicos, e as enzimas ? enzimas so mais eficientes: podem acelerar reaes at 1014 vezes contra
102 103 vezes dos catalisadores inorgnicos; enzimas so especficas: catalisam reaes envolvendo s vezes apenas um nico tipo de reagente; enzimas so estereo-especficas e no produzem sub-produtos reacionais; enzimas operam em condies amenas de temperatura, presso e pH; enzimas podem ser altamente reguladas atravs de fatores extrnsecos reao, tanto por ativadores como por inibidores.

Enzimas acelaram reaes vrias ordens de grandeza


Compare esses nmeros !
Velocidade na ausncia de enzima Velocidade da reao catalisada

Enzima
Anidrase carbnica
H2O2 H2O + O2

Reaes/segundo

Reaes/segundo

Poder cataltico

1.3 X 10 1 4.3 X 10 6 3.0 X 10 9 1.0 X 10 11 1.7 X 10 -13

1.0 X 106

7.7 X 106

Triosefosfato isomerase Carboxipeptidase A AMP nucleosidase Nuclease de estafilococos

4.300 578 60 95

1.0 X 109 1.9X 1011 6.0 X 1012 5.6 X 1014

Nmero de turnover ou de renovao: quantas vezes a enzima completa o ciclo da reao em um segundo

Nmero moles de S catalisado por segundo = de moles de enzima turnover

Por que a catlise por enzimas mais eficiente ?


1)
2)

Aumento da concentrao dos reagentes na superfcie da enzima: atrao dos reagentes para interao com a enzima).
Orientao correta dos reagentes (substratos): parte da energia de ativao representa o posicionamento adequado dos reagentes para que haja contacto entre os tomos corretos. O sitio ativo da enzima favorece o posicionamento correto dos reagentes. Aumento da reatividade dos reagentes: as cadeias laterais (R) dos aminocidos da enzima ou cofatores e coenzimas podem interagir diretamente com os substratos, dando-lhes carga eltrica ou polarizando-os, tornando-os quimicamente mais reativos, ou ainda cedendo ou transferindo certas funes qumicas. Induo de deformao fsica no substrato, por contacto com as cadeias laterais (R) dos aminocidos das enzimas, que desestabilizam a molcula do substrato e facilitam o rompimento de laos covalentes

3)

4)

lento A hidrlise no enzimtica de uma ligaolento rpido peptdica lenta e requer condies drsticas de pH e gua, temperatura um dos substratos
Sem catlise Catlise cida

rpido

Muito rpido

Cadeias laterais de aminocidos no stio ativo de uma enzima hidroltica

Catlise bsica

Catlise cido-bsica

Algumas protenas, enzimas em especial, contm em sua molcula uma poro no proteica, que essencial para atividade biolgica.
metal Distino entre cofator e coenzima depende da fora de ligao com a apoprotena. Ex: o NAD+ pode ser cofator de uma enzima (ligao fraca) e ser coenzima de outra (ligao forte). O mesmo ocorre com as metais.

Grupo prosttico

cofator coenzima

Enzima
holozima

Apoenzima
parte proteica

ativa
Grupo Prosttico

Coenzima

Reao com CO2 Grupos acil H e grupos alquil xido-reduo xido-reduo Grupos aminos Grupos aldedos unidades C

Vitamina Biotina c. Pantotnico Vitamina B12 Riboflavina Niacina Piridoxina Tiamina cido flico

inativa

Biocitina Coenzima A Coenzima B12 FAD, FMN

Coenzimas participam do ciclo cataltico das enzimas recebendo ou fornecendo grupos qumicos para a reao

NAD, NADP Fosfato de piridoxal Pirofosfato Tiamina Tetrahidrofolato

Algumas enzimas formam intermedirios covalentes com seus substratos


Enzimas
Quimotripsina Elastase Esterases Trombina Tripsina Papana Gliceraldedo-3-PO4 desidrogenase Fosfatase alcalina Fosfoglicomutase Fosfoglicerato mutase Succinil-CoA sintase Aldolase Descarboxilases Enzimas dependentes de piridoxal fosfato

Grupo reativo no stio ativo

Intermedirio covalente

Enzimas com o mesmo tipo de mecanismo cataltico, ou seja, possuem o mesmo grupo de aminocidos no stio ativo, formam intermedirios covalentes similares

Classificao das Enzimas: considera tipo de reao e substratos


Nomenclatura oficial das enzimas dada pela Enzyme Comission da International Union for Biochemistry and Molecular Biology (IUBMB) :
ATPase (Adenosinatrifosfatase): EC 3.6.1.3 - uma hidrolase.........................3 - atua num anidrido......................3.6 - o anidrido contm fosfato..........3.6.1 - esse anidrido ATP..................3.6.1.3

1. xido-redutases ( Reaes de xidoreduo).

Transferncia de eltrons Se uma molcula se reduz, h outra que se oxida. grupos aldedo gupos acila grupos glucosil grupos fosfatos (quinases) Transformam polmeros em monmeros. Atuam sobre: Ligaes ster Ligaes glicosdicas Ligaes peptdicas Ligaes C-N Entre C e C Entre C e O
Entre C e N

2. Transferases (Transferncia de grupos funcionais)

3. Hidrolases (Reaes de hidrlise)

4. Liases (Adio a ligaes duplas)

5. Isomerases (Reaes de isomerizao)

Nmeros identificam o tipo de reao e o tipo de substrato alvo

6. Ligases (Formao de laos covalentes com gasto de ATP)

Entre C e O Entre C e S Entre C e N Entre C e C

Enzimas so especficas para o reconhecimento de seus substratos.


Emil Fisher, na dcada de 1950, props o modelo chave-fechadura para explicar o reconhecimento (especificidade) do substrato pela enzima. Nesse modelo, o stio ativo da enzima pre-formado e tem a forma complementar molcula do Substrato, de modo que outras molculas no teriam acesso a ela. No entanto, o modelo chave-fechadura no explica a interao das enzimas com inibidores e anlogos dos substratos. Na dcada de 1970, Daniel Kosland props o modelo de encaixe induzido, no qual o contacto com a molcula do substrato induz mudanas conformacionais na enzima, que otimizam as interaes com os resduos do stio ativo. Esse o modelo aceito hoje em dia.

Modelo Chave-Fechadura

Formas rgidas

Modelo Chave-Fechadura
E e S se deformam, para otimizar o encaixe

Carboxipeptidase A uma enzima digestiva da classe das metaloproteinases.


Em A: o stio cataltico dessa enzima formado pelos resduos (em vermelho) de Tyr248 (acima, direita) e de Glu270 (centro), e um tomo de Zn2+, que est acima do Glu270.

Em B: A ligao do substrato dipeptdico glicil-L-tirosina (em verde) causa uma profunda mudana conformacional nas vizinhanas do stio ativo da carboxipeptidase A. Clique com o mouse para observar a re-orientao da posio da Tyr248 em relao outra figura.

Mecanismo de ao da quimotripsina, um exemplo tpico de uma serino proteinase


Enzima interage com substratos aromtcos Ligao a ser hidrolisada A H2O entra no stio ativo e forma uma ponte de H+ com a His-57

Trade cataltica Ser His - Asp

A Ser-195 transfere H+ para His-57 formando um estado de transio tetradrico com o substrato. O Asp-102 estabiliza o prton na His57 fazendo uma ligao inica

A H2O transfere H+ para a His-57 e OH para o substrato, formando um segundo estado de transio tetradrico

O H+ transferido da His57 para o substrato. A ligao susceptvel clivada, e parte do substrato fica ligado covalentemente enzima

O H+ transferido da His-57 de volta para a Ser-195. A outra poro do substrato liberada da enzima, que retorna ao estado inicial

Fatores que afetam a atividade enzimtica:


1. Condies do meio que afetam estabilidade protica pH temperatura

2. Tempo da reao 3. Concentrao dos reagentes a enzima o substrato co-fatore(s)

Vrios so os fatores que afetam o funcionamento das enzimas como catalisadores. Alguns desses fatores so decorrentes da natureza proteica das enzimas, como o efeito do pH e da temperatura. Para se estudar o efeito isolado de um dos fatores acima, necessrio que todos os outros fatores sejam mantidos fixos.

Fatores que controlam a atividade enzimtica: 1. Fatores que afetam a estabilidade proteica das enzimas Variaes de pH: pH timo

O pH timo de uma enzima reflete variaes no estado de ionizao de resduos de aminocidos do stio ativo. A enzima est pelo menos parcialmente desnaturada em pHs afastados do pH timo. Quando o substrato uma molcula ionizvel, o pH timo da enzima tambm reflete o seu estado de ionizao .
pH timo=1,5 pH timo=6,8 pH timo=9,9

% atividade enzimtica mxima

Fatores que controlam a atividade enzimtica:


1. Fatores que afetam a estabilidade proteica das enzimas Variaes de pH: pH timo Variaes de temperatura: temperatura tima
% atividade enzimtica mxima 100Temperatura tima

Desnaturao trmica da protena

50-

Pouca energia para a reao acontecer

0-

Ao contrrio da curva em forma de sino no caso da atividade enzimtica versus pH, a enzima s est desnaturada em temperaturas acima da temperatura tima.

Fatores que controlam a atividade enzimtica:


2. Tempo da reao 3. Concentrao: da enzima do substrato de co-fatore(s)
A [substrato] cai na mesma razo em que a [produto] aumenta em funo do tempo. A enzima existe sob duas formas: enzima livre E e complexo enzima-substrato ES. No incio da reao, a [E] livre cai e a do complexo [ES] aumenta e atinge um mximo, em que no h mais [E] livre no meio. Nessa situao (indicada no retngulo cinza), diz-se que a enzima est saturada (s existe no complexo ES). A velocidade da reao a mxima. O grfico abaixo ilustra como as concentraes de E, S e P variam ao longo do tempo da reao.

concentrao

tempo

ENZIMAS CATALISADORES
Atuam em pequenas concentraes
decompe 5 000 000 de molculas de H2O2 pH = 6,8 em 1 min

1 molcula de Catalase

Nmero de renovao = n de molculas de substrato convertidas em produto por uma nica molcula de enzima em uma dada unidade de tempo.
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ENZIMAS
ATIVIDADE ENZIMTICA
Enzyme Commission: uma unidade (U) de atividade a quantidade de enzima que catalisa a transformao de 1 micro mol de substrato ou a formao de 1 micro mol de produto por minuto. Expressa: U = micro moles produto/minuto Atividade especfica = U/mg de protena Enzima pura, condies que permita a velocidade da reao seja mxima o substrato [S] de modo a permitir que toda a enzima [E] [ES]. V = K[E] = K[ES]
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