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Primeira Oficina de Trabalho das Redes Nacionais de Laboratrios

Dra. Maria Ins de Moura Campos Pardini


Pesquisadora do Depto. de Clnica Mdica da FMB
Responsvel pelo Lab. de Biologia Molecular do Hemocentro-Botucatu
Dogma Central da
Biologia Molecular
DNA RNA Protena
RECEPTORES DE CITOCINAS
Duas cadeia antiparalelas, dispostas em dupla hlice.
FOSFATO
-
O P O CH
2

O
O
-

C1
C2
C3
C4
O
OH H
N
N
O
NH
2

ACAR
BASE
NITROGENADA
NUCLEOTDEO
Adenina (A) Timina (T)
Guanina (G) Citosina (C)
A - T
C - G
Bases Nitrogenadas
-

-

C1

C2

C3

C4

O
OH H
-

-

C1

C2

C3

C4

O
OH H
-

-

C1

C2

C3

C4

O
OH H
DNA genmico
Taq polimerase
Primers
Tampo

dCTP
dATP
dGTP
dTTP

94C
5 min
72C
30 s
57C
30 s
PREPARO DAS AMOSTRAS
TRANSCRIO
REVERSA
PCR PROPRIAMENTE DITO
(mimetiza a duplicao)
DETECO


(Expresso do gene)
TATA box: -25 a -30 bp acima do incio do stio
de transcrio.

TFIID: fator de transcrio geral que liga-se ao
TATA box. Contm 2 tipos de sub-unidades
TATA binding protein (TBP): liga-se ao TATA
box e a TAFs.
TBP-associated factors (TAFs): 10-12
protenas que ligam-se ao TBP.

TFIIB: liga o complexo TFIID RNA polymerase.

TFIIF: liga a RNA polymerase ao TFIID.

TFIIE and TFIIH: liga-se ao complexo enzimtico
e inicia a transcrio.

Seqncia iniciadora (Inr): est presente em
alguns genes e ajuda no alinhamento do
complexo.
A Inr liga-se aos TAFs.
Domnios dos fatores de transcrio
Domnio de ligao ao DNA: ancora o FT ao stio correto no promotor ou no
enhancer.

Domnio de ativao: estimula a transcrio por interao com outros FTs
como os TAFs.

Os hormnios
esterides difundem-se
pela membrana e ligam-
se a receptores
citoplasmticos que
estimula a transcrio
de genes alvo
A ligao do hormnio ao receptor promove a
interao desse receptor a uma protena G. A sub-
unidade alfa da protena G estimula a adenil
ciclase, que cataliza ATP AMP cclico
O cAMP liga-se protena quinase A que, no ncleo,
fosforila o fator de transcrio CREB (CRE-binding
protein).
CRE = elemento respondedor de cAMP
TRANSCRIO
TRANSCRIO
RNA
cDNA
DNA
cDNA
TR
RNASE H
TR
TRANSCRIO REVERSA
LIBERAO DO CIDO NUCLEICO
ISOLAMENTO
AMPLIFICAO
(mimetiza a transcrio)
DETECO
NASBA
NUCLEIC ACID SEQUENCE BASED AMPLIFICATION
DETECO DO CIDO NUCLEICO
LIBERAO DO CIDO NUCLEICO
ISOLAMENTO DO CIDO NUCLEICO
AMPLIFICAO DO CIDO NUCLEICO
LIBERAO DO
CIDO NUCLEICO
1 ML DE
PLASMA
TAMPO DE LISE
ISOLAMENTO DO
CIDO NUCLEICO
SLICA
CALIBRADORES
Qa, Qb, Qc
ISOLAMENTO DO
CIDO NUCLEICO
ELUIO
DO
RNA
LAVAGENS
PRIMER
RNA
ELUDO
AMPLIFICAO DO
CIDO NUCLEICO
ENZIMAS
41
0
C
41
0
C
I
S
O
T

R
M
I
C
0
ELETROQUIMIOLUMINESCNCIA
LUZ EMITIDA PELAS SONDAS
QUANTIDADE DE AMOSTRA AMPLIFICADA
LEITURA
LEITURA
PREPARAO
DAS AMOSTRAS
HIBRIDIZAO DAS SONDAS E DAS MOLCULAS
AMPLIFICADORAS DO SINAL
DETECO
Ministrio da Sade, 1998

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