INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA BIOLOGIA MOLECULAR I

SILENCIAMIENTO DE GENES EN PLANTAS

Integrantes: Nayara gomez Pablo paredes Valeria martinez Daniela vera

?Silenciamiento Gnico?
apagado !eg

de n determinado gen
"ranscripcional Post#"ranscripcional

lacion:

"GS$"ranscriptional Gene Silencing%

&odi'icacion

de las (istonas)

P"GS $Post#"ranscriptional Gene Silencing%

Degradaci*n +!N

de n +!Nm)

de inter'erencia o +!Ni)

P"GS$Silenciamiento Post#"ranscripcional %

Iniciaci*n

,'ectora

&antenimiento

Iniciaci*n
Intermediario de replicaci*n de n Vir sIntrod cido arti'icialmente "ransgn)

!N+dc Pe.

reconocido y digerido por Dicer$+!Nasa iii% e/as molec las de +!Ns

,'ectora
si!N+ 0 comple1o con actividad n cleasa Degradacion de a +!Nm (omologos de si!N+s

Se 'orma

!IS2 activado

!IS2 $comple1o de silenciamiento ind cido por +!N%

(elicasa de !IS2 separa las dos (ebras del si!N+

+plicaciones 3iotecnol*gicas
4 4 4

Identi'icar Genes 5blanco5 ,liminar la ' nci*n de n gen) ,liminar la e6presi*n de n gen: en'ermedad

(ttp:77888)elcomercio)com)ec7tecnologia7algodon#p diera#volverse#alimento#ciencia#investigacion#algodon# ,spe9:9;<=>?@:;A)(tml

Ba roza az l
,n + stralia- na organizaci*n de investigaci*n cientC'ica e ind strial $2SI!D%- con gr po 1apons)

E ente: (ttp:77888)argenbio)org7adc7 ploads7pd'7Silenciamiento9genico9+rgenbio)pd'

Papas resistentes al Pardeamiento

4 ,n el Instit to de Investigaciones en IngenierCa Gentica y 3iologCa &olec lar $ING,3I F 2DNI2,"%3riardo BlorenteG illermo +lonso) 4 ,6presan n +!Ni: silenciar el gen de na enzima $poli'enol o6idasa PPD%

E ente: (ttp:77888)argenbio)org7adc7 ploads7pd'7Silenciamiento9genico9+rgenbio)pd'

Paper

Resumen
Dismin ir la actividad enzimGtica tre(alasa en plantas de tabaco- mediante la in(ibici*n por !N+ anti sentido del gen end*geno- al dirigir na sec encia interna del DN+ codi'icante para la enzima tre(alasa- ademGs de cond cir a n me1oramiento en la capacidad de crecimiento de las plantas y la obtenci*n de plantas transgnicas por selecci*n en medio carente de sacarosa- en s stit ci*n del marcador de selecci*n por el antibi*tico Hanamicina)

Mtodos
Clonacin Clonacin

y anlisis del DNA complementario (cDNA) de la enzima trehalasa de alfalfa de la secuencia anti sentido de la trehalasa !a"o el control de los promotores #$% y rd&'A

Clonacin y anlisis del DNA complementario (cDNA) de la enzima trehalasa de alfalfa

Clonacin de la secuencia anti sentido de la trehalasa !a"o el control de los promotores #$% y rd&'A
Se

ampli'ico n 'ragmento interno de ;A: pb de la sec encia- . e incl ye pe. e/as regiones conservadas entre las di'erentes tre(alasas de plantas- tilizando los oligos especC'icos I"reI:: y "reNsi!8 ) ,sta sec encia ' e clonada como 'ragmento SacI#JbaI en los plGsmidos de e6presi*n en plantas p3I#@K@ y prdK=- los c ales llevan los promotores I;S y rdK=+ respectivamente- dando l gar a las constr cciones pI;S:"!,as y prdK=:"!,as)

Resultados
(!tencin

de plantas trans)nicas de ta!aco de la acti*idad trehalasa en plantas

Determinacin Anlisis

de dependencia a sacarosa y comportamiento de azucares de las l+neas trans)nicas in*itro del sistema como marcador de seleccin

,*aluacin

Determinacin de la acti*idad trehalasa en plantas

Anlisis de dependencia a sacarosa y comportamiento de azucares de las l+neas trans)nicas in*itro

!e. ieren de la presencia de sacarosa en el medio para desarrollarse normalmente- ya . e al prescindir de esta merma s desarrollo $'ig ra ;3%- y 'inalmente provoca s inanici*n y m erte)

Ba e6presi*n del anti sentido de la tre(alasa- sin embargo- permiti* no solo . e la planta se desarrollara normalmente en medio carente de sacarosa $'ig ra ;2%- sino . e p diera tambin evadir la inanici*n y sobrevivir 'inalmente)

,*aluacin del sistema como marcador de seleccin

Bos

brotes obtenidos se trans'irieron entonces a medio &S sin sacarosa- y a las tres semanas se p do observar la inanici*n y m erte de los brotes control $'ig ra >+%- a di'erencia de los brotes con el anti sentido $'ig ra >3 y 2% . e contin aron s desarrollo y di'erenciaci*n normal)

Discusin
+

n. e son pocas las sec encias . e se reportan para las tre(alasas de origen vegetal- la sec encia de al'al'a tilizada en este traba1o como anti sentido incl ye la regi*n mas conservada entre dic(as especies) in(ibici*n enzimGtica t vo e'ecto- con na dismin ci*n de (asta el ;:L)

Ba

Conclusiones
,sto

nos indica . e la e6presi*n del anti sentido de tre(alasa ind ce en las plantas na me1or capacidad 'otosinttica- lo c al p ede tilizarse para obtener c ltivos de importancia agron*mica con n me1or crecimiento y desarrollo)

-i!lio)raf+a

(ttp:77eprints)

anl)m67A;?7@7me1ora)pd'