histologa

Proceso Histolgico
Serie de mtodos y tcnicas utilizados para poder estudiar las caractersticas morfolgicas y moleculares de los tejidos. Pasos:
Obtencin del tejido ijacin !nclusin "orte #incin Obser$acin

ijacin
Procesos degradati$os:
%utlisis: accin de enzimas intracelulares& autodigestin. Putrefaccin: accin bacteriana.

's preser$ar sus caractersticas morfolgicas y moleculares lo m(s parecidas posibles a las )ue posea en estado $i$o. uncin de los fijadores:
Proteger frente a ata)ues bacterianos '$itar autolisis !nsolubilizar elementos solubles '$itar distorsiones y retracciones tisulares Penetrar y modificar el tejido para poder lle$ar a cabo

 "aractersticas:
Velocidad de penetracin
El tamao condiciona la difusin.

Velocidad de fijacin
Propiedades )umicas.

Endurecimiento
*ependen del tipo de fijador y del tiempo )ue el tejido haya estado e+puesto.

smosis y pH
0.9% NaCl Buffer

Efecto mordiente
,odificacin )umica

 #ipos de fijadores
ijadores fsicos:
"ongelacin muy r(pida del tejido
Preser$acin de las caractersticas moleculares. -ariantes: "riodesecacin o liofilizacin: el tejido pre$iamente congelado al )ue posteriormente se realiza sublimacin del hielo. "riosustitucin: el tejido congelado se produce una sustitucin lenta del hielo por una solucin fijadora.

"alor o microondas
Para microorganismos& poco usados.

Se usan:
ijadores )umicos alteran la estructuras deseadas. ijacin muy r(pida.

ijadores )umicos:
Soluciones acuosas compuestas por molculas fijadoras )ue establecen puentes entre las molculas celulares& mantenindolas en sus lugares originales e impidiendo su degradacin. #ipos:

 nmersin
#ejido no mayor de ../ cm de espesor.
'$itar deterioro. Velocidad de penetracin. "aractersticas del tejido.

-olumen recomendado de fijador debe ser 20 veces superior al $olumen de la pieza. Osmolaridad pH fisiolgico #iempo de fijacin.

 !erfusin.
Sistema circulatorio 0o en biopsias ,(s efecti$o
-elocidad de penetracin. -olumen de fijador necesario es menor.

 "ormalde#$do%
12 3uena preser$acin del tejido Se usa como: conser$ante& poca retraccin tisular y buen fijador para lpidos. "ompatible con la mayora de las tinciones histolgicas

&lutaralde#$do:
../ 4 52 Preser$a estructura celular ijador de referencia para estructuras cellulares. 3aja penetracin tisular y puede producir retracciones.

'etr(ido de osmio%

 )e*cla de fijadores%
+$,uido de B-. N:
ormado: (cido pcrico& formaldehdo y (cido actico glacial. 7so:
Procesamiento de tejidos )ue se incluir(n en parafina y a cuyas secciones se le pueden aplicar un amplio espectro de tinciones. #ejidos blandos y embriones Preser$a bien el n8cleo y el glucgeno.

/arnoy:
ormado: etanol absoluto 9. 2& cloroformo 5. 2 y (cido actico glacial 6. 2. 7so:
ijador para el glucgeno& hidratos de carbono simples y para las protenas fibrosas. -isualizar los (cidos nucleicos& aun)ue no la morfologa nuclear& y para los grumos de 0issl del sistema ner$ioso. Puede producir retracciones tisulares.

&lutaralde#$do0tetr(ido de osmio:
,icroscopa electrnica:
:lutaraldehdo ;6 al 5 2< Paraformaldehdo ;= al 1 2<

!nclusin
!nfiltrar la muestra con sustancias l)uidas )ue tras un proceso de polimerizacin o enfriamiento se solidifican& sin afectar a las caractersticas del tejido. >os medios de inclusin m(s frecuentes son:
Parafina: es una sustancia de aspecto ceroso )ue est( formada por mezclas de hidrocarburossaturados. % temperatura ambiente es slida y su punto de fusin puede $ariar entre 1. y ?. @" seg8n su composicin de la mezcla de hidrocarburos.

"ortes
)icrotomo para parafina:
,aterial incluido en parafina. Secciones de / a =. Bm de grosor. ,icroscopio ptico.

Vi1ratomo:
"orta material no incluido& aun)ue s fijado o duro. Secciones de 5. a centenares de Bm de grosor. ,icroscopio ptico.

)icrotomo de con2elacin:
Secciones de 5. a unas 6.. Bm de material congelado. ,icroscopio ptico.

Criostato:
Secciones de 6. a 1. Bm a partir de material congelado. ,icroscopio ptico.

.ltramicrotomo:
,aterial incluido en resinas 0anometros de grosor. ,icroscopio electrnico de transmisin.

#inciones histolgicas
Sustancia basfila es a)uella )ue incorpora un colorante b(sico. Sustancia acidfila es a)uella )ue incorpora un colorante (cido. #cnicas histolgicas:
#inciones generales: %)uellas )ue usan sustancias coloreadas )ue se unen a componentes tisulares por afinidad )umica. Histo)umica: Son a)uellas tcnicas de tincin )ue implican la modificacin )umica de algunas molculas tisulares para posteriormente ponerlas de manifiesto con colorantes. >ectinas: dominios de protenas& como las selectinas& )ue son capaces de reconocer gl8cidos )ue forman parte de polisac(ridos. !nmunocito)umica: Son tcnicas histolgicas muy potentes basadas en la alta especificidad de unin de los anticuerpos a los antgenos contra los )ue se produjeron. Hibridacin: Son tcnicas basadas en la unin complementaria de

#inciones generales
#eCir a las clulas y componentes tisulares )ue $an a ser obser$ados con el microscopio ptico. Sobre secciones de tejido. !nclusiones en parafina u obtenidas en el criostato. "olorantes:
Son molculas )ue poseen tres componentes importantes:
Esqueleto incoloro: anillo arom(tico de benceno& al cual se le unen dos tipos de radicales: Cromforo: aporta el color. Au(cromo: posibilita la unin a elementos del tejido.

"romgeno.

Cromforo: nitrosos& ozoicos& deri$ados de la antro)uinona& deri$ados de la acridina& deri$ados de iminas )uinnicas& deri$ados de diferrilmetano y triferrilmetano& der$iados del +anteno y deri$ados de

 Au cromo:
Bsicos:
son sales en las )ue la base aporta el color& mientras )ue la parte (cida es incolora. #ienen apetencia por sustancias (cidas del tejido: %*0 o ciertos componentes de la matriz e+tracelular como los glucosaminoglucanos. 'jemplos: tionina& safranina& azul de toluidina& el azul de metileno o la hemato+ilina.

cidos:
son sales con el anin coloreado y la base incolora. #ienen apetencia por sustancias b(sicas: estructuras proteicas localizadas en el citoplasma celular y tambin el col(geno de la matriz e+tracelular. 'jemplos: fucsina (cida& $erde r(pido& naranja : o la eosina.

Neutros:
Poseen una porcin (cida y otra b(sica& ambas con capacidad para aportar color.