Microbiologia

Profa Renata O. R. Calixto Disciplina: Microbiologia e Imunologia

O que ?

Cincia que estuda dos micro-organismos

Grande diversidade
Bactrias Arqueobactrias

Vrus

http://en.wikipedia.org/wiki/File:EscherichiaColi_NIAID.jpg

http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Halobacteria.jpg

http://outrasverdadesinconvenientes.blogspot.com. br/2012_08_01_archive.html

Algas

Fungos

Protozorios

http://www.febico.com/pt/page/O-que-Microalgas/FL-1Microalgae.html#

http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_ bioq/trabalhos_pos2003/const_microorg/fungo s.htm

http://pt.wikipedia.org/wiki/Flagelado

De que maneira podem ser visualizados????

Microscpio ptico
Visualizar clulas intactas com aumentos relativamente pequenos

Microscpio eletrnico
Visualizar estruturas celulares internas e detalhes da superfcie celular com grandes aumentos

Tipos de microscopia

Exemplos: Microscopia tica:

Campo claro

Campo escuro

Contraste de fase

Contraste Interferencial Diferencial

546nm: clorofila

Fluorescncia

Tipos de microscopia

Exemplos: Microscopia eletrnica:

Transmisso Varredura
AFM de perfringolisina : Clostridium perfringens

Fora Atmica

Citologia Bacteriana:

Citologia Microbiana
Procaritica Eucaritica

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/5a/Average_prokaryote_cell-_en.svg

http://www.vestibulandoweb.com.br/biologia/teoria/celula-eucarionte.asp

Citologia Microbiana

Citologia Microbiana

Estrutura celular em clulas procariticas

Forma e Arranjo:

http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Bacterial_morphology_diagram_pt.svg

Clula Procaritica

Estruturas principais:

Membrana citoplasmtica Parede celular Ribossomos Incluses Nucleides

http://fig.cox.miami.edu/~cmallery/150/proceuc/c7x4prokaryote.jpg

Membrana Citoplasmtica
Estrutura fina e fluida Barreira de permeabilidade Garante integridade celular Altamente seletiva Capacidade de concentrar metablitos Excretar dejetos

membrana plasmtica

citoplasma
meio extracelular

Composio da Membrana Citoplasmtica

Estrutura lipoprotica e fluida Lipdeos: fosfolipdeos e glicolipdeos Protenas com propriedades variadas:

receptores, sinalizadores, transportadores, cadeia respiratrias sntese de componentes

Carboidratos (ligados a protenas ou lipdeos)

ME
citoplasma

Lipdeos Protenas

Funes

Permeabilidade seletiva e transporte de solutos Transporte de eltrons e fosforilao oxidativa Excreo de exoenzimas hidrolticas Sustentao de enzimas e molculas transportadoras Sustentao dos receptores e outras protenas do sistema de transduo quimiottica e sensorial

Caractersticas dos lipdeos de membrana

Molculas anfipticas pores hidrofbicas ficam voltadas para o interior da bicamada e pores hidroflicas ficam expostas para o citoplasma e para o exterior da clula.
Poro hidroflica (Cabea polar)

meio aquoso
bicamada lipdica

Poro hidrofbica

lipossoma

Composio lipdica da membrana

Fosfolipdeos: Mais abundantes (classe principal) Possuem um grupamento fosfatado ligado ao glicerol (cabea polar): poro hidroflica Possuem dois c. graxos ligados ao glicerol: poro hidrofbica
Grupamento

fosfato
glicerol

cidos graxos

Composio lipdica da membrana

Glicolipdeos:

No possuem fosfato
Possuem mono, oligo ou polissacardeos ligados ao glicerol (cabea polar), expostos no meio polissacardeos Possuem dois c. Graxos ligados ao glicerol
oligo mono glicerol

(poro hidrofbica)
cidos graxos

Composio lipdica da membrana

Esteris: A maioria das bactrias no possui (exceo: Micoplasmas) Funo de dar maior rigidez membrana Lipdeos anlogos em algumas bactrias: hopanides Esterol anel esteride
cabea polar c graxo
colesterol

Cabea polar

poro hidroflica

hopanide

Composio lipdica da membrana

Lipdeo de bactrias e eucariotos
cidos graxos Ligao ster

Lipdeo de archaeas
Polmeros de hidrocarbonetos (isopreno)

Ligao ter

Ligao STER

glicerol
C. GRAXOS

CADEIA DE HIDROCARBONETOS

glicerol
Ligao TER

Protenas de membrana
Embebidas na camada fosfolipdica Geralmente possuem uma superfcie externa (hidrofbica) na regio em associao com ac graxos

Integrais
Transmembrana

Perifricas

Fluidez da Membrana
Molculas fosfolipdicas e protenas: liberdade de movimentao Estrutura de mosaico fluido

Fluidez da Membrana
Lipdeos:
Movimento lateral Movimento vertical ou flip-flop Protenas: Movimento lateral
Alta temperatura

A integridade da membrana pode ser afetada devido grande movimentao das molculas.
Baixa temperatura A atividade da membrana podem ser prejudicada pela baixa movimentao das molculas

Fluidez da Membrana
Domnio Archea (termfilos, termoacidfilos e halfilos) Glicerolipdios e Glicolipdios

Ligao do tipo TER entre terpeno (fitanol - saturados) e glicerol

( estabilidade qumica e resistncia hidrlise) * do tipo arqueol: formam bicamada tpica (diter) * do tipo cardaquiol: formam monocamada (tetrater)

- resistncia e rigidez: sem alterao de insaturao

Principais lipdios: glicerol ter e diglicerol tetrater

Comparao de membranas
Membrana Contedo proteico Bactria Alto Archaea Alto

Composio lipdica
Estrutura dos lipdios Ligao dos lipdos

fosfolipdeos

Sulfolipdeos, glicolipdeos, hidrocarbonetos ramificados, isoprenoides, fosfolipdeos

cadeia ramificada ter (di e tetraeter)

cadeia linear ster

Protenas de transporte
Processos de transporte: natureza altamente especfica Muitas ptns reagem com somente uma molcula Outras tem afinidade por uma classe qumica Sntese das ptns: regulada pelos nutrientes presentes e suas concentraes

Transporte atravs de membranas biolgicas

Bactrias e arqueas: nutrientes obtidos por permeabilidade da MC e sistemas de transporte * Que no requerem energia: Difuso Passiva * + [ ] para [ ] * Carboidratos e aminocidos

Transporte atravs de membranas biolgicas

* Que no requerem energia: Osmose - gua em resposta a [ ] soluto

Transporte atravs de membranas biolgicas

* Que no requerem energia: Difuso facilitada - Protenas transportadoras movimento para dentro e pra fora - Sem gradiente de [ ] e energia - Exemplo: glicerol

Transporte atravs de membranas biolgicas

Tipos de transportes que requerem energia:

Transporte atravs de membranas biolgicas

* Que requerem energia: Transporte Simples (uniporte, simporte e antiporte) - Permeases canal contra o gradiente fora prton-motiva

Transporte atravs de membranas biolgicas

* Que requerem energia: Translocao de grupo - Captao de determinados acares com a fosforilao do substrato

-Ptns transportadora fosforilada no citoplasma e se liga ao acar livre na face externa da membrana -Sistemas: fosfotransferases
-Quimiotaxia e outras vias metablicas

Transporte atravs de membranas biolgicas

* Que requerem energia: Sistema ABC (ATP Binding Cassete) - AAs, ons, carboidratos, lipdios, drogas e protenas - Emprega ATP diretamente para transporte de soluto - Gram -: facilitado por protenas de ligao no espao periplasmtico; Gram +: ptns de ligao na superfcie externa da membrana celular

Membranas Internas
Invaginaes ou continuidade * Bactrias nitrificantes - Enzima-chave oxidao amnia * Bactrias fotossintticas - Bacterioclorofila e pigmentos de Bactrias fotossintticas captao de luz

GERAO DE ATP

Parede Celular
Estrutura externa rgida da membrana citoplasmtica Promove apoio e proteo Diviso em 2 grupos:

Bactrias Gram positivas: um nico tipo de molcula e mais fina Bactrias Gram negativas: multicamadas, complexa

COLORAO PELO MTODO DE GRAM

Diversidade da petidoglicana
Nem sempre o DAP est presente Em todas as Gram negativas; em algumas Gram positivas (lisina) Os acares esto sempre conectados por ligao -1,4 As variaes ocorrem entre as pontes Esqueleto: glucosamina e cido murmico

Composio da parede celular

Peptidioglicana ou murena:
N-acetilglucosamina e acido N-acetilmurmico (-1,4)

Grupo de aminocidos: L-alanina, D-alanina, ac glutmico, lisina e ac. Diaminopimlico (DAP)

Somente encontradas nas paredes celulares de bactrias c. N-acetil murmico Presentes em bactrias N-acetil glicosamina Gram positivas e negativas 1-4 Mais de 100 variaes

L-Ala D-Glu L-Lis/m-Dap pentaglicina D-Ala

Composio da parede celular

Bactrias Gram positivas: 90% da parede e em muitas camadas Bactrias Gram negativas: 10% da parede

Composio da parede celular Bactrias Gram positivas

Ac. Teicico, Lipoteicico e Teicurnico Macromolculas com carga negativa: passagem de ons

c. teicico: polmero de glicerol-fosfato ou ribitol-fosfato c. lipoteicico: polmero de glicerol-fosfato ligado lipdeos de membrana c. teicurnico: polmero de c. glucurnico alternado com glicose
c. lipoteicico

c. teicurnic

c. teicico

Ligao fosfodister
c. teicico
c. teicurnico

peptideoglicana

GlcNA ManNAc c dissacardeo

Composio da parede celular Bactrias Gram negativas

Composio da parede celular Bactrias Gram negativas

Membrana externa: Dupla camada Possui na sua face externa LPS (lipopolissacardeo) Capacidade de excluir molculas hidrofbicas (proteo celular) e hidroflicas Possui porinas: difuso passiva permeabilidade

Membrana Externa de Gram

Considerada como endotoxina Salmonella, Shigella. Escherichia Toxicidade: polissacardeos e lipdio A Ligadas a clula e liberadas na lise celular Nem todas as cel possuem LPS composto por unidades repetidas Estruturas semelhantes a glicoesfingolipdios (LOS) LOS: diversidade antignica e estrutural

Fator de virulncia Escape do SI (N-aceetilgalactosamina terminal em N. gonorrhoea e H.ducreyi)

Composio da parede celular Bactrias Gram negativas

Lipopolissacardeo (LPS):

2 pores: core polissacardico e O-polissacardeo Polissacardeo O: 4 a 5 molculas de acares repetidos Poro lipdica: lipdio A (cidos graxos: ac. Caprico, ac laurnico, ac muristico, ac esterico) Dissacardeo ligado ao core por cido cetodesoxioctanico (KDO)

Composio da parede celular Bactrias Gram negativas

Lipoprotena:

Entre a camada externa e as camadas do peptidioglicana Contm 57 aminocidos Peptidio ligado a resduos do DAP na cadeia lateral Protena mais abundante Funo: estabilizar a membrana externa e ancor-la na camada do peptidioglicana

Composio da parede celular Bactrias Gram negativas

Espao Periplasmtico:

Entre a membrana externa e a membrana interna Contem a camada de peptidioglicana e uma soluo de protenas (gel) Cerca de 20 a 40 % do volume celular Protenas periplasmticas: protenas de ligao, enzimas hidrolticas Oligossacardeos derivados de mamebrana: osmorregulao

Polmero altamente ramificado de d-glicose (8 a 10 resduos)

Parede celular de Micobactrias

Peptidioglicana, arabinogalactana e cido miclico Baixa permeabilidade susceptibilidade Peptidioglicana: N-acetilglicosamina e Nglicolilmurmico q forma suporte para arabinogalactana com cido miclico Arabinogalactana: D-galactose e D-arabinose, na configurao furanose Esterol anel esteride

Galactana: -D-galactofuranose

cido miclico Pelo menos 10 gneros (Mycoplasma) Capturam esteris do meio

cabea polar c graxo

Composio da parede celular

cido Miclico

Lipdeos somente encontrados na parede de bactrias do gnero Mycobacterium Tambm possui outros lipdeos (lipoarabinomananas e lipomanas)

lcool-cido resistncia

Colorao: Mtodo de ZiehlNeelsen

Parede Celular de Micobactrias

Base da parede de Mycobacterium: complexo c. miclico-arabinogalactana-peptdeoglicana (mAGP)

Parede Celular de Arqueas

Pseudopeptidoglicanas

Peptdeoglicanas: polmeros de GlcNAc (b 1-4) MurNAc Pseudopeptdeoglicanas: polmeros de GlcNAc (b 1-3) NAcTalNA

Pentapeptdeo

Ausncia de D-aa

Parede Celular de Arqueas

Pseudopeptidoglicanas

A parede de outras arqueas podem consistir de polissacardeos, glicoprotenas ou protenas

Funo: impedir a lise osmtica e definir a forma celular Tipo mais comum : camada da superfcie paracristalina ou camada S (protena pu glicoprotena, simetria hexagonal)

Clulas desprovidas de parede

Destruio do peptideoglicano Lisozima: clica ligaes -1,4 Protoplasto: sem parede celular Esferoplasto: pores de parede associada Alguns procariotos podem sobreviver sem parede.

Ex: micoplasma, Thermoplasma, Clamydia

Membranas extemamente rgidas ou habitats osmoticamente protegidos

Camada S

Estrutura proteica ou glicoprotica ligada parede Em todas as bactrias e sobretudo em arqueobacterias (parede) Aparncia cristalina Vrias simetrias:

Oblqua (2 monmeros) Tetragonal (4) Hexagonal (3 ou 6 )

barreira permevel Adeso forma da clula ligao a nutrientes proteo contra SI

Funo:

Cpsula e camada limosa

Substncias viscosas presentes na superfcie celular Polissacardeos ancorados e protenas Glicoclix: material contendo polissacardeos localizado no lado externo da clula = termo + abrangente

Glicoprotenas e grande n de polissacardeos (polilcoois e acares aminados)

Em alguns casos: sntese de polmero extracelular por enzimas na superfcie celular homopolmero ou heteropolmero

Cpsula e camada limosa

Cpsula: camada condensada e bem definida que circunda estreitamente a clula

Funo: capacidade de invaso; evaso do SI

Cpsula e camada limosa:

Camada limosa: rede frouxa de fibrilas que extende para fora da clula

Funo: aderncia, biofilme

Cpsula e camada limosa:

Funes:

Reservatrio de gua e nutrientes: proteo contra dessecao e servem como nutrientes Aumento da capacidade de invaso Aderncias Aumento da resistncia microbiana a biocidas Produo industrial de polissacardeos extracelulares

Flagelos

Presentes em archaeas e bactrias Gram positivas e negativas Longos e finos, com uma extremidade livre e a outra presa na clula Funo: locomoo

Gasto de energia Peritrqueo

Polar Lofotrqueo

Estrutura flagelar
Morfologia helicoidal Filamento composto por flagelina Estrutura bsica varia pouco em Bacteria Flagelina conservada: razes evolutivas Archaea: diferentes tipos de flagelina

Estrutura muito distinta do flagelo de Bacteria

Estrutura flagelar
So subdivididos em 3 regies: Motor (Anis) Gancho - coneco Filamento

Movimento flagelar
Comprimento de onda caracterstico para cada organismo Fazem rotao e no flexo

Sentido anti-horrio Sentido horrio fora prton-motriz 1000 protons/rotao

Energia

Flagelos: Quimiotaxia e Sinalizao celular

Estmulo qumico NUTRIENTES

Atraente Repelente Bactrias aquticas Partculas eletrondensas Fe - magnetos Bactrias fotossintticas Vacolos de gs H - flutuao Bactrias que requerem O2 Pili do tipo IV: mobilidade independente de flagelo twitching: movimento contrao Pseudomonas aeruginosa gliding: deslizamento Myxococcus xanthus

Magnetotaxia

Fototaxia

Aerotaxia

Outros tipos de movimentao

Pili e Fmbrias

Filamentos longos e delgados

Polimerizao de protenas Medeiam adeso Quase em todas Gram Possuem base ligada na membrana plasmtica em Grampositivas e na membrana externa em Gram-negativas As fmbrias so menores, mais numerosas do que os pili

Fmbrias
Em Gram + e Gram Curtos e menos numerosos Caracterstica hereditria Funes: adeso e biofilmes

Pili

Similares s fmbrias Maiores e apenas um ou poucos Mais estudados em Gram Funes: transferncia gentica (conjugao) e adeso Variao antignica
Pilus de adeso Adesina Receptor

Pilus sexual
(Pili F)

Clula hospedeira

Pili

Motilidade: suas extremidades aderem as superfcies da clula, e em seguida os pili se despolimerizam da sua extremidade terminal retraindo-se para o interior da clula movimento em direo a ponta aderente Virulncia de algumas bactrias

Cepas enteropatognicas de E.coli Estreptococos: protena M aderncia ao epitlio (c. Lipoteicico) Variao antignica pili de diferentes tipos antignicos

Inibe atividade fagoctica

Endsporos
Estruturas formadas por algumas bactrias Gram +: gneros Clostridium e Bacillus Formadas pela privao de nutrientes Clulas latentes

A) No identificado B) B. cereus C) B. megaterium

Endsporos

DNA Crtex:camada mais espessa; peptidoglicana incomum (menor n de ligaes cruzadas), sensvel a lisozima; papel na germinao Parede do cerne: camada mais interna; peptidoglicana normal Capa: resistncia a agentes qumicos Exsporo: composto por protenas, lipdios e carboidratos

Endsporos

Processo de esporulao

Endsporos

Processo de Germinao:

3 estgios:
Ativao: meio nutricional rico ou outro agente que atue na capa condies ambientais favorveis Iniciao: depende da espcie; receptores reconhecem efetores distintos como sinalizao. O efetor autolisina degrada o peptidoglicana do cortex Captao de gua liberao de dipicolinato de clcio degradao de vrios componentes por enzimas hidroliticas. Crescimento: aparecimento de clula vegetativa aps degradao do cortex e das camadas mais externas

Material gentico

Nucleide:

Ausncia de membrana nuclear e de aparelho mittico Regio nuclear: DNA dupla hlice

DNA + protenas histona-like

Plasmdeos:

DNA circulares, menores que o cromossomo Capazes de auto-duplicao

Tcnicas de colorao:

BACTRIAS

Colorao Simples
ou negativa Colorao Simples Positiva
Soluo

Pode ser positiva

aquosa ou alcolica de um nico corante bsico ligao superfcie celular e material gentico Finalidade: realar o micro-organismo por inteiro visualizao da forma celular, tamanho e grupamento de clula.

Colorao simples negativa Utiliza um corante acdico repelido pelas cargas negativas da superfcie celular
fica corada micro-organismo mais claro Demonstrao de cpsula mucide em algumas espcies Exs de corantes: tinta nanquim ou nigrosina
Lmina
Acinetobacter calcoaceticus

http://escola.britannica.com.br/assembly/708/The-capsular-material-surroundingthese-bacteria-is-revealed-in-a

Colorao Diferencial
de dois corantes contratantes coloraes diferentes em grupos distintos de bactrias Finalidades:
Uso

Separar grupos de bactrias diferentes

Colorao

de Gram Colorao de resistncia a lcool-cido

Visualizar estruturas particulares de alguns grupos de bactrias

Colorao

de endsporos Colorao de flagelos

Colorao de Gram

Mtodo de escolha para identificao de bactrias 2 grupos principais: Gram positivas e Gram negativas Princpio da tcnica: diferena de composio da parede celular capacidade destas paredes em reter os corantes

http://www.infoescola.com/microbiologia/bacterias-gram-positivas-e-gram-negativas/

Colorao de resistncia ao lcoolcido

(Colorao de Ziehl-Neelsen e Colorao de Kinyoun)

Mtodos para identificao de micobactrias Princpios das tcnicas: Existncia de uma espessa camada de lipdios (cido miclico) Membrana pouco permevel a corantes

http://phil.cdc.gov/PHIL_Images/20040615/d094324845a24eb3a7bfe0d1f8e4a637/5789_lores.jpg

Colorao de endsporos
(Tcnica de Schaeffer-Fulton)
Endsporos: formas de resistncia (altas temperaturas, congelamento, radiao, dessecao e agentes qumicos Tcnica:
O verde malaquita, a colorao primria, aplicado a um e sfregao fixado com calor e aquecido em vapor por cerca de cinco minutos O calor auxilia a colorao a penetrar na parede do endosporo. a preparao lavada por cerca de 30 segundos com gua, para remover o verde malaquita de todas as partes da clula, exceto dos endosporos.

A safranina aplicada ao esfregao para corar as pores da clula que no os endosporos

os endosporos aparecem em verde dentro de clulas vermelhas ou rosadas. os endosporos so altamente refrativos, podem ser detectados no microscpio ptico quando no corados, mas no podem ser diferenciados de incluses de material armazenado sem uma colorao especial

Colorao de flagelos
(Tcnica de Leifson) Flagelos: estruturas de locomoo Princpios das tcnicas: deposio do corante na estrutura do flagelo Mordente: cido tnico Corante: carbolfucsina O esfregao no deve ser fixado