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Recordando...

HISTOLOGIA = a cincia que estuda a estrutura fina dos


diferentes rgos e tecidos vivos, tanto animais como
vegetais.


PATOLOGIA = o estudo das doenas
Pathos= doena, sofrimento / logos= estudo
- Patologia o estudo da doena desde a causa primria
(etiologia) at seu mecanismo de produo ( patogenia)

HISTOLOGIA X HISTOPATOLOGIA






Por que realizar o exame histopatolgico?
MATERIAIS RECEBIDOS EXAMES REALIZADOS
PC (s) = Pea(s) cirrgica(s) Exame histopatolgico
PN = Peas de Necropsia Exame histopatolgico

Cadver + Peas coletadas
na necropsia
Exame necroscpico +
exame histopatolgico
Esfregaos de punes,
imprints...
Exame citopatolgico
Exames
Histopatolgico
Citopatolgico
Necroscpico
Toxicolgico Complementares
Histopatologia x citopatologia
Fragmento de tecidos
Visualizar a arquitetura tecidual
Avaliar os critrios de malignidade
Diagnstico definitivo
Demorado, mais caro, invasivo
Clulas esfoliadas
No analiso a arquitetura tecidual
Avalio alguns critrios de malignidade
Exame de triagem
Rpido, barato, indolor e pouco invasivo
Qual a importncia da Anatomia Patolgica??
- Auxlio ao Clnico / Cirurgio
- Diagnstico (qual o problema)
- Prognstico (o que acontecer)
- Tratamento qual ?
- Diagnstico post-mortem
O que isso??
Histotcnica
Histotcnica - fases
1. Coleta ou Colheita do material
2. Fixao
3. Clivagem
4. Desidratao
5. Diafanizao
6. Impregnao
7. Incluso
8. Microtomia
9. Colorao de rotina
10. Montagem
1. Coleta / Colheita do material
- Quem realiza esta fase?

- Tipos: in vivo (bipsia) x post-mortem

Bipsia = a remoo de tecido de pacientes vivos para
exame diagnstico (amostra obtida por bipsia)

- Acondicionar o material, identificar e colocar a substncia
fixadora de modo adequado so fundamentais neste
momento!


1. Coleta / Colheita do material
- Erros nesta fase:

Fragmento no representativo da leso
Fragmento grande
Diversos fragmentos sem identificao do local
Frasco imprprio
Material em substncia inadequada
Substncia fixadora mal preparada ou em pouco volume

-Exames prvios
Necropsia: Autorizao do proprietrio!!!
Requisio
-Dados do animal
-Histrico
-Localizao/ descrio
-Suspeita clnica
Clnica Escola de Medicina Veterinria Dr. Paulo Alfredo Gissoni
REQUISIO PARA ANATOMIA PATOLGICA - REG.UCB:_______

Policlnica no________________
Data:__________________
Dados do animal:
Espcie:_________ Idade:__________ Sexo:__________________
Raa:____________Nome:__________
Proprietrio:_____________________________________________

Material encaminhado/ Tipo de exame:
( ) Pea Cirrgica / Quantidade de peas: ______ / Histopatologia
( ) Peas de necropsia / Quantidade de peas: ______ / Histopatologia
( ) Cadver / somente Necropsia (Macroscopia)
( ) Cadver / Necropsia (Macroscopia) com Histopatologia (Microscopia)

Suspeita clnica:__________________________________________
Histrico:
- Local da(s) pea(s) ou rgo (s) encaminhado (s):__________________
- Evoluo: ( ) horas ( ) dias ( ) meses ( ) anos
- Exames prvios com resultados: (se relevantes):
______________________________________________________
______________________________________________________
______________________________________________________

- Nas tumoraes mamrias:
- Usou anticoncepcional ? ( ) sim ( ) no - Castrado ? ( ) sim ( ) no
- Pseudociese? ( ) sim ( ) no
- Nas bipsias cutneas: exames/ tratamentos anteriores?
______________________________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________

- Demais informaes relevantes:
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______________________________________________________________
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..............................................................................................
Mdico Veterinrio Requisitante (cont. no verso)
Preencher pelo proprietrio/responsvel no caso de necropsia:
Eu,________________________________, identidade n__________________
expedida por __________, responsvel pelo presente cadver , autorizo o exame de
necropsia neste. Informo que o referido animal morreu s_____h. do dia_______,
tendo sido trazido: ( ) fresco ( ) resfriado ( ) congelado.
( ) Autorizo sua utilizao em aulas prticas.
( ) No autorizo sua utilizao em aulas prticas.
______________________________________
Assinatura do responsvel
Para preencher no laboratrio:
Data de entrada / responsvel pelo recebimento : _________ / __________

- Macroscopia da(s) pea(s) cirrgica(s): Data da clivagem:________
- Clivado por:________ n frag.:_____n cassetes:____ n blocos:______
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
- Microscopia:
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________

- Concluso:_______________________________________________________


__________________________ ____________________________
Assinatura do patologista Data de liberao do laudo
2) Fixao
Conceito: o tratamento dado a um tecido a fim de se evitar a
deteriorizao do mesmo por suas prprias enzimas (autlise) ou
por microrganismos. Preserva a morfologia e a composio qumica
do tecido atravs da insolubilidade das protenas.
X
Sangue
O2
Mitocndrias
Bomba Na/K
Lisossomos
Fixadores qumicos:

Formol a 10 %
Bicromato de potssio
-Simples Bicloreto de mercrio
Etanol
Metanol

Lquido de Bouin
-Compostos Lquido de Zenker
Lquido de Helly

Fixadores fsicos:

-Frio (congelamento/cmaras frigorficas)
-Calor (fixao de esfregaos)
Formol a 10%
Frmula:
100ml de formol 40% (soluo estoque)
900 ml de gua corrente

Ou

1 litro de formol 40% (soluo estoque)
9 litros de gua corrente
Bom fixador
- agir rapidamente, matando a clula
- no interferir na colorao, aumentando a afinidade do
tecido pelo corante
- preservar morfologia e composio qumica teciduais
- evitar a autlise e o crescimento de bactrias e fungos
- no produzir arterfatos ou estruturas artificiais
- ter alto poder de penetrao
- endurecer sem deformar
- ser de baixo custo / "atxico"
-ter ao conservante
Requisitos para uma boa fixao

- intervalo mnimo entre a colheita e a fixao
- contato superfcies/ substncia fixadora
- fixador = 20x o volume da pea
- espessura da pea = 1-6 mm
-boa colheita
Cadver
12h
48h
1 semana
Fresco
Resfriado
Congelado
2. Fixao
- Cuidados nesta fase:

- Relao tamanho / quantidade do material com o
volume da substncia fixadora 20 x o vol da pea

- Substncia fixadora: bem preparada

- Relao material x frasco adequado boca larga


2. Fixao
- Erros nesta fase:

Fragmento grande
Frasco imprprio - pequeno
Material em substncia inadequada
Substncia fixadora mal preparada ou em pouco volume


Descalcificao
- Quando realizar esta fase adicional ?
3. Clivagem
- a seco da pea histolgica fixada, selecionando a rea
de maior interesse para estudo
- Nesta fase feita uma descrio macroscpica do material





3) Clivagem
Descrio macroscpica de PC
1- Local da (s) pea (s)
2- Quantidade: pea nica/ retalho/ fragmentos
3- Formato: irregular/ arredondado/ ovalado
4- Tamanho: ...x...x... cm / .... cm dimetro
5- Superfcie externa
6- Consistncia aos cortes
7- Superfcie de corte
- So consideradas as seguintes caractersticas:
- Superfcie externa
Tonalidade
Lisa / rugosa
Recoberta por pele (parcial, total, tricotomizada)
lcera/ ntegra
Envolta por tecido (do tipo adiposo, conjuntivo)
Nodular/papilomatosa/deprimida/ulcerada/crostosa
Coberta de sujidades/sangue/muco/pus
Presena de ectoparasitas
- Consistncia aos cortes
Frivel/ gelatinosa/ bem macia/ macia/ esponjosa
Elstica/ firme-elstica/ firme/ rangente/ ptrea
Ora macia, ora firme/ deixando fluir lquido
-Material: Navalha, faca, bisturi
-Tamanho: 2 a 6 mm
- Finalidade
- Superfcie de cortes
Tonalidade
Irregular/ lisa (compacta)/ fasciculada/ marmreo/
Aspecto fibroso/ untuosa/ lobada ou multilobada
cstica ou policstica (...cm de dimetro)
Contedo dos cistos: consistncia (lquido, gelatinoso, caseoso, purulento...)
Tonalidade (brancacenta, pardacenta, rsea, enegrecida, ora.... ora...)
Odor (ptrido, inodoro, amoniacal...)
Planos de corte
3. Clivagem
- Cuidados nesta fase:
- Material afiado no serrar

- Tamanho adequado do material cassetes/lamnula

- rea representativa do que se quer estudar- planos de
corte

- Acondicionamento adequado nos cassetes mesma
consistncia dos fragmentos


Erros nesta fase ?
4) Desidratao (6h)
5) Diafanizao (3h)
(clarificao)
6) Impregnao pela parafina (2h) - 56 a 58
o
C
Remoo da gua do tecido por
substncias miscveis com a gua
Remoo do lcool por substncias
miscveis com o lcool e com a
parafina
4. Desidratao
- Cuidados nesta fase:
- Desidratao gradual em lcool etlico... evitar
artefatos
- Substituio peridica do lcool
- Tempo de permanncia do lcool

- Obs. Nesta fase ocorre retrao tecidual

Erros nesta fase ?
5. Diafanizao
- Cuidados nesta fase:
- - Substituio peridica do Xilol (xileno)

- Tempo de permanncia no Xilol

- Obs. Nesta fase os fragmentos ficam translcidos
(difanos)
Erros nesta fase ?
6. Impregnao pela parafina
- Cuidados nesta fase:
- Substituio peridica da Parafina

- Tempo de permanncia na Parafina

- Temperatura adequada
Erros nesta fase ?
7) Incluso em parafina
Parafina fundida .... 56
o
C .... solidificar temperatura ambiente
- molde apropriado
- altura = 1,5 cm
7. Incluso em parafina
- Cuidados nesta fase ?

- Obedecer critrios de consistncia e tamanho dos
fragmentos, de acordo com a lamnula


- Erros nesta fase ?
8. Microtomia
- Cuidados nesta fase ?

- Navalha afiada
- Espessura dos cortes
- Tcnico com experincia
- Temperatura do banho-maria
- Temperatura da estufa

- Erros nesta fase ?
9) Colorao de rotina: H. E.
- corantes: Hematoxilina e Eosina
- Hematoxilina ..... corante bsico ..... cora estruturas
(natural / vegetal) cidas
Por ex. ncleo


- Eosina ..... corante cido ..... cora estruturas
(artificial) bsicas
Por ex. citoplasma
9. Colorao de rotina
- Cuidados nesta fase ?

- Preparo adequado dos corantes
- Respeitar os tempos de cada sub-fase da colorao
- Substituio peridica das substncias utilizadas

- Erros nesta fase ?
-Coloraes especiais (histoqumicas)- exemplos:

- reaes que evidenciam a natureza qumica das substncias
contidas nos tecidos
- Azul de Toluidina

- PAS

-Tricrmico de Masson

- Impregnao pela prata (Gomori)
- Coloraes para citopatologia- exemplos:
-Hematoxilina e Eosina
-Romanowsky (Diff-Quick, Giemsa, Wright)
-Papanicolau
10) Montagem
-Blsamo do Canad / Goma de Damar
Citolgica
Histolgica
10. Montagem
- Cuidados nesta fase ?

- Cobrir adequadamente os cortes histolgicos com as
lamnulas

- Utilizar o Blsamo na diluio correta evitar bolhas

- Erros nesta fase ?