UNIVERSIDAD SAN PEDRO

Es el conjunto de operaciones que se somete un material organizado para hacer posible su estudio por medio del microscopio, posibilitando la observacin de las estructuras no visibles al ojo humano.

TCNICAS HISTOLGICAS

Mtodos de estudio 1- Examen inmediato o in vivo:

a) Observacin de clulas en el organismo vivo: Espermatograma b) Observacin de clulas que se mantienen vivas luego de ser quitadas del organismo 2- Examen mediato o post-morten: Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie de pasos, las Tcnicas histolgicas

TCNICA HISTOLGICA
Tejido Procedimientos Corte Histolgico

Microscopio Pasos de la Tcnica Histolgica 1) Obtencin del material Incisional Biopsia Excisional Autopsia Citologa

TCNICA HISTOLGICA
2) Fijacin - Preserva morfologa y estructura del tejido

- Detiene procesos celulares dinmicos

- Elimina posibles patgenos - Aumenta la consistencia del tejido

Autolsis

- No produce Artefactos
Idealmente: - No dificulta etapas ulteriores de la tcnica - Buena penetracin al tejido Mec. de Accin: Forman Enlaces cruzados entre las Protenas (Grupos Amino) Gel insoluble

TCNICA HISTOLGICA
Perfusin Fijacin

Inmersin
Fsicos Simples Qumicos Compuestos

Debe colocarse inmediatamente Volumen de fijador de 10 a 20 veces la muestra Dejar por 6 a 24 horas a) Formol b) Alcohol c) Glutaraldehido d) Tetraxido de Osmio Liquido de Fleming Liquido de Zenker e) Lquido de Bouin

Fijadores

TCNICA HISTOLGICA
a) Formol: - Mas utilizado - Bajo precio - Mal fijador de membranas

- Buena efectividad

- Poca retraccin tisular - Disuelve el glucgeno b) Alcohol - Fija por deshidratacin - til para citologas. Lacas o spray c) Glutaraldehido d) Tetraoxido de Osmio - Excelentes fijadores - Suelen usarse para la Microscopa Electronica - No para coloraciones convencionales

TCNICA HISTOLGICA
e) Lquido de Bouin - cido Pcrico + Formaldehdo + cido Actico

- Tejidos blandos, ncleo, glucgeno

- No dejar mas de 48 hr en inmersin - Eliminar cido pcrico antes de la inmersin 3) Inclusin Combinacin del tejido con ceras (insolubles en agua) para formar un bloque de corte Debe eliminarse el agua de la preparacin Batera de alcohol etlico DESHIDRATACIN Concentraciones crecientes (50-100%)

TCNICA HISTOLGICA
- Se mezcla con un lquido miscible en parafina y agua Xilol

Tejido Transparente
Disuelve las grasas

ACLARAMIENTO

- Se realiza la mezcla con las ceras (Parafina) a) Impregnacin: Se pasa por parafina caliente, removiendo el xilol b) INCLUSIN: Se baa completamente con parafina

Otorga la dureza al tejido para realizar el CORTE

TCNICA HISTOLGICA
4) Corte - Una vez en el bloque de parafina, se cortan rebanadas de 5 10 mcm (M. ptica) MICROTOMO - Se coloca el corte en un bao de flotacin

- Se monta en una lmina portaobjeto

TCNICA HISTOLGICA
5) Tincin - Necesitamos diferenciar las estructuras del corte.

- Los colorantes presentan diferente afinidad por ciertos elementos, dando CONTRASTE al preparado histolgico
- La mayora de los colorantes son HIDROSOLUBLES

Rehidratar el tejido
- Se elimina la parafina con xileno - Se aade alcohol a concentraciones decrecientes cido - Bsico Colorantes Especializados (MEC) Sales Metlicas (M. Electronica)

TCNICA HISTOLGICA
Hematoxilina Eosina (Coloracin mas utilizada) - Se basan en las propiedades de BASOFLIA y CIDOFILIA Hematoxilina: - Colorante Bsico (al unirse con una Laca)

- Carga Positiva
- Es Hidrosoluble, colocar antes de deshidratar Tiene afinidad por estructuras con carga NEGATIVA (BASOFILICAS)

CIDOS NUCLEICOS (NCLEO CELULAR)

COLOR PRPURA

TCNICA HISTOLGICA
Eosina: - Colorante cido - Carga Negativa

- Tiene afinidad con estructuras de Carga Positiva (CIDOFILAS)

- Unin con componentes CITOPLASMATICOS

COLOR ROJO - ROSADO

TCNICA HISTOLGICA
6) Montaje - Antes de ver el preparado al microscopio, debe colocarse una lmina cubreobjetos - Debe colocarse una sustancia conservadora a la muestra, para fijar ambas lminas HIDROFBICA - Volver a deshidratar el tejido y colocar xileno

SE COLOCA EN UNA LAMINA PORTA OBJETO Y SE A 80C

LLEVA A LA ESTUFA DURANTE 15 a 20

Para ADHERIR el corte a la lmina

Raz de cebolla Hematoxilina Frrica

Rin
Hematoxilina-Eosina