Taciana Soares do Carmo

Edital n 78/2013
Outubro 2013


A aula de hoje tem como objetivo apresentar:

os mtodos de imobilizao;

tipos de suporte;

os efeitos causados pela imobilizao.
Objetivos
Sumrio
Introduo

Mtodos de Imobilizao

Tipos de suporte

Efeitos causados pela imobilizao

Concluso

Referncias bibliogrficas

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Enzimas
So protenas de grandes dimenses que tem como funo
acelerar as reaes qumicas, sem alterar a constante de equilbrio
dessa reao.

Catalisadores biolgicos

As enzimas permitem aumentar a velocidade da reao, a
velocidade atinge um valor mximo.
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Essencialmente as enzimas apresentam trs propriedades
principais:

Estabilidade a capacidade de uma enzima depende de sua
estrutura nativa, alteraes no ambiente podem debilitar essas
interaes.

Especificidade define a afinidade de uma enzima por grupos
especficos em um determinado substrato;

Atividade propriedade de uma enzima atuar na diminuio da
energia de ativao.

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7
Ao contrrio das catlises qumicas, as enzimas
possuem a habilidade de catalisar uma reao sob condies
brandas em solues aquosas neutras sob temperaturas e
presses normais e com alto grau de especificidade
(CHIBATA, 1978).
Interesse no uso das enzimas



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Caracterstica Enzimas Catalisadores
Qumicos
Especificidade ao
substrato
alta Baixa
Natureza da estrutura complexa Simples (geralmente)
Sensibilidade T e pH alta Baixa
Condies de reao
(T, P e pH)
suaves Drstica (geralmente)
Consumo de energia baixo Alto
Formao de
subprodutos
baixa Alta (geralmente)
Separao catalisador/
produtos
Difcil/ cara (enzima livre)
Simples (enz. imobilizada)
Simples (geralmente)
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Stio ativo;

As enzimas no afetam o G ou a constate de equilbrio de
uma reao.





A sequncia total de uma reao enzimtica pode ser
descrita como:




Como se pode verificar a enzima liga-se temporariamente
ao substrato, formando o complexo enzima-substrato.
Posteriormente, libertam-se os produtos da catlise enzimtica,
mantendo-se a enzima inalterada.

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Enzimas Livres Enzimas Imobilizadas

Instabilidade


Rpida perda da atividade
cataltica

No regenerao
Maior estabilidade
(faixas mais amplas de
pH e temperatura)

Menor interferncia de
inibidores e/ou ativadores

Reutilizao


O principal interesse em imobilizar uma enzima obter um
biocatalisador com atividade e estabilidade que no sejam afetadas
durante o processo.

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Imobilizao

Enzimas imobilizadas, so enzimas fisicamente
confinadas ou localizadas em uma determinada regio
do espao, com reteno de sua atividade cataltica e
que podem ser usadas repetida e continuamente.

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O uso de enzimas em
processos industriais
relativamente baixo:
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Gerando prejuzos econmicos e resqucios da
enzima no produto final, no qual necessrio a
desativao da mesma, tornando o processo
antieconmico.
ALTO CUSTO
DIFICULDADE DE
RECUPERAO
DA ENZIMA
INSTABILIDADE
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Vantagens
Reduo do uso de enzima;
Facilidade de controle de processos contnuos;
possvel usar alta dosagem de enzima por volume de reator;
Facilidade de separao dos produtos do meio reacional;
Aumento da estabilidade enzimtica;
Reduo do capital operacional.







Desvantagens

Possvel perda da atividade enzimtica durante o processo de
imobilizao;

Efeitos difusionais devido ao transporte do substrato e do
produto ao stio ativo da enzima imobilizada
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Sumrio
Introduo

Mtodos de Imobilizao

Tipos de suporte

Efeitos causados pela imobilizao

Concluso

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Mtodos de imobilizao
Podem ser classificados em quatro tipos bsicos:

1) Separao por membranas
A enzima encontra-se fisicamente separada do meio de reao
atravs de uma pelcula;

1.1) Encapsulamento
A enzima imobilizada no interior de esferas, o envoltrio
constitudo por um polmero geliforme.
18
E
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Enzima em uma soluo
aq. de alginato de Na
Gotejada
Soluo aq. contendo
on bivalente (Ca
2+
)

Quando a gota de
alginato entra em
contato com a sol.
salina
Forma-se uma esfera, dentro
da qual as molculas de
enzima ficam retidas
E
E
E E
1.2) Membranas fibrosas semipermeveis
Consiste no confinamento da enzima numa dada regio da
soluo, atravs de uma membrana semipermevel.







H risco de desnaturao da enzima.

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1.3) Microencapsulamento
Consiste na preparao de um sistema emulsionado, onde a
enzima est confinada no interior de micelas

O tamanho das microcpsulas e as propriedades da membrana
so determinados pelos fatores: composio da mistura,
concentrao dos reagentes, agitao e tempo de reao.
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2) Entrelaamento em polmeros


Consiste no aprisionamento das molculas de enzima entre as
malhas de um polmero geliforme.
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Enzima + agente
bifuncional + monmero
+ substncia geradora de
radicais livres
tempos depois
gelificao
gel
dividido
3) Adsoro
Consiste da unio entre a enzima e um suporte atravs de
ligaes eletrostticas.




Os suportes podem ser:
- Orgnicos
- Inorgnicos

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Vantagens:
- Procedimento extremamente simples ;
- Ligaes ocorrem por simples exposio;
- Baixos custos;
- Condies brandas de imobilizao;
- Efeitos difusionais so despresveis.

Desvantagens:
- Alta dependncia de pH, solventes, substrato e temperatura;
- Facilmente dessorvidas com a alterao destes parmetros.

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4) Ligao Covalente:
grupos amino
primrios e o anel
fenlico
Grupos reativos
(Ex.: -CHO)
ENZIMA
SUPORTE
Ligao qumica
A enzima ligada ao suporte mediante ligaes qumicas
covalentes.
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Vantagens:
- Maior eficincia;
- Ligao forte entre enzima e suporte;
- Fcil interao enzima/substrato devido a localizao superficial do
catalisador;
- Aumento da termo-estabilidade devido a forte interao com o suporte;
- Aumento da estabilidade operacional.

Desvantagens:
- Susceptibilidade de estruturas ativas da macromolcula aos reagentes
utilizados;
- Diminuio da atividade cataltica devido a forte ligao
enzima/suporte;
- Dificuldade em recuperao dos suportes utilizados.
Sumrio
Introduo

Mtodos de Imobilizao

Tipos de suporte

Efeitos causados pela imobilizao

Concluso

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Existem inmeros materiais inertes que podem ser usados.

A natureza fsica desses suportes pode variar desde materiais
geliformes at superfcies slidas, recobertas com alguma
substncia capaz de interagir com a enzima.

Os suportes so escolhidos por suas propriedades de
solubilidade, grupos funcionais, estabilidade mecnica, rea
superficial, intumescimento e natureza hidroflica ou
hidrofbica.

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Tipos de Suportes
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No existe um mtodo geral de imobilizao e nem um
suporte universal.
Enzima Imobilizao
Variedade de Suportes e
Mtodos
Avaliao da Atividade
do Sistema
Escolha do suporte e mtodo
que apresentam maior
atividade
Tabela Atividade da esterase de Bacillus subtilis imobilizada em
vrios suportes e por diferentes mtodos
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Sumrio
Introduo

Mtodos de Imobilizao

Tipos de suporte

Efeitos causados pela imobilizao

Concluso

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Efeitos causados pela imobilizao
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(a) Enzima imobilizada (E) com stio ativo inalterado e disponvel para aceitar a molcula de
substrato (S), como se mostra em (b). (c) Enzima ligada de modo no produtivo devido
inacessibilidade do substrato ao stio ativo. (d) a distoro da enzima produz uma enzima no
ativa. As situaes c e d podem ser prevenidos usando espaadores ou realizando a imobilizao na
presena do substrato.
Efeitos esfricos e conformacionais

Quando a enzima ligada ao suporte, pode sofrer alguma
mudana na conformao, o que poder abalar sua eficincia
cataltica.

O processo de interao enzima suporte quase sempre
aleatrio. Podendo ocorrer impedimento esfrico.
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Efeitos de microambiente
Quando a enzima ligada a um suporte inerte, ela vai ficar
sujeita a uma circunvizinhaa, algo diferente do que quando
est livre.

Os efeitos da circunvizinhana, que dependem da natureza
fsica e qumica do suporte, podem acarretar uma distribuio
desigual.

O comportamento cintico de uma enzima presa a um suporte
carregado pode diferir daquela aproxima pela enzima livre.
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Efeitos difusionais

Quando a enzima imobilizada sobre ou dentro de um suporte
slido, o substrato deve se difundir do seio da soluo at o
stio ativo da enzima.

Se a velocidade de difuso do substrato menos que a
velocidade de transformao pela enzima, a velocidade
observada mais baixa do que a esperada para uma dada
concentrao.
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Resistncias difusionais externas

Surgem devido ao fato de que o substrato deve ser
transportado do seio da soluo at a superfcie de catlise

Efeitos difusionais internos

Surgem devido movimentao do substrato no interior do
meio cataltico poroso.
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Sumrio
Introduo

Mtodos de Imobilizao

Tipos de suporte

Efeitos causados pela imobilizao

Concluso

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Concluso
Foi possvel de acordo com a aula:

Determinar os mtodos de imobilizao, suas vantagens e
desvantagens.

Verificar os tipos de suporte;

Estudar os efeitos causados pela imobilizao.

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Referncias bibliogrficas
CHIBATA I. Immobilized Enzymes-Research and
Development. Tokyo. Kadansha Ltd, 1978.
KENNEDY J. F. & CABRAL J. M. S. Enzyme Immobilization
in Biotechnology, v. 7a, p. 347-404, 1987.
URGEL, A.L.; AQUARONE, E.; BORZANI, W.;
SCHMIDELL, W. Biotecnologia Industrial vol 3.
Notas de aula
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Exerccios
( ) com a imobilizao a enzima pode ser reutilizada o que gera
economia no processo
( ) as enzimas imobilizadas so de grande estabilidade devido
formao de ligaes covalentes suporte-enzima
( ) existem suportes enzimticos extremamente caro
( ) com a imobilizao a enzima pode perder parte de sua
atividade
( ) enzima purificada pode ser comercializada na forma de lquido
diludo ou concentrado
( ) desejvel que ao final do processo a enzima se torne um
produto padronizado
( ) no se pode adicionar aditivos ao longo do processo de
purificao
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