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Anatomia patolgica:

Tcnicas histolgicas
Antonio Carlo Fonseca Vanzillotta Yasmim Franceschi

Introduo
Dados Histricos:

O homem com sua curiosidade incessante, buscar decifrar o mundo a sua volta. Com o passar do tempo e com os seguidos avanos tecnolgicos como a inveno do microscpio, em 1560 pode-se observar um outro mundo que estava bem embaixo dos nossos ps. O Mundo microscpico. Com essa descoberta, os Cientstas/Pensadores da poca comearam a associar esses mundo e seus habitantes como os causadores de certas doenas que acometiam a populao da poca. Dando causas naturais, e no divinas as doenas.

Modelo mais Recente.

Microscpio antigo.

Em 1761, Giovanni Battista Morgagni publica Sobre os lugares e

as Causas das Doenas Anatomicamente Verificadas, obra que descreve, em mbito macroscpico, concluses provenientes da observao atenta de seus pacientes. Morgagni considerado mais tarde como o pai da anatomia patolgica moderna. Outro cientista que podemos ressaltar Rudolf Virchow, que direcionou a Anatomia Patolgica s aplicaes prximas das atuais. Virchow construiu bases para a teoria celular com sua frase: Todas as clulas provm de clulas.

Dr. Rudolf Virchow

Giovanni Batista Morgagni

O Que a Anatomia Patolgica?


A Anatomia Patolgica um ramo da Patologia/

Medicina que lida com doenas diagnsticveis por meio de exames Macro e Microscpicos.

Importncia da Anatomia Patolgica


A Anatomia Patolgica um servio de apoio ao atendimento

mdico, pois fonte de diagnsticos em diversas ocasies. Possibilitando tambm, a compreenso das causas e efeitos de cada enfermidade a nvel macroscpico, tecidual e celular gerando maior entendimento sobre os mecanismos de desenvolvimento, observando tambm suas alteraes teciduais e explicando suas consequncias nos seres como doenas.

Atuao da Anatomia patolgica


A Participao do setor de Anatomia Patolgica dentro de um Centro

Hospitalar sem dvida ampla. Sendo primordial para a qualidade desse servio a confiabilidade dos diagnsticos fornecidos..

O patologista pode atuar na observao de material macro e

microscpico tanto para o desenvolvimento de pesquisa quanto para o apoio ao fornecimento de diagnsticos comunidade hospitalar. Podendo dedicar-se a Citopatologia, baseando suas anlises na Imuno-histoqumica.

Etapas
No setor de Anatomia Patolgica, o laboratrio tcnico tem como

funo condicionar o material coletado posterior anlise microscpica. Desta forma, cada etapa do procedimento tcnico tem seu prprio objetivo em termos de qualificar qumica e fisicamente o material observao. Coleta do Material Clivagem Fixao Descalcificao, em materiais calcificados. Microtomia Clorao

Podemos ressaltar que esses processos sofrem alteraes, quanto a ordem de acordo com a necessidade de cada departamento. No caso do IFF, podemos ver que ocorre Coleta, Clivagem, Fixao, Microtomia e colorao ( Claro havendo necessidade haver a Descalcificao). Constatando que a troca dessa ordem no altera os produto resultante no material finalizado

Etapas
Coleta do material
A coleta do material consiste na remoo de uma parte ou do todo tecido de um organismo que ser analisado. A Coleta pode ser feita por meio de uma Biopsia, com o organismo ainda vivo; ou Ps-morte, por meio de uma

Necropsia. Os Materiais retirados por esses processos devero ser analisados de primeiro momento por um patologista, que dar seu parecer de forma Macroscpica.

Observando os seguintes aspectos:

Cor do material Cheiro

Aparncia
Tamanho

Logo aps esse processo deve-se Registrar em um livro especifico o Material, identificandoo com um nmero que o acompanhara toda sua passagem pelos demais processos.

Nota de Biossegurana: Deve-se nesse procedimento utilizase de Equipamentos de EPI`S proposto pelo departamento. Lembrandose de quanto maior o uso de proteo do meio externo do meio interno melhor. Evitando assim, o contato direto com o materiais, pois todo o material orgnico retirado e potencialmente infectante

Etapas
Clivagem Esta etapa consiste em Reduzir as dimenses do material. Para facilitar a penetrao dos fixadores e a difuso dos reagentes durante as demais etapas do processamento dos tecidos.
Observao sobre a Clivagem:
O ideal em uma clivagem que a espessura dos fragmentos atinjam 3mm de espessura. importante que os rgos conhecidos como auto- metabolizantes os sejam retirados primeiro, pois so primeiros a entrar em autlise.

No comprimir o material com pinas ou outros instrumentos, pois a estrutura tecidual pode ser distorcida.

Etapas
Clivagem

Figura 1. Clivagem de coluna vertebral de camundongos Swiss webster.

Figura 2. Clivagem com 3mm de espessura.

Etapas
Clivagem Nota de biossegurana: Durante o procedimento de clivagem do material, tome muito cuidado com as navalhas e giletes utilizadas. O material perfuro cortante, bem como os restos de material biolgico, devem ser descartados em lixo prprio.

Etapas
Fixao
A fixao um processo muito importante nas Tcnicas histolgica, pois evita

que o material entre em decomposio. Por meio de um acmulo de dixido de Carbono, culminado Autlise, que a liberao de lisossomos dentro da Clula causando sua morte. A Fixao interrompe o Metabolismo Celular, estabilizando as estruturas do tecido permitindo a invaso de outras substncias. Podemos observar que apesar de prolongar a vida do material os fixadores no se mostram 100% eficazes. Alguns fixadores so excelentes para certas estruturas teciduais, outros para uso em clulas ou mesmo para estudo da Bioqumica. Porm, nenhum fixador adequado para todas as situaes. Uma possvel soluo o uso de um Mistura de Fixadores que visa suprir a carncia de um pela vantagem de outra.

Principais Fixadores
Formol lcool

Biossegurana do processo:

Etapas
Descalcificao
Em alguns tipos de tecido como o sseo, nota-se a presena de Clcio, Fosfato, entre outros sais minerais. Para a leitura em microscpio deve-se seguir um desses procedimentos: A Descalcificao, que remove a poro mineral do material. Evidenciando sua estrutura Orgnica. Desgaste: Que permite O Patologista analisar os componentes inorgnicos. O no seguimento desses processos acomete na ao dos Cristais de Clcio que danificam o material de trabalho na Microtomia como as navalhas que ficam com dentes, impedindo a feitura de bons cortes

Nota de biossegurana:
Deve-se presar pelo uso de luvas especficas na

manipulao qumica na hora de mexer em solues cidas e quelantes, mscaras com filtro prprio para vapores cidos e orgnicos e deve-se faz-lo em local arejado. O preparo dessas solues deve ser feito em uma capela de exausto. No deve-se descartar solues cidas em esgoto sanitrio convencional.

Etapas
Processamento
Etapa que consiste na difuso de reagentes para o interior dos tecidos e na remoo do lquido tecidual, assim como o Fixador que ainda est no tecido. Tambm condiciona os fragmentos para serem fatiados de forma fina e delicada pela prxima etapa.

O processamento constitudo de trs

etapas:
Desidratao: que consiste na remoo de gua do tecido. Clarificao: etapa que retira todo o lcool do tecido. A retirado do

lcool primordial, pois a parafina que ser usada na etapa de Incluso no se mistura homogeneamente com o lcool. Infiltrao em parafina: etapa que coloca a parafina em 56C a 60 C em contato direto com os tecidos.
Nota de biossegurana: Os materiais usados na etapa de processamento so altamente inflamveis. Deve-se usar luvas, jaleco e mscara com filtro de vapores. O Xilol altamente cancergeno se prolongado o contato direto, podendo levar a morte. Deve-se instalar um exaustor inferior, pois o Xilol mais denso que o ar.

Etapas
Incluso
A incluso um processo em que coloca, com uma

pina aquecida, os tecidos que foram infiltrados com parafina no interior de um cassete que contem parafina lquida, com a parte clivada para baixo. Os fragmentos devem ser colocados na parafina aquecidos evitando que se forme bolhas de ar em seu entorno.

Nota de Biossegurana:
A parafina altamente inflamvel. A incluso deve ser feita em local arejado com exaustor. A parafina libera vapores txicos, quando aquecida, Logo deve-se usar mscara de vapores.

Etapas
Microtomia

Micrtomo rotatrio manual

Micrtomo rotatrio automtico

Etapas
Microtomia
Para se obter cortes do material includo em parafina ou congelado,

necessrio o uso do micrtomo. As funes dos micrtomos variam de acordo com o fabricante, mas o equipamento tem como fundamento duas peas principais: o suporte ou mandril (onde fixada a pea a cortar) e a navalha, que realiza os cortes. O suporte encaixado a um parafuso micromtrico ou a uma espiral metlica que o faz adiantar segundo seu eixo, em medida conhecida e que pode ser regulada. Esta medida tem como unidade o micrmetro (m), que corresponde milsima parte do milmetro Normalmente um micrtomo faz cortes cuja espessura varia de 1 a 50 micrmetros, mas a espessura mais utilizada em microscopia ptica de 1 (para cortes sequenciais) a 5 micrmetros (quando no h necessidade de se aproveitar todos os cortes).

Etapas
Colorao
Processo primordial para que se diferencie cada estrutura tecidual,

afim de que se possa ver ao Microscpio de luz os diferentes componentes relacionados ao diagnstico. Os corantes so compostos orgnicos, aromticos e ionizveis baseados em estruturas de Benzeno. Os corantes se dividem de forma geral em: Naturais: Hematoxilina, ndigo, Orcena, Brasilina, entre outros. Artificiais: Derivados de Benzeno.

Etapas
Colorao
Nota-se que o uso das coloraes feita aps um analise de que

material estamos trabalhando. Atento a isso temos o seguinte quadro com suas coloraes e seus respectivos resultados.

Etapas
Colorao

Etapas
Colorao

Etapas
Colorao
Existem, como vimos, diferentes tipos de coloraes com diferentes aplicaes teciduais. Podemos ento Destacar algumas coloraes. Hematoxilina Fosfotngica Hematoxilina de Harris+Eosina Mtodo de Grocoott Mtodo de Ziehl-Neelsen e Fite Azul de Alcian Mtodo de Weigert-Van Gienson Verde Metil Pironina Entre outras

Etapas
Colorao Assim com a ordem das etapas sofre alteraes quanto a demanda ou o produto final, com a colarao no diferente. possivel selecionar um nmero de coloraes usadas no IFF com seus resultados:
He ( Hematoxilina+eosina): serve para ver a Morfologia dos tecidos. Ncleos----------------------Roxo

Etapas
Colorao Giemsa:
Resultados:
Citoplasma------- Rosa Ncleos------------Azul Hemcias----------Vermelho Grnulos de Mastcitos---Prpura Bactrias-----------Azul Parasitas da malria---Azul

Gomori: Resultados:
Fibras Reticulares-------Negro

Etapas
Colorao
Masson: resultados
Ncleos------Preto Msculo, citoplasma. Queratina---- Vermelho

Colgeno-----Azul

PAS e PASD( Sendo que o PASD contm um enzima que

digere o glicognio) Resultados:


Glicognio, mucina, membrana basal, fungos--------- Vermelho Ncleos--------Azul

Etapas
Colorao Pers: Resultados
Pigimento frrico-----Azul Fundo------Laranja

Etapas
Colorao
Wayson:

Resultados:
Citoplasma------- Rosa Ncleos------------Azul Hemcias----------Vermelho Grnulos de Mastcitos---Prpura Bactrias-----------Azul Parasitas da malria---Azul

Nota de biossegurana: O uso do xilol em certos preparos exige o uso de mscaras de vapores e capela de exausto. Deve-se presar pelo uso dos EPI`S propostos pelo departamento.

Antonio Carlo F. Vanzillotta Yasmin Franceschi