CICLO DE LOS CIDOS TRICARBOXLICOS

CICLO DEL CIDO CTRICO

Piruvato

Deshidrogenasa

La conexin

la gluclisis,

entre la llamada fase anaerbica de

en donde se metaboliza la glucosa

para convertirla en 2 molculas de cido

pirvico, con la fase aerbica de la gluclisis, que

llevar la degradacin de la glucosa hasta CO
2

H
2
O en el Ciclo de Krebs, consiste en la

descarboxilacin oxidativa del piruvato a

Acetil-CoA.

Esta transformacin es catalizada por un
complejo multienzimtico llamado Piruvato
Deshidrogenasa.
y


Piruvato Deshidrogenasa

La conversin del piruvato a Acetil-CoA por la accin

de la Piruvato Deshidrogenasa es un punto crtico

del metabolismo, particularmente en el hgado,

puesto que disminuye la posibilidad de que el

piruvato se reconvierta en glucosa o en cido lctico.

La conversin a Acetil-CoA compromete al piruvato
a entrar al Ciclo de Krebs, donde puede ser utilizado
como sustrato para la fosforilacin oxidativa, o
puede ser convertido a citrato para ser exportado al
citosol y servir como sustrato para la biosntesis de
cidos grasos e isoprenoides.

Piruvato

Deshidrogenasa

La descarboxilacin oxidativa del piruvato en los

organismos anaerbicos requiere la utilizacin

de un receptor de electrones diferente al NAD
+
,

el cual es frecuentemente una protena ferro

sulfurada.

La conversin es catalizada por una enzima
dependiente de tiamina (vitamina B1) que
tambien produce la acilacin de la Coenzima-A.
Los equivalentes reductores son eliminados por


la produccin de H
2
por la actividad de una
hidrogenasa.
Piruvato
Piruvato deshidrogenasa
Acetil-CoA
Citrato
Citrato Sintetasa
H
2
O
Oxaloacetato
PIRUVATO DESHIDROGENASA
FORMACIN DE ACETIL-COENZIMA A
PIRUVATO

DESHIDROGENASA

UNA REACCIN MUY FCIL DE PONER EN EL PAPEL.
PERO MUY DIFCIL DE LLEVAR A CABO POR LA COMPLEJIDAD DEL SISTEMA
ENZIMTICO NECESARIO PARA QUE SE REALICE
Acetil-CoA
PIRUVATO

Es un complejo formado
por tres enzimas que
transforma el piruvato
resultante de la gluclisis,
en Acetil-CoA por medio
de una reaccin de
descarboxilacin oxidativa.
De esta manera enlaza la
Va de Embden-Meyerhof
con el Ciclo de Krebs.
Piruvato

Deshidrogenasa


La Piruvato deshidrogenasa es un sistema complejo formado
por 60 unidades en los procariotas, 102 en los eucariotas,
organizadas en 3 unidades enzimticas funcionales
Este complejo multienzimtico est estructural y

funcionalmente relacionado con otros dos procesos de gran
importancia para el metabolismo celular la cetoglutrico
deshidrogenasa y la alfa-cetocido deshidrogenasa
responsable de la degradacin de algunos amino cidos.

El complejo est formado por las siguientes enzimas. Cada una
de las cuales requiere un conjunto de cofactores especficos:
Piruvato deshidrogenasa {Tiamina Pirofosfato}

Dihidrolipoil Transacetilasa {Lipoil-CoA}
Dihidrolipoil Deshidrogenasa {FAD y NAD
+
}
1.
2.
3.
Es el paso limitante de toda la reaccin de
conversin del pirvico en Acetil-CoA.
Requiere Tiamina (Vitamina B1) pirofosfato como
cofactor. Por esta razn la tiamina fue llamada en un
tiempo cocarboxilasa.
La enzima est formada por 24 subunidades en los
procariotas y por 30 subunidades en los eucariotas.
El mecanismo central de la actividad enzimtica es
un ataque nucleoflico sobre el carbono 2 (ceto) del
pirvico, con la produccin de un hemi-tioacetal que
libera el CO
2

Al final de la reaccin se libera el CO
2
resultante de


la descarboxilacin del piruvato y el derivado
acilado de la tiamina pirofosfato.
Una reaccin de transacilacin transfiere el
grupo acetil del derivado acetil de la Tiamina
pirofosfato y lo transfiere a la
Coenzima A.
Esto produce Acetil-CoA, que es liberada al
interior de la mitocondria para entrar en el
ciclo de Krebs y convierte la Lipoil-CoA en
la forma reducida del cido Lipoico.
La Dihidrolipoil Transacetilasa es la enzima
mas compleja del grupo y esta formada por
24 subunidades en los procariotas y por 60
subunidades en los eucariotas.
E3 Dihidrolipoil Deshidrogenasa

Para que la reaccin contine se requiere reformar
Lipoil-CoA, para lo cual el cido Lipoico debe ser
oxidado nuevamente.
La forma reducida del cido Lipoico es oxidada
mediante un reaccin que requiere FAD como
cofactor, el cual ser convertido a FADH
2
.
la



Enseguida la forma reducida del FAD, FADH
2
, es
reoxidada por una reaccin ligada a NAD
+
,
producindose NADH.

La dihidrolipoil deshidrogenasa es la parte ms
sencilla del complejo enzimtico y est formada por
12 subunidades tanto en procariotas como en
eucariotas
Por anaplerosis.- La mayor parte del piruvato se oxida a

acetil-CoA, pero una cierta cantidad se convierte en

oxalacetato (proceso anaplertico), permitiendo que la

acetil-CoA se combine con este ltimo para que el ciclo

de Krebs funcione adecuadamente.

Por inhibicin competitiva.- Tanto la acetil-CoA como el
NADH son inhibidores competitivos; de esta manera,
cuando el aporte de acetil-CoA es suficiente a expensas
de los cidos grasos, la enzima es inhibida, evitando as
el desperdicio innecesario de piruvato derivado de la
glucosa.


REGULACIN

2

Por el proceso de fosforilacin defosforilacin.- Existen dos

formas interconvertibles de la piruvato deshidrogenasa:

una, fosforilada, o forma inactiva, la otra desfosforilada, es la

forma activa.


La intervonversin es catalizada por dos enzimas: la
piruvato deshidrogenasa cinasa, que requiere ATP, y la
piruvato deshidrogenasa fosfatasa.
Ambas enzimas forman parte del complejo, asociadas a la
dihidrolipoil transacetilasa.

La principal funcin reguladora es ejercida por la cinasa que

al fosforilar la piruvato deshidrogenasa la convierte en su
forma inactiva; esto ocurre cuando hay exceso de ATP en la
clula.
Cabe destacar el papel estimulador que ejercen sobre la
cinasa la acetil-CoA y el NADH, y el papel inhibidor del
piruvato y el ADP.

REGULACIN

3


Por actividad endcrina.- La actividad del

complejo piruvato deshidrogenasa tambin
es regulada por algunas hormonas.
De entre ellas cabe destacar la insulina que
incrementa la forma activa (desfosforilada)
en tejido adiposo;
Las catecolaminas como la adrenalina
pueden activar la piruvato deshidrogenasa en
el tejido cardiaco.


Piruvato

deshidrogenasa

Localizacin

En las clulas eucariotas la descarboxilacin del
piruvato para producir Acetil-CoA, se realiza dentro de
las mitocondrias. Esto requiere que el piruvato sea
transportado a travs de la membrana mitocondrial
La difusin pasiva del piruvato al interior de la


mitocondria es imposible porque el piruvato lleva
carga negativa.
En consecuencia se sabe que el transporte del
piruvato se hace por medio de una protena
transportadora y requiere el gasto de energa.
una

Piruvato

deshidrogenasa

Localizacin

Una vez dentro de la mitocondria el piruvato es

rpidamente descarboxilado y convertido en Acetil-
CoA. Esta reaccin es irreversible y atrapa la Acetil-
CoA en el interior de la mitocondria.
La Acetil-CoA puede ser transportada fuera de la
matriz mitocondrial utilizando el llamado desvo
(Shuttle) del citrato
El CO2 es pequeo y apolar y difunde fcilmente
fuera de la mitocondria.
En los procariotas, que no tienen mitocondrias, esta



descarboxilacin se realiza en el citosol, o no se
realiza.
Para recordar la secuencia en el
Ciclo de Krebs, recordemos que
est formado por tres fases:
a) Componentes de 6 tomos
de carbono (en verde)
Componentes de 5 tomos
de carbono (en purpura)
Componentes de 4 tomos
de carbono (en azul)
b)
c)
1. Citrato Sintetasa
2. Aconitasa
3. Isocitrato Deshidrogenasa
4. -cetoglutarato Deshidrogenasa
5. Succinil-CoA Sintetasa
6. Succinato Deshidrogenasa
7. Fumarasa
8. Malico Deshidrogenasa

Es una serie de reacciones enzimticas cuya actividad es de
importancia central para todas las clulas vivas que utilizan
oxgeno durante el proceso de respiracin celular.
Constituye una va Anfiblica, es decir: contribuye tanto al
catabolismo, como al anabolismo celular.

Culmina la utilizacin aerbica de la glucosa convirtindola
finalmente en CO
2
y H
2
O, utilizando oxgeno como parte de la

respiracin celular.

Proporciona muchos precursores para producir algunas
molculas fundamentales para la clula, entre ellas el
cetoglutarato y el oxalacetato precursores de algunos
aminocidos.
El ciclo de Krebs ocurre en las mitocondrias de las clulas
eucariotas y en el citoplasma de las clulas procariotas.
Los componentes y reacciones del ciclo del cido ctrico fueron
establecidos por Albert Szent-Gyrgyi y Hans Krebs.


LOCALIZACIN

Los componentes del ciclo se encuentran en las
mitocondrias.
Sin embargo algunas enzimas y metabolitos
tambin se encuentran en el citosol
(extramitocondrial).
Dentro de las mitocondrias, las enzimas se


localizan en la membrana interna y en la matriz
mitocondrial, y prximas al sitio donde radican las
de la cadena respiratoria.
Esta proximidad facilita el adecuado
acoplamiento de ambos procesos.

El ciclo de Krebs
como va anablica

En los organismos aerbicos, el ciclo de Krebs es el anillo de
conjuncin de las rutas metablicas responsables del
catabolismo y degradacin de los carbohidratos, las grasas
y las protenas convirtindolos finalmente en CO
2
y H
2
O.

El Ciclo de Krebs, ligado al proceso de fosforilacin

oxidativa, constituye el proceso donde se produce la mayor
cantidad de energa que finalmente puede ocupar la clula
para el resto de sus funciones y metabolismo.
La acetil-CoA constituye el principal sustrato del ciclo.
Su inicio consiste en la condensacin de acetil-CoA con
oxalacetato, generndose cido ctrico. De aqu uno de los

nombres que ha recibido esta va enzimtica.



Glorieta

Bioqumica"

Una va metablica es anfiblica cuando puede

funcionar tanto en sentido catablico como en

sentido anablico.

Desde este punto de vista nos parece muy adecuado
el considerar al ciclo de Krebs como una Glorieta
Bioqumica", ya que presenta diversos puntos de
entrada y de salida que facilitan el que el material
que llega, sea de fuentes hidrocarbonadas o de otras
fuentes, pueda abandonarlo para formar grasa,
sintetizar amino cidos o regenerar carbohidratos
(gluconeognesis) para su almacenamiento o
utilizacin en otras vas o en otros destinos.

CoA
Citrato Sintetasa

La reaccin inicial del Ciclo de Krebs, es la

condensacin de la acetil-CoA con oxalacetato

(ltimo producto del ciclo) para producir el primero
de los cidos tricarboxlicos que participan en el Ciclo
y por los cuales lleva uno de sus nombres, Ciclo de
los cidos tricarboxlicos (TCA).

Esta reaccin de condensacin es catalizada por la

enzima Citrato Sintetasa (tambin llamada enzima
condensante de Ochoa).

El citrato producido por la enzima, es capaz de
inhibir competitivamente la actividad de la enzima.
La reaccin supone la hidrlisis del enlace tioster de
la acetil-CoA. Esta reaccin es sumamente
exoergnica (G'=-31.4 kJ/mol), motivo por el
cual este paso es irreversible.


Condensacin de la Acetil-CoA con Oxalacetato

Se inicia el Ciclo de Krebs

Aconitasa


El citrato es convertido en isocitrato por medio de la
enzima aconitasa (aconitato hidratasa).
La reaccin tiene lugar en dos pasos:


deshidratacin hasta cis-aconitato (el cual permanece unido a la
enzima) y
rehidratacin hasta isocitrato

Las concentraciones (en condiciones estndar) de citrato

(91%), del intermediario cis-aconitato (3%) y de isocitrato

(6%), conducen la reaccin hacia la produccin de
isocitrato.
Adems, el consumo de isocitrato y la produccin continua

de citrato in vivo, por ley de accin de masas, hace que la

reaccin est desplazada hacia la conversin citrato-
isocitrato.

La aconitasa reacciona en forma asimtrica, actuando sobre
la parte del citrato que deriva del oxalacetato.
Isocitrato

Deshidrogenasa


El isocitrato es oxidado por deshidrogenacin, en una
reaccin catalizada por la enzima isocitrato deshidrogenasa.
La enzima requiere NAD
+
y Mg
++
.
La reaccin se lleva a cabo en dos pasos:


Deshidrogenacin, en la que se forma oxalosuccinato que
permanece unido a la enzima, y
Descarboxilacin para formar el -cetoglutarato.
1.
2.
En esta reaccin irreversible se produce CO
2
y el primer

NADH + H
+
del ciclo.

El citosol posee tambin una isocitrato deshidrogenasa

pero esta isozima requiere NADP
+
como coenzima, a
diferencia de la enzima mitocondrial que participa en el
ciclo de Krebs, la cual requiere NAD
+
.
El isocitrato es oxidado por
deshidrogenacin, en una
reaccin catalizada por la enzima
Isocitrato Deshidrogenasa.
La enzima requiere NAD
+
y Mg
++
. Este ltimo facilita la

liberacin de CO
2
La reaccin se lleva a cabo en dos pasos:

Deshidrogenacin, en la que se forma oxalosuccinato que
permanece unido a la enzima, y
Descarboxilacin para formar el -cetoglutarato.
1.
2.
-Cetoglutarato

Deshidrogenasa

El ciclo prosigue mediante la actividad de la enzima

-cetoglutarato deshidrogenasa, la cual convierte el

-cetoglutarato (o 2-oxo-glutarato) en succinil-CoA.

La -cetoglutarato deshidrogenasa es un complejo

multienzimtico, cuya accin es anloga a la

piruvato deshidrogenasa y utiliza los mismos

cofactores: pirofosfato de tiamina (TPP), cido

lipoico, NAD
+
, FAD y coenzima A.


La reaccin es prcticamente irreversible y en ella se
forma el segundo CO
2
, que proviene del oxalacetato.
Para que la acetil-CoA convierta en CO
2
su radical
acetato, el ciclo ha de dar dos vueltas.

-Cetoglutarato Deshidrogenasa
Succinil-CoA
-cetoglutarato deshidrogenasa un complejo
mu cuya accin es anloga
y utiliza los mismos cofactores: pirofosfato
de tiamina (TPP), cido lipoico, NAD
+
, FAD y coenzima A.
Esta enzima tambin es un complejo de 3 subunidades y el
mecanismo de la reaccin se semejante
la enzima -cetoglutarato
deshidrogenasa convierte
el -cetoglutarato (o 2-oxo-
glutarato) en succinil-CoA.
Succinil-CoA

Sintetasa


El ciclo contina con la liberacin de la CoA y la conversin
de succinil CoA en succinato.
La succinil CoA es un tioster de alta energa (su G de
hidrlisis est en unos -33.5 kJ mol
-1
, parecido al del ATP
que es de -30.5 kJ mol
-1
).

En este punto del ciclo de Krebs se realiza una fosforilacin a
nivel del sustrato, y puede generarse ATP.
Sin embargo, la transferencia del enlace de alta energa no
se hace directamente al ADP, sino que se realiza la
fosforilacin de GDP (guanosina difosfato) que pasa a GTP
(o de IDP, inosina difosfato, que pasa a ITP).
Ambos nucletidos pueden ser utilizados para la formacin
de ATP por accin de una enzima, la nuclesido difosfato
cinasa o fosfocinasa.



GTP
Curiosamente la enzima que cataliza esta reaccin es ms conocida por
su actividad en sentido inverso, por lo cual se llama succinil-CoA
sintetasa, que por su actividad real, por la cual debe llevar el nombre de
succinato tiocinasa
Otras

Enzimas

Una reaccin alternativa en tejidos extra-hepticos

es la transferencia de la CoA de la succinil-CoA al

acetoacetato, para producir acetoacetil-CoA

Esta reaccin, de gran importancia en algunos
estados metablicos, permite la incorporacin de
cuerpos cetnicos al ciclo de Krebs y es catalizada
por la enzima succinil CoA transferasa (o tioforasa).
En el hgado se puede producir la desacilacin
directa de la succinil-CoA por la actividad de una
succinil-CoA deacilasa, producindose succinato y,
lo que es importante, aumentando los niveles de
CoA libre.


Parte

final

del

ciclo


La parte final del ciclo consiste en la reorganizacin
de molculas de cuatro tomos de carbono, hasta la
regeneracin del oxalacetato.

Para que esto sea posible, el grupo metilo presente
en el succinato tiene que convertirse en un carbonilo.
Como ocurre en otras rutas, por ejemplo en la beta
oxidacin de los cidos grasos, tal conversin ocurre
mediante tres pasos: una primera oxidacin, una
hidratacin y una segunda oxidacin.
Estos tres pasos, adems de regenerar oxalacetato,
permiten la extraccin ulterior de energa mediante
la formacin de FADH2 y NADH.


Por accin de la succinato deshidrogenasa, el succinato es
deshidrogenado a fumarato,
Esta enzima utiliza FAD como coenzima, el cual en estado


reducido (FADH
2
) constituye una fuente directa de electrones
para la cadena respiratoria a nivel de la coenzima Q.
Esta es la nica enzima del ciclo integrada a la membrana
mitocondrial interna, directamente ligada a la cadena
respiratoria.

Se renen as, anatmica y fisiolgicamente, el ciclo
transporte de electrones y la fosforilacin oxidativa.
de Krebs el
fumarato
Succinato Deshidrogenasa
FA
2
FAD
succinato
Mlico
Deshidrogenasa
L-malato
Fumarasa
H
2
O

El fumarato esenta luego una
serie de cam ar
oxalacetato, los cuales
c
catalizada por la fumarasa
(fumarato hidratasa) para
form L-malato, luego se
ox o oxalacetato
l deshidrogenasa mlica y el
+
REGULACIN

La regulacin del ciclo de Krebs se realiza principalmente por
la disponibilidad de sustrato y por la retro-inhibicin por
acumulacin de los productos del ciclo

El aumento en la concentracin de NADH, inhibe a la piruvato
deshidrogenasa, a la isocitrato deshidrogenasa y a la citrato sintetasa
La acetil-CoA inhibe a la piruvato deshidrogenasa.
La succinil-CoA inhibe a la succinil-CoA sintetasa y a la citrato sintetasa



Aunque los niveles de ATP son consistentemente conservados in vivo y no
cambian ms del 10% entre el reposo absoluto y el ejercicio ms activo, in
vitro, el ATP es un potente inhibidor alostrico de la citrato sintetasa y de
la -cetoglutarato deshidrogenasa
El Calcio tambin funciona como regulador. Activa tres de las
deshidrogenasas que participan en el ciclo: la piruvato deshidrogenasa, la
isocitrato deshidrogenasa y la -cetoglutarato deshidrogenasa y por lo
tanto aumenta el flujo continuo a travs del ciclo.
Recordemos adem<s que el citrato es un inhibidor de la fosfofructocinasa
(la enzima que es paso limitante de la gluclisis) y acta eficientemente
disminuyendo el aporte de sustrato inicial, piruvato, para el ciclo de Krebs

La proximidad intracelular fsica y funcional

del ciclo del cido ctrico y la cadena
respiratoria, determina que la actividad de
uno dependa de la otra y viceversa.
A su vez, ambas vas metablicas estn
reguladas por las concentraciones relativas
de ATP/ADP y NADH/NAD+.