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Interaes Antgeno-Anticorpo

Ana Cludia Carvalho Gouveia

Interaes Ag - Ac

Ligaes no covalentes Reversveis

Caractersticas das interaes Ag-Ac


Afinidade Fora de interao entre um nico stio de ligao Ag-Ac (em um nico eptopo).

Caractersticas das interaes Ag-Ac


Avidez
- Fora de interaes total entre Ac e Ag. - Soma das afinidades de todos eptopos envolvidos Especificidade - Capacidade do Ac distinguir seu imungeno de outros Ags.

Caractersticas das interaes Ag-Ac


Reao cruzada

- Dois Ag diferentes apresentam eptopos estruturalmente semelhantes


- Ac especficos para um eptopo se ligam a um eptopo no relacionado, mas com propriedades qumicas similares.

Mtodos
Reagentes no marcados
(A ligao do Ac altera o estado fsico do Ag)

Reao de aglutinao Reao de precipitao

Reagentes marcados RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting

Reao de aglutinao
(Ag insolvel)

Direta eritrcitos (hemaglutinao), bactrias, fungos Passiva ltex

Qualitativos

Semi-quantitativos

Ex.: classificao sanguinea

Ex.: detectar infeces

Inibio da Aglutinao

Reao de precipitao
- Quantidades de Ag solvel so adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac. - A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitado tambm aumenta at um mximo, para depois diminuir.

Precipitado visvel

Precipitao em soluo

Precipitao em gel
Imunodifuso Radial

Precipitao em gel
Imunodifuso Dupla

Reagentes marcados
- Enzimas, fluorocromos, istopos - Tipos: RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting

Radioimunoensaios
Utilizam Ac conjugados com radioistopos para quantificar os ensaios. Vantagens: Alta sensibilidade Permite medidas rpidas e precisas Desvantagens: Custo Vida mdia dos reagentes Risco operacional (radiao)

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)


- Baseia-se na quantificao de uma reao enzimtica associada com complexos imunes.

Imunofluorescncia
- Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a molculas reveladoras chamadas fluorocromos. - Visualizao em microscpio de fluorescncia

Isotiocianato de fluorescena (FITC) Ficoeritrina (FE)

VERDE VERMELHA

Imunofluorescncia Direta
Aplicaes: - Deteco direta de microrganismos (secrees, urina, cortes de tecidos); - Identificao de subpopulaes de linfcitos; - Fenotipagem de clulas tumorais

Ex.: Deteco de Chlamydia trachomatis em secreo uretral

Imunofluorescncia Indireta
Aplicaes: - Deteco de anticorpos especficos contra diversos microrganismos; - Diagnstico de doenas auto-imunes;

Ex.: Deteco de Ac anti- T. cruzi

Deteco de Ac anti-nuclear

Citometria de fluxo
- Detecta, separa e quantifica clulas contendo um antgeno particular, marcadas com um fluorocromo; - Cada anticorpo marcado com um fluorocromo diferente; - As clulas so ento analizadas no citmetro de fluxo.

Citometria de fluxo
- As clulas saem de uma clula de fluxo e so iluminadas por um raio laser;

- A quantidade de raios laser que dispersa para fora das clulas durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informao a respeito do tamanho das clulas.

- O laser pode tambm excitar o fluorocromo nas clulas e a luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais detectores.

CD4

Aplicaes:

-Caracterizao de populaes celulares;


- Contagem de microrganismos; - Separao de populaes celulares de acordo com a densidade dos antgenos, tamanho e granulosidade das clulas; - Anlise de proliferao celular.

CD8

CD19

Western Blot

Ensaios imunocromatogrficos

Teste rpido de HIV


(Ac anti-HIV)

Diagnstico de gravidez
( deteco de beta HCG)

Tcnicas de Biologia Molecular

Reao da Polimerase em Cadeia


Amostra + Reagentes

RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction)

Termociclador

Deteco da Amplificao
Eletroforese em gel de poliacrilamida
Produto (PCR ou RT-PCR)

Relatrio
1. Qual a principal diferena imunofluorescncia? entre os mtodos de ELISA e

2.

Em uma tipagem sangunea houve aglutinao ao se misturar o sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo sanguneo e faa um esquema explicando a reao ocorrida.

3. Quais as caractersticas do anticorpo que podem influenciar a sua ligao ao antgeno? 4. Ao realizar os exames pr-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou teste ELISA positivo para HIV. Como voc interpreta este resultado? Descreva suscintamente a reao ocorrida. 5. Qual imunoensaio voc escolheria para o acompanhar o prognstico de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.