Sntesis del DNA. Reparacin.

Estructura del ADN

Watson y Crick describieron la estructura del ADN.
El ADN tiene forma de doble hlice o escalera de caracol. El grupo fosfato y el azcar (desoxiribosa) representan los lados de la escalera. La unin de las bases representa los peldaos.

Siempre se une una base prica con una pirimidinica: Adenina se une con Timina y Guanina se une a citocina.

Replicacin del ADN

Es el proceso necesario para que se realice la divisin celular. Ocurre en la fase S del ciclo celular. El mecanismo de replicacin se basa en la complementariedad de bases. Inicialmente se plantearon tres posibles modelos de replicacin:
Modelo conservativo Modelo dispersivo Modelo semiconservativo

Posibles modelos en la replicacin del ADN

CONSERVATIVO

DISPERSIVO

SEMICONSERVATIVO

Replicacin del ADN

En que consiste la replicacin semiconservadora? - Las hebras del ADN se separan y sirven como plantillas. Se forman molculas con una hebra original de ADN y una hebra de ADN nuevo.

Replicacin del ADN

Generalidades
Proceso de duplicacin del ADN mediante un modelo semiconservativo. Comienza en sitios especficos (orgenes de replicacin) El proceso de replicacin es bidireccional. Las dos hebras nuevas se van alargando progresivamente, por adicin secuencial de nucletidos. La replicacin siempre se produce en sentido 5' 3', siendo el extremo 3'-OH libre el punto a partir del cual se produce la elongacin del DNA. Como las dos hebras de ADN son antiparalelas, una de las hebras se sintetiza de forma continua y otra de forma discontinua. Hay una correccin de errores para asegurar la fidelidad de las copias

Replicacin en procariotas
El proceso se ha estudiado en la bacteria E. Coli Consta de las siguientes fases: Iniciacin Elongacin Terminacin Durante la elongacin se da una correccin de errores

Fase de iniciacin
La replicacin comienza en sitios especficos del ADN conocidos como origen de replicacin o regin oriC. Los orgenes de replicacin son los puntos fijos a partir de los cuales se lleva cabo la replicacin, que avanza de forma secuencial formando estructuras con forma de horquilla. Procariontes: Un origen de replicacin. Eucariontes: Mltiples orgenes de replicacin.

Fase de iniciacin
Reconocimiento del OriC por protenas especficas. Las helicasas rompen los puentes de H. Se forma la burbuja de replicacin, con dos horquillas de replicacin, que se van extendiendo en las dos direcciones: replicacin bidireccional. Las girasas y topoisomerasas alivian las tensiones del desenrollamiento. Las protenas SSB (protenas de unin monoconcatenario) evitan que se vuelvan a unir las cadenas sencillas y se enrollen de nuevo. Formacin de la burbuja de replicacin

Fase de elongacin
Se sintetiza la nueva hebra de ADN sobre la hebra original. Se debe a la actuacin de las ADN polimerasas. En procariotas hay tres y su funcin es doble: Actividad polimerasa. Va uniendo los desorribonucleotidos trifosfatos complementarios a la cadena original. Actividad exonucleasa. Elimina nucletidos mal emparejados y trozos de ARN cebador

Fase de elongacin

La ADN polimerasa necesita un pequeo fragmento sobre el que empezar a aadir nucletidos. Este primer fragmento es un trozo de unos 10 nucletidos de ARN llamado cebador o primer, que presenta el extremo 3 libre. El primer es sintetizado por una ARN polimerasa o primasa, que acta en la zona donde comienza la replicacin. A partir de este fragmento, la ADN polimerasa comienza la adicin de nucletidos sobre el extremo 3 libre. Este enzima recorre la cadena molde en sentido 35 y sintetiza la nueva cadena en sentido 53 (las cadenas de ADN son antiparalelas).

Fase de elongacin
El mecanismo de elongacin es distinto en las dos cadenas: En una de las cadenas, la hebra conductora, la sntesis es continua. En la otra cadena, la hebra retardada, se produce una sntesis a base de pequeos fragmentos de ADN (fragmentos de Okazaki). La sntesis de cada uno de los fragmentos de Okazaki necesita de su cebador correspondiente (sintetizado por la primasa). Los cebadores sern posteriormente eliminados por la ADN polimerasa I que rellena el hueco con desoxirribonucleotidos. Finalmente una ligasa une los fragmentos sueltos.

El mecanismo de elongacin
La ADN polimerasa recorre las hebras molde en el sentido 3-5 uniendo los nuevos nucletidos en el extremo 3.
3 5

3 5
3
La ADN polimerasa necesita un fragmento de ARN (cebador o primer) con el extremo 3 libre para iniciar la sntesis.

Fragmentos de Okazaki

Una de las hebras se sintetiza de modo contnuo. Es la conductora o lider.

3 5

La otra hebra se sintetiza de modo discontinuo formndose fragmentos que se unirn ms tarde. Es la retardada.

Terminacin
La ADN Polimerasa I degrada los cebadores y los reemplaza por ADN complementario. La ADN ligasa une todos los fragmentos de ADN de Okazaki.

Enzima

Accin

Funcin en la clula.

DNA Polimerasa I

Aade nucletidos a la Llena huecos en el DNA, para molcula de DNA en reparacin. Remueve los formacin. Remueve cebadores cebadores de RNA. de RNA.

DNA Polimerasa III

Aade nucletidos a la Replica DNA. molcula de DNA en formacin. Revisa y corrige la secuencia.

DNA girasa (topoisomerasa II)

DNA helicasa

Promueve el superenrrollamiento. Se une al DNA cerca de la horquilla de replicacin.

Mantiene la compactacin del DNA. Promueve la separacin de las hebras de DNA.

Topoisomerasa I

Relaja el DNA superenrrollado. Mantiene el nivel adecuado de enrollamiento.

Primasa

Hace cadenas pequeas de RNANecesaria para que la DNA usando DNA como molde. polimerasa replique la hebra retrasada.

Correccin de errores
Durante la replicacin se puede producir un error en el apareamiento de bases con una tasa de 1/100.000 bases. Parte de estos errores se corrigen durante la replicacin. La ADN polimerasa acta como exonucleasa y elimina los nucletidos mal apareados y rellena el hueco con los nucletidos correctos. La ADN ligasa une los fragmentos resultantes. A pesar de todo, siempre quedan algunos errores (mutaciones)

Correccin de errores

Replicacin en los eucariontes

Es muy parecida a la de los procariontes, salvo en algunas diferencias debidos a las propias diferencias en el material gentico de procariotas y eucariotas: El material gentico de eucariotas esta dividido en varios cromosomas, mucho mas largos que el cromosoma procariota. La replicacin se origina simultneamente en muchos puntos: los replicones (puede haber mas de 6000 en un solo cromosoma). Existen cinco tipos de ADN polimerasas El ADN eucariota est asociado a histonas, que se tienen que duplicar durante la duplicacin para formar los nucleosomas. Ms lento (10 veces) por la existencia de histonas. Fragmentos de Okazaki ms pequeos. Ocurre durante la interfase en el periodo o fase S del ciclo celular. Ocurre siempre en el interior del ncleo

Replicacin en los eucariontes

Cuando se elimina el ltimo cebador, la ADN polimerasa no podr rellenar el hueco, al no poder sintetizar en direccin 3 - 5. 3 Debido a esto el 3 5 5 5 extremo del cro5 Cebador ltimo cebador mosoma (telmero) se va acortando 3 cada vez que la 5 clula se divide. Esto se asocia al envejecimiento y muerte celular.
La ADN polimerasa polimeriza desde el extremo 3 libre Eliminacin de cebadores

Hebra ms corta

3 5

Telmero

Polimerasas de mamferos
ENZIMA ADN Pol FUNCIN Sntesis Hlice retardada. Sntesis del cebador: 10 bases de ADN y 25 de ARN. Sntesis de la Hlice conductora.

ADN Pol

ADN Pol

Unin de los fragmentos de Okazaki ( de aproximadamente 250 pb). Sntesis ADN mitocondrial.

ADN Pol

Daos en el ADN
La reparacin del ADN es un proceso constante en la clula, esencial para La SUPERVIVENCIA. Se producen unas 500.000 lesiones/molecula/dia. Cuando la clula no puede mantener la tasa de reparacin: SENESCENCIA APOPTOSIS CARCINOGENESIS La tasa es de 500.000 lesiones/molcula: aun as algunos factores pueden hacer que esta tasa sea mayor.

Origen de los daos

Endgeno Ataque por radicales reactivos del oxgeno.

Exgeno Radiacion UV Radiacion x y radiacion gamma Hidrlisis o rupturas trmicas Productos qumicos mutagnicos sintetizados por el hombre Tratamiento de quimioterapia y radioterapia

Tipos de dao
OXIDACION DE BASES
ALQUILACION DE BASES (normalmente metilacion) HIDRLISIS DE BASES (depurinacin y depirimidizacin.) ERRORES EN EL APAREAMIENTO DE BASES.

Mutaciones
Los errores en la molcula de DNA completa son muy pocos, de hecho encontramos 1 cada 109 bases. Sin embargo, durante el proceso de duplicacin la tasa de error es bastante mas alta, 1 / 100.000 (1x105) bases puede estar mal.

Mecanismo de reparacin general:

Lectura de prueba La lleva a cabo la misma ADN pol, con su act. Exonucleasa 3-5)

Sistema por nucleasa reparadora, ADN polimerasa y ADN ligasa

Sistema de escicion- reparacin