Por: Juana iris Ruiz huarnaga

Anah Portocarrero Ramos

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
LA AMAZONIA PERUANA


En 1973, Cohen obtuvo el primer plsmido vector,
el PSC101, y en 1974 introdujo en este plsmido los
genes que codifican los factores de resistencia a la
penicilina. Posteriormente se consigui clonar en E.
coli los genes que codifican los RNA ribosmicos de
Xenopus levis introducidos en el plsmido PSC101;
stos fueron los primeros genes de eucariotas
transcritos a RNA en una bacteria.
MANIPULACIONES GENTICAS
A partir de entonces se ha
conseguido, mediante la
recombinacin del DNA, aislar y
multiplicar en bacterias un buen
nmero de genes de eucariotas, lo
que ha servido para adquirir
informacin acerca de sus
localizaciones en el cromosoma, la
estructura en mosaico y expresin
de genes de organismos superiores
y de virus, y para la obtencin a
nivel industrial de productos de
inters.
Actualmente se dispone de copias
de estos genes de organismos
superiores -por ejemplo, de los de
diversas globulinas humanas y de
rata, de inmunoglobulinas de rata,
de la ovalbmina de pollo, de la
lisozima, de hormonas como la
somatostatina, insulina, hormona
humana de crecimiento y del
interfern, etc.- capaces de
expresarse en bacterias.
En la actualidad, gracias a la manipulacin gentica de las
bacterias, se han podido obtener sustancias qumicas de
inters para el ser humano, protenas que se usan como
vacunas o drogas para curar determinadas enfermedades
Biotecnologa: Conjunto de tcnicas que utilizan las potencialidades de
los organismos vivos o de compuestos procedentes de ellos (enzimas,
hormonas, antibiticos .), para la obtencin de productos, bienes y
servicios
Biotecnologa moderna: en los ltimos
30 aos, avances en microbiologa,
inmunologa e ingeniera gentica, con
manipulacin selectiva y programada de
material gentico
Biotecnologa contempornea
Clonacin, nanotecnologa,
biomateriales, reprogramacin
Biotecnologa tradicional:
procesos de fermentacin
de bacterias y levaduras
desde hace miles de aos
APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGA
ROJA - Aplicaciones mdicas
Obtencin de nuevos productos y frmacos por organismos
Produccin de Ac monoclonales
Desarrollo de terapias gnicas y celulares
VERDE Aplicaciones agrcolas y ganaderas
Desarrollo de cereales resistentes a plagas
Desarrollo de animales resistentes a enfermedades
Desarrollo de plantas que expresen pesticidas
AZUL Aplicaciones acuticas y marinas
Uso de plantas y productos marinos para obtener nuevos frmacos
Restauracin y preservacin de especies acuticas
Uso de genes de organismos acuticos para obtener resistencias
BLANCA Aplicaciones a procesos industriales
Produccin de nuevos compuestos
Desarrollo de combustibles nuevos
Uso de bacterias para eliminar vertidos de petrleo
APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGA
Se descubri posteriormente que esta prctica se vena haciendo en la
naturaleza de forma espontnea desde hace millones de aos en los
vegetales a travs de la bacteria llamada Agrobacterium tumefaciens.
ORGANISMOS TRANSGNICOS
Organismo transgnico: es aqul que ha sufrido la alteracin de su material
hereditario (genoma) por la introduccin artificial (manipulacin gentica) de un
gen exgeno, esto es, proveniente de otro organismo completamente diferente.
Aparentemente no existen barreras para mezclar los genes (DNA) de dos
especies diferentes. Existen bioherramientas moleculares para componer y
descomponer al DNA, intercambiando as fragmentos especficos de ADN de
distintas especies e incluso transferirlos a bacterias.
Las bacterias producen hoy en da, protenas humanas por ingeniera gentica
como el interfern, la insulina y la hormona del crecimiento, de gran
importancia en la medicina.
La Ingeniera Gentica
Conjunto de tcnicas, nacidas de la Biologa molecular, que permiten
manipular el genoma de un ser vivo, introduciendo genes en un organismo
que carece de ellos
Enzimas de restriccin
Capaces de cortar el ADN por puntos
concretos
ADN Recombinante
Segmento de ADN extrao intercalado
en un ADN receptor
Se realiza por
Se obtiene
Tcnicas biotecnolgicas
Recombinacin de ADN
Secuenciacin del ADN
Reaccin en cadena de la polimerasa
Aplicaciones diversas

Incluye
INGENIERA GENTICA
Endonucleasas de
Restriccin:

Enzimas que pueden cortar el
ADN y lo hacen en secuencias
concretas
Enzimas que las bacterias usan
para destruir ADN que ingresa a
ellas, por ejemplo ADN de virus
bacterifagos
Enzimas: Endonucleasas de restriccin
Enzimas: Endonucleasas de restriccin
Se conocen mas de 1200
enzimas de restriccin
Eco RI (E. coli) reconoce
secuencias GAATTC y
corta entre G y A
1 ADN plsmido
2 ADN extrao
3 Corte del plsmido y ADN
extrao con Eco RI
(endonucleasa de restriccin)
4 Formacin de
extremos cohesivos
5 Formacin de ADN
recombinantes
6 Accin de ADN ligasa
que sella los extremos
Construccin de ADN recombinante
Clonacin del ADN
La clonacin de un gen consiste en introducirlo en una clula de modo que se
copie y se mantenga

El gen se inserta en un ADN llamado vector de clonacin (plsmidos),
capaz de entrar y replicarse de forma independiente en una clula husped

Resultado: ADN recombinante. Permite obtener grandes cantidades del gen
insertado en la clula hospedadora adecuada apropiada

Las genotecas de ADN permiten guardar indefinidamente el ADN de un
organismo

Un plsmido recombinante en una bacteria se replica con ella pudiendo
obtenerse y aislarse millones de copias de dicho plsmido
Clonacin del ADN
1. Obtencin de plsmido
recombinante
2. Transformacin de
bacterias
3. Seleccin de bacterias
transformadas
4. Crecimiento de bacterias
transformadas
5. Aislamiento de los
plsmidos recombinantes
Proceso de clonacin de un gen en bacterias
Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction)
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), es una tcnica que permite
amplificar entre cientos de miles y millones de veces, en el transcurrir de
pocas horas e in vitro, pequeas cantidades de ADN.

Es un mtodo alternativo a la clonacin muy rpido y eficaz

Por su alta sensibilidad, esta tcnica permite identificar un gen a partir de un
solo cabello, una clula somtica o un espermatozoide.

Ha facilitado, y en muchos casos hecho posible, la tarea de identificacin de
personas, por ejemplo de hijos de desaparecidos, mediante el anlisis de
muestras del nio y de su abuela materna

Aplicaciones mdicas de la PCR en nuevas estrategias de diagnstico:
Detectar agentes infecciosos como los virus de las hepatitis B y C
Regiones del genoma del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV)
Diagnosticar la presencia o ausencia de HIV en recin nacidos de madres
seropositivas.
Diagnstico de hemofilias A y B, la distrofia muscular y la fibrosis qustica, o
reconocer mutaciones de genes vinculadas con enfermedades oncolg icas
El mtodo se basa, en la realizacin de tres reacciones sucesivas llevadas
a cabo a distintas temperaturas. Estas reacciones se repiten cclicamente
entre veinte y cuarenta veces
Primer paso: La muestra se calienta hasta lograr la separacin de las dos
cadenas que constituyen el ADN, "desnaturalizacin".
Segundo paso: la temperatura se reduce para permitir el "apareamiento" de
cada una de dos cadenas cortas de oligonucletidos (inicidores o primers)
con cada una de las hebras separadas del ADN molde.
Los primers son sintetizados en el laboratorio y diseados de manera tal
que permiten definir los lmites del tramo de ADN que se desea replicar
Tercer paso: la ADN polimerasa produce la extensin de los primers, en el
espacio comprendido entre ambos, sintetizando las secuencias
complementarias de las hebras del ADN molde (la T la condiciona la
polimerasa
Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction)
Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction)
Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction)
ADN polimerasa de E. coli
se desactiva a la alta
temperatura de la
desnaturalizacin del ADN,
por lo cual deba
agregarse enzima fresca al
comenzar el tercer paso
de cada ciclo.
Este inconveniente fue
solucionado de manera
ingeniosa cuando se la
reemplaz por su
equivalente de la bacteria
"termfila" Thermus
aquaticus
http://www.youtube.com/watch?v=N6
kBo_pTOA8
Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction)
APLICACIN: amplificar ADN
Fragmentos de ADN antiguos (momias,
fsiles..)
ADN de la escena de un crimen
ADN de clulas embrionarias para
diagnstico prenatal
ADN de genes virales
El plsmido Ti o T-ADN
de Agrobacterium
contiene genes (onc) que
provocan una mayor
produccin de hormonas
de crecimiento con la
formacin del tumor o
agalla.
Se eliminan de Ti los genes onc y se sustituyen por otros genes que interese
clonar, se habr obtenido un sistema eficaz para introducir ADN interesante a la
planta, evitando la aparicin de la enfermedad
INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente
Tradicionalmente se han mejorado los cultivos por seleccin de ejemplares
Actualmente se mejoran caractersticas con tcnicas de ADN recombinante:
-Plantas transgnicas-
INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente
Actualmente se consiguen mejorar diferentes caractersticas con tcnicas de
ADN recombinante -Plantas transgnicas-
FASES:
1. Transferencia
de genes
2. Regeneracin
de plantas
completas
Resistencia a herbicidas
(mejora vegetal)
Resistencia al glifosfato herbicida
no selectivo, con gen de E. coli
resistente, clonado e incorporado
Resistencia a plagas, con toxina de
Bacillus turingiensis
Resistencia a virus, con protenas
de la cpsida de dicho virus
Plantas farmaceticas
(biofarmacetica)
Produccin de protenas humanas,
vacunas, anticuerpos, mas econmicas y
contienen mecanismos de modificacin
postraduccional de las protenas, a
diferencia de las bacterias
Mejora del producto (alimentos)
Arroz transgnico arroz dorado- con
caroteno (vit A)

INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente
Medio Ambiente:Utilizacin de organismos genticamente modificados para eliminar
contaminantes

INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente
Biorremedacin: bacterias modificadas para degradar hidrocarburos
Bioadsorcin: Bacterias modificadas que
adsorben en su superficie metales pesados
INGENIERA GENTICA y MEDICINA
APLICACIONES
Obtencin de productos
farmacuticos
Medicina forense
Diagnstico de
enfermedades
Terapia gnica
Insulina
Interfern
H. De crecimiento
Factor VIII
Marcadores
genticos
Huella gentica
Deteccin en personas o
fetos enfermedades
hereditarias por tcnicas
de ADN recombinante
Insercin de genes
funcionales para corregir
un defecto gentico
En clulas somticas
En clulas germinales
La forma activa de la insulina consta de dos polipptidos (A y B), que estn
codificados por partes separadas de un mismo gen. Estos se pueden obtener
en cultivos bacterianos separados.
Promotor
Promotor
Subunidad B del
gen de la insulina
Subunidad A del
gen de la insulina
Extraccin de
las protenas de
fusin
Separacin de
los polipptidos
A y B
Formacin
de insulina
activa
Protena de fusin
con subunidad B del
gen de la insulina
Transformacin
en E. coli
Protena de fusin con subunidad A
del gen de la insulina
Produccin de insulina humana