Bacteriologia Clnica

Farmcia 9 Noturno
Professora: Kelli Moreira
Acadmicas:
Alexandre Furtado
Amanda Tieko
Carla Aran
Elizabeth Evans
Ktya Cortes
Katilcia Marques
Mrcia Miriam
Regina Clia
Controle de Qualidade em BAAR
O programa de controle interno de qualidade um conjunto de
aes que visam garantir a qualidade e reprodutibilidade dos processos
e dos resultados produzidos por meio da verificao contnua dos
fatores que interferem nessa.
Segundo a OMS a implantao necessria para:
Melhorar a qualidade dos servios de sade;
Gerar resultados confiveis e reproduzveis;
Propiciar que resultados inter-laboratoriais sejam comparveis;
Aumentar a credibilidade do laboratrio entre os mdicos e seus clientes;
Motivar os funcionrios a melhorar o desempenho;
Prevenir de complicaes legais que podem seguir a liberao de exames
de baixa qualidade.
Controle de Qualidade Interno Condies Gerais
Preventivos
- Recepo das amostras
- Realizao dos esfregaos
- Colorao
- Leitura microscpica
- Emisso do laudo
Operacional
- Controle dos insumos
- Controle dos equipamentos
- Procedimentos tcnicos
- Monitoramento dos resultados da Baciloscopia
- Registro dos procedimentos de CQI
- Aplicao das aes corretivas quando se fizerem
necessrias
Envolve dois aspectos:
Controle de Qualidade Interno Condies Especficas
Controle de Qualidade Interno dos Insumos
A qualidade da baciloscopia est tambm relacionada ao controle
de estoque. Esse controle deve garantir a disponibilidade de todo o
material de consumo necessrio execuo dos exames e monitorar o
aspecto fsico e prazo de validade dos reagentes, corantes e outros
materiais, para evitar desperdcios.

Controle de Qualidade Interno Condies Especficas
gua
Em alguns locais, a gua corrente, mesmo deionizada, pode estar
contaminada com micobactrias ambientais, que podem gerar resultados
falsos positivos.
Controle de Qualidade Interno Condies Especficas
gua
Procedimentos para deteco de microorganismos lcool-cido resistentes na gua:
- Centrifugar 200 250 ml de gua em mltiplos tubos;
- Fazer um esfregao com uma mistura dos sedimentos;
- Fixar, corar pelo mtodo de Ziehl-Neelsen e realizar a leitura.
Resultado
Quando presena de microorganismos lcool-cido resistentes, deve-se investigar a
causa da contaminao, esterilizar todo o contedo da gua e descartar.
Quando ausncia de microorganismos lcool-cido resistentes, deve-se esterilizar todo o
contedo da gua e descartar.
Controle de Qualidade Interno Condies Especficas
Corante
Verificar a qualidade dos corantes toda vez que produzir um lote e, quando
estiver em uso, verificar pelo menos uma vez por semana;
Corar um esfregao preparado e fixado com uma amostra de resultado
conhecido positivo e outro com uma amostra negativa. Esses esfregaos podem ser
preparados no laboratrio a partir de amostras tratadas com 10 gotas de fenol a 5%
durante uma hora;
Os esfregaos devem ser conservados ao abrigo do calor e da umidade, em
caixas plsticas. A validade dos corantes de 6 meses.
Controle de Qualidade Interno Condies Especficas
Lminas
Devem ser sem uso, limpas e desengorduradas.


Equipamentos
Os equipamentos devem ser utilizados de acordo coma as recomendaes do fabricante,
a fim de ampliar a sua vida til. Devem, tambm, ser monitoradas pelo usurio para assegurar a
preciso requerida para a anlise.
Controle de Qualidade Interno
Lembrando que:
uma atividade permanente dependente da conscientizao e atitude dos
profissionais envolvidos em cada etapa do trabalho.
Organizao do local de trabalho
Capacitao peridica dos profissionais
Uso de POPs
Registros dos problemas e dificuldades
Registros das medidas corretivas.

Procedimento Operacional Padro - POP
Objetivo:
Preparao de esfregaos para a observao de BAAR,
aplicados na baciloscopia.
Procedimento Operacional Padro - POP
Material necessrio:
- Lmina para microscopia;
- Lpis para vidro;
- Ala e agulha de platina;
- Cultura de micobactrias;
- leo de imerso, papel absorvente;
- Suporte para lminas;
- Lamparinas, bico de Bunsen e isqueiro;
- Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen;
- Soluo de lcool-cido clordrico 1%;
- Azul de metileno;
- Soluo salina ou gua destilada;
- Pote para descarte das lminas.

Procedimento Operacional Padro - POP
Mtodo:
Mtodo de colorao quente mtodo de ziehl-neelsen.
Procedimento:
Preparar um esfregao homogneo, delgado e identificado em uma lmina nova desengordurada, limpa e
seca;
Deixar secar a temperatura ambiente;
Fixar o material do esfregao passando de 3 a 4 vezes pela chama do bico de Bunsen;
Cobrir a totalidade da superfcie do esfregao com soluo de fucsina de Ziehl concentrada;
Deixar agir por cerca de 5 minutos, aquecendo brandamente utilizando lamparina ou com a chama do bico
de Bunsen, passando lentamente por baixo da lmina, at que se produza emisso de vapores e, quando estes
so visveis, cessar o aquecimento. Repetir essa operao at completar trs emisses sucessivas. Evitar a
fervura e secagem do corante (adicionar mais corante, caso necessrio, dentro deste perodo para evitar que
a lmina seque porque o esfregao precisa estar coberto permanentemente durante o aquecimento). Este
aquecimento deve ser intermitente, pois importante manter a soluo aquecida durante o tempo previsto;

Procedimento Operacional Padro - POP
Procedimento:
Lavar em gua corrente (jato de baixa presso) para eliminar a fucsina;
Cobrir toda a superfcie do esfregao com a soluo de lcool-cido;
Essa operao dura, em geral, dois minutos;
Lavar em gua corrente (jato de baixa presso) para eliminar o lcool-cido;
Cobrir toda a superfcie do esfregao com a soluo de Azul de metileno durante 30 segundos a 1 minuto e lavar;
Colocar a lmina com o esfregao para cima, sobre o papel limpo, para secar temperatura ambiente ou estufa a 35C;
Observar ao microscpio com objetiva de imerso (100x).

Resultado:
Evidenciar as caractersticas morfotintoriais de micobactrias em geral. No mtodo de Ziehl-Neelsen as micobactrias
permanecem coradas, por serem BAAR, com tonalidade vermelha, enquanto as outras bactrias se mostram azuis.
Procedimento Operacional Padro - POP
Resultado:
Evidenciar as caractersticas morfotintoriais de micobactrias em geral. No mtodo de
Ziehl-Neelsen as micobactrias permanecem coradas, por serem BAAR, com tonalidade
vermelha, enquanto as outras bactrias se mostram azuis.
Diagnstico
Ausncia de BAAR em 100 campos -
< 1 BAAR em 100 campos +
1-10 BAAR em 50 campos ++
> 10 BAAR em 20 campos +++
Controle Externo de Qualidade
Processo que permite que os Laboratrios participantes avaliem
as suas capacidades tcnicas, por meio da comparao dos resultados de
seus exames aos de outros, dentro de uma rede hierarquizada de
Laboratrios.
Biossegurana
Nvel 2
Adequado para qualquer trabalho que envolva sangue humano,
lquidos corporais, tecidos ou linhas de clulas humanas primrias onde
a presena de um agente infeccioso pode ser desconhecido.
Biossegurana
O laboratrio deve estabelecer um conjunto de medidas essenciais de
biossegurana para minimizar os riscos. Essas medidas incluem:
1. Cdigo de prticas
2. Equipamento
3. Projeto e instalaes do laboratrio
4. Vigilncia da sade
5. Formao
6. Tratamento de resduos

Biossegurana Cdigo de Prticas
Descreve as prticas e procedimentos laboratoriais essenciais para
a aplicao de boas (isto , seguras) tcnicas microbiolgicas.
O diretor do laboratrio deve usar o cdigo de prticas para
elaborar instrues por escrito sobre os procedimentos a seguir na
execuo do trabalho de forma segura.
Biossegurana Cdigo de Prticas
Os conceitos mais importantes a incluir nos cdigos de prticas so:
1- Acesso ao laboratrio
2- Responsabilidade do Diretor do Laboratrio
3- Equipamentos de proteo pessoal (EPP)
4- Procedimentos
5- reas de Trabalho
Biossegurana - Equipamentos
Os equipamentos devem ser selecionados, devendo ser:
- Concebidos para prevenir ou limitar o contato entre o operador e o
material infeccioso;
- Feitos de materiais impermeveis a lquidos e resistentes corroso;
- Projetados, construdos e instalados para facilitar o seu funcionamentos
e proporcionar uma fcil manuteno, limpeza, descontaminao e testes de
certificao; os vidros e outros materiais quebrveis devem ser evitados sempre
que possvel.
Biossegurana Projeto e Instalaes
A concepo adequada do laboratrio deve contribuir para a
proteo dos seus funcionrios e proporcionar uma barreira, que proteja as
pessoas da comunidade contra aerossis de TB que possam ter sido
gerados no laboratrio.
Biossegurana Projeto e Instalaes
- preciso haver ventilao adequada e fluxo de ar direcional.
- Deve destinar-se um amplo espao para a realizao segura do trabalho
laboratorial e para sua limpeza e manuteno.
- Paredes, tetos e chos devem ser lisos e fceis de limpar. O cho deve
ser antiderrapante.
- A iluminao deve ser adequada para todas as atividades. No se deve
usar cortinas.
Biossegurana Projeto e Instalaes
- O vestirio, espao para alimentao e descanso deve ficar fora das
reas de trabalho do laboratrio.
- Deve haver um lavatrio com sabo para lavagem das mos em cada
sala do laboratrio, de preferncia perto da sada.
- As portas devem ser prova de fogo, com um visor de vidro.
Biossegurana - Formao
Funcionrios bem formados, informados e conscientes da
segurana so essenciais para prevenir infeces adquiridas no
laboratrio, assim como incidentes e acidentes.
Toda equipe deve receber formao em segurana, essa formao
deve incluir o cdigo de prticas de laboratrio e as prticas e
procedimentos de segurana integradas no manual de segurana.
Biossegurana Tratamento de Resduos
Resduo tudo o que deve ser descartado. O princpio
fundamental para minimizar riscos a partir do lixo que todos os materiais
infecciosos devem ser desinfetados, incinerados e preparados para serem
enterrados ou autoclavados.
Devem usar-se sacos de descarte na separao dos resduos.

Procedimentos de Descarte de
Materiais Contaminados
Deve adotar um sistema de identificao e separao dos materiais
infecciosos e seus recipientes. Incluindo:
- Resduo no contaminado (no infeccioso) que pode ser reutilizado,
reciclado ou descartado como lixo domstico;
- Material cortante contaminado (infeccioso), tal como vidro quebrado,
seringas e lminas;
- Material contaminado para ser enterrado, incinerado ou autoclavado.
Equipamentos de Segurana
Cmaras de Segurana Biolgica (CSB)
So projetadas para proteger as pessoas e o ambiente contra
agentes infecciosos e, dependendo da sua classificao, oferecer nveis
variveis de proteo contra a contaminao para as amostras.
O filtro HEPA, garante que apenas ar livre de micrbios seja
lanado para fora da cmara.
Equipamentos de Segurana - CSB
Existem trs classes de CSB: l, ll e lll.
Os tipos l e ll so mais adequados para uso em laboratrios de risco
moderado e de risco alto.
Equipamentos de Segurana - CSB
Classe l
Este tipo de CSB proporciona
proteo pessoal e ambiental, mas no
oferece proteo dos produtos. Essa falta
de proteo dos produtos pode contribuir
para um aumento das taxas de
contaminao, especialmente quando se
prepara e inocula culturas lquidas.
Classe ll
A CSB classe II oferece proteo
pessoal, ambiental e dos produtos,
proporcionando ento uma maior proteo
dos produtos para no ocorrer contaminao.
Esquema tpico para o fluxo de trabalho de reas limpas para reas contaminadas dentro de uma CSB Classe II. Os materiais limpos
so colocados no lado esquerdo da cmara; as amostras so inoculadas no centro da cmara e as pipetas contaminadas e outros
materiais so colocados nos recipientes de descarte de resduos, no lado direito da cmara. Esta disposio pode ser invertida para
pessoas esquerdinas.


Tubos Falcon
Copo da
centrifugadora
Tubos de
cultura lquida
Pipetas
Vrtex
rea
limpa
rea de
trabalho
rea
contaminada
Proteo
absorvente
da superfcie de
trabalho
Equipamentos de Segurana - Autoclaves
A autoclave, que usa vapor saturado sob presso, o meio mais eficaz de
esterilizar instrumentos, vidraria e solues de meios de cultura, tambm usada
para descontaminao de materiais biolgicos (como culturas de micobactrias).
Dois fatores so essenciais para o perfeito funcionamento de uma
autoclave:
- Todo o ar da cmara deve ser substitudo por vapor;
- A temperatura deve atingir 121C.
Equipamentos de Segurana Vesturio e Equipamento de Proteo Pessoal
O vesturio e os equipamentos de proteo pessoal devem atuar
como uma barreira para minimizar o risco de exposio a aerossis,
salpicos e inoculao acidental. A escolha do vesturio e do equipamento
depende da natureza do trabalho realizado. Sendo eles:
- Jaleco
- Protetores respiratrios
- Luvas

Equipamentos de Segurana Vesturio e Equipamento de Proteo Pessoal
Jaleco
Devem ter manga comprida e abertura atrs. Quando o funcionrio
estiver de p, o jaleco deve estender-se at abaixo da bancada, e quando estiver
sentado, o mesmo deve cobrir totalmente o colo da pessoa;
No devem ser levados para casa para serem lavados, o laboratrio
deve contar com servios de lavandaria prprios;
Devem ser trocados, pelo menos, uma vez por semana e imediatamente
aps terem sido claramente contaminados.
Deve existir um local onde os jalecos possam ser guardados.
Equipamentos de Segurana Vesturio e Equipamento de Proteo Pessoal
Protetores respiratrios
Os protetores devem ser guardados num local conveniente, limpo,
seco e higinico e no devem ser usados fora do laboratrio.
Uma vez colocado, a pessoa no deve tocar a frente do protetor em
nenhuma circunstncia. No puxar o protetor para baixo do queixo ou para o
topo da cabea, quando falar ao telefone ou conversar.
Equipamentos de Segurana Vesturio e Equipamento de Proteo Pessoal
Luvas
Devem usar-se luvas para todos os procedimentos que envolvam o contato
direto ou possam envolver contato acidental com expectorao, sangue, fluidos
corporais ou outros materiais potencialmente infecciosos.
Aps o uso, as luvas devem ser removidas assepticamente e as mos
devem ser lavadas cuidadosamente.
Podem usar-se luvas descartveis de ltex, de vinil sem ltex (claras) ou
de nitrila e os tamanhos corretos (pequeno, mdio ou grande) devem estar
disponveis para todos os indivduos. As luvas devem ajustar-se da forma mais
confortvel possvel e devem cobrir os punhos.
Medidas de emergncia para laboratrios de TB
Derrame de material infeccioso (fora da cmara de segurana biolgica)
O derrame de material infeccioso fora da CSB considerado uma ocorrncia GRAVE.
Os derrames de lquidos infecciosos geram aerossis infecciosos. Todas as pessoas devem sair imediatamente da rea
afetada.
O supervisor do laboratrio deve ser informado do incidente imediatamente e ningum deve entrar na sala durante, pelo
menos, 1 hora, para permitir que os aerossis sejam removidos atravs do sistema de ventilao do laboratrio e haver
tempo para que partculas mais pesadas assentem.
Devem colocar-se avisos indicando que a entrada proibida durante o procedimento de limpeza.
DEVE usar-se vesturio de proteo e protetores respiratrios.
Estrutura Fsica
O projeto e as instalaes so realizados de acordo com a
classificao do risco de transmisso e procedimentos realizados no
laboratrio.
- Baixo risco
- Alto risco
Estrutura Fsica
Laboratrio de tuberculose baixo risco:
- Separao entre a rea de trabalho do laboratrio e a rea de acesso ao
pblico.
- Garantia de descarte adequado de resduos slidos e a existncia de um
lavatrio para as mos.
Estrutura Fsica
Laboratrio de tuberculose alto risco:
- Presena de uma sala que separa o laboratrio das reas pblicas serve
como uma barreira secundria adicional.
Estrutura Fsica
O laboratrio deve ser dividido em:
- rea limpa
- Potencialmente contaminada

O acesso as reas limpas e reas contaminadas deve ser controlado e
regulado pela administrao do laboratrio.


Estrutura Fsica
- rea Limpa
Deve ser reservada para trabalho administrativo e preparaes.

- rea Contaminada
o local onde sero descartados os recipientes de descarte.
Estrutura Fsica
Equipamentos que fazem parte da estrutura fsica devem ser:
- Feitos de materiais impermeveis lquidos e resistentes a corroso;
- Fabricados para serem lisos, sem pontas agudas ou partes mveis
desprotegidas.
- Projetados, construdos e instalados para facilitar o seu funcionamento e
proporcionar uma fcil manuteno, limpeza, descontaminao e testes de
certificao;
- Os vidros e outros materiais quebrveis devem ser evitados sempre que
possvel.
Referncias
- Manual nacional de vigilncia laboratorial da tuberculose e outras micobactrias / Ministrio da Sade, Secretaria de Vigilncia
em Sade, Departamento de Vigilncia Epidemiolgica. Braslia : Ministrio da Sade, 2008. 436 p. : il. (Srie A. Normas e
Manuais Tcnicos)
- http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/manuais/manual_testes_antimicrobianos.pdf
- http://www.cve.saude.sp.gov.br/htm/TB/eventos/Aula_Contr.Qualid.Interno.e.Externo%5BAndreia.M.S.Carmo%5D.pdf
- http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/77949/10/9789248504631_por.pdf
- Segurana e Controle de Qualidade no Laboratrio de Microbiologia Clnica ANVISA