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Cromatografia - o que ?

A Cromatografia uma tcnica de separao baseada na


distribuio dos componentes de uma mistura entre um fluido (fase
mvel ou eluente) e uma fase estacionria.

A fase estacionria pode ser um slido ou um lquido depositado num slido
inerte, empacotado numa coluna, imobilizado superfcie de uma matriz
slida ou espalhado por uma superfcie formando uma camada fina.

A Cromatografia ou escrita da cor tem origem no grego
chroma (cor) + graphein (escrita)

Cromatografia - M. S. Tswett
A cromatografia foi desenvolvida pela primeira vez pelo botnico
russo Mikhail S. Tswett em 1900 (publicada em 1903), durante os
seus estudos sobre a clorofila. Separou os pigmentos de folhas de
plantas numa coluna de carbonato de clcio.
Cromatografia - aplicaes e tipos
A Cromatografia uma tcnica analtica muito poderosa e com
muitas aplicaes.
Algumas das principais reas de
aplicao da Cromatografia:
Anlises Clnicas e Bioqumicas
Investigao Fundamental e Aplicada
Toxicologia, Medicina Legal e Controlo
Anti-Doping
Indstria Qumica e Biotecnolgica
Indstria Farmacutica
Indstria Petroqumica
Indstria Alimentar
Controlo Ambiental
Alguns tipos de Cromatografia (de
acordo com o princpio de separao):

Cromatografia de partio (ex: em
papel)
Cromatografia de troca inica (em
coluna com resina de troca inica)
Cromatografia de excluso molecular
(tambm designada filtrao em gel)
Cromatografia de afinidade
Cromatografia de adsoro (ex:
HPLC e em camada fina de slica)
Filtrao em gel
Fase estacionria: cadeias de polmeros empacotadas
Fase mvel: lquida, geralmente um tampo aquoso






Utiliza-se uma coluna (de vidro) aberta na parte superior,
com uma placa porosa na extremidade inferior,
impedindo a sada da fase estacionria mas permitindo a
sada do lquido (eludo).
Na filtrao em gel, tambm denominada cromatografia de excluso
molecular, a ordem de eluio das substncias depende do seu tamanho.
A ordem de eluio das substncias depende do seu tamanho:
as molculas pequenas entram nos poros das esferas demorando a
atravessar a coluna, enquanto que as grandes passam entre as esferas
sendo eludas primeiro
Filtrao em gel
A eluio de um soluto melhor caracterizada por um coeficiente de distribuio, K
d
:
K
d
= (V
e
- V
0
) / V
i
onde: V
e
o volume de solvente necessrio para a remoo de uma macromolcula da
coluna ( o volume de eluio),
V
0
o volume de eluio das molculas que apenas esto distribudas na fase aquosa
porque so maiores do que os poros do gel ( o volume morto da coluna),
V
i
o volume de solvente includo nos poros do gel e que est disponvel para as
molculas pequenas.



Filtrao em gel
Na prtica, V
i
de difcil determinao pelo que se usa outro coeficiente, o
coeficiente de partio mdio, K
av
. Ignorando a contribuio do volume slido das
partculas do gel para o volume total da coluna, obtm-se:
K
av
= (V
e
- V
0
) / (V
t
- V
0
)

onde: V
t
o volume total da coluna, dado pela altura do gel e pelo dimetro da coluna volume do
cilindro (altura do gel x rea da base).