Aguirre Coria Claudia

Corona Leo Lizbeth Sandra

Olvera Rodrguez Carlos
Flores Jurez Geovani
Espinosa Monsalvo Maribel
Objetivo:

Conocer las tcnicas ms comunes para la
deteccin de estos microorganismos patgenos.

Medios que se utilizaran:
Agua peptonada.
Caldo lisina desoxicolato XLD.
Agar verde Rapapport Vassiliadis.
Agar xilosa brillante.










Medios para la identificacin
bioqumica.

Agar triple azcar hierro TSI.
Agar lisina descarboxilasada LIA.
Agar citrato de Simmons.
Caldo urea.

1.-Preenriquecimiento:

Transferir 25g o 25ml del matraz con 225ml de agua
peptonada, incubar a 35 C durante 24 h.

Agua peptonada

Asegura a mantener el pH durante 24horas, lo que
sumado al perodo de incubacin permite el incremento de
clulas que son sensibles a la disminucin del pH.
A stos medios se les puede adicionar sustancias que
contrarresten las sustancias inhibidoras que estn
presentes en algunos alimentos; asimismo se debe
asegurar el pH que es un factor muy importante para el
crecimiento de Salmonella.





2.-Enriquecimiento:

Transferir 0.1ml del cultivo anterior a un tubo con 9.9ml
de caldo Rapapport Vassiliadis.
Incubar 24 h a 42 C.

Caldo Rapapport Vassiliadis

Las peptonas proporcionan los nutrientes necesarios
para el desarrollo del microorganismo.
El cloruro de sodio ayuda a mantener el equilibrio
osmtico.
El verde de malaquita y el cloruro de magnesio,
favorecen el crecimiento de Samonella.
El fosfato de potasio controla el pH del medio.


3.- Aislamiento:

Sembrar por estra simple dos placas de agar XLD Y
BGA. Incubar 24 h a 37 C.

Precipitado negro en el
centro de las colonias
agar XLD
Las colonias tpicas de
Salmonella son
traslcidas, ligeramente
rojas a rosa con halo rojo
brillante.
La presencia del desoxicolato de sodio es el agente que
inhibe a los microorganismos Gram positivos.
La xilosa es fermentada por casi todos los microorganismos
entricos a excepcin de Shigella.
La lactosa y la sacarosa inducen la produccin de cido por
los coliformes.
El tiosulfato de sodio y el citrato frrico de amonio constituyen
el sistema indicador de la formacin de cido sulfhdrico
produciendo un precipitado negro en el centro de las
colonias.
Escherichia coli, Klebsiella, Enterobacter y algunas especies
Proteus pueden utilizar mas de un carbohidrato y producen
colonias amarillo brillante.
El gnero Salmonella desarrolla colonias rojas con centro
negro por la produccin de cido sulfhdrico.
Shigella, Providencia, y algunas especies Proteus no utilizan
ningn carbohidrato y desarrollan colonias traslucidas.
Citrobacter desarrollas colonias amarillas con centro negro.



Agar xilosa lisina desoxicolato XLD

Agar verde brillante BGA
Medio selectivo para el aislamiento de Salmonella
(excepto S. Tyfhi y Shigella)
La selectividad de este medio, se basa en la concentracin
del verde brillante, que inhibe las bacterias Gram positivas y
la gran mayora de los Gram negativos.
La lactosa y la sacarosa permiten diferencia la flora
acompaante lactosa positiva y lactosa negativa-sacarosa
positiva, basndose en caractersticas de Salmonella de no
degradar dichos carbohidratos.
Las colonias tpicas de Salmonella son traslcidas,
ligeramente rojas a rosa con halo rojo brillante.
Los organismos fermentadores de lactosa y sacarosa que
desarrollan en el medio se diferencian fcilmente por la
formacin de colonias amarillo verdosas rodeadas de una
zona amarillo verdosa intensa.


4.- Identificacin bioqumica:

Seleccionar al menos 2 colonias tpicas sospechosas que se
encuentren bien aisladas de cada placa. Transferir con un asa
cada colonia seleccionada a la siguiente serie de tubos.

Agar TSI: Sembrar por picadura en el fondo y por estra en la
superficie.
Agar LIA: Sembrar por picadura en el fondo y por estra en la
superficie.
Agar Citrato de Simmons: Sembrar por picadura el fondo y
por estra el la superficie.
Caldo urea: Inocular el caldo.

Incubar todos los tubos de pruebas bioqumicas a 35o C por 24 h.
comprobar los resultados de las pruebas con la tabla de
resultados de los microorganismos enteropatgenos.

Agar triple azcar de hierro TSI
Para diferenciacin de Enterobacterias basndose en
las capacidad para utilizar la glucosa, lactosa y sacarosa
los cual permite el reconocimiento y exclusin del
genero Proteus. Se puede observar formacin de
sulfuros.
La fermentacin de la lactosa y sacarosa se observa en
la superficie y de la glucosa en el fondo, con formacin
de cido que se manifiesta por cambio de color del
indicador Rojo de fenol que vira de anaranjado rojizo a
amarillo.
La combinacin del citrato frrico de amonio y tiosulfato
de amonio permite la deteccin de sulfuro de hidrogeno
por la formacin de un precipitado negro.

Agar lisina descarboxilasa LIA
La peptona de gelatina funciona como soporte de crecimiento,
el extracto de levadura proporciona la fuente de vitaminas
necesarias y la dextrosa el carbohidrato fermentable.
En este medio se observa la fermentacin de glucosa,
produccin de cido sulfhdrico, la descarboxilacin u
desaminacin de la lisina.
Los microorganismos tienen enzima descarboxilasa,
descarboxilan el aminocido lisina a cadaverina (amina
primaria, liberando CO
2
) , debido a la alcalinidad, el pH se
modifica con los siguientes resultados: La prueba se
considera POSITIVA si la coloracin en el fondo se observa
morada o violeta-prpura.
NEGATIVA si la coloracin en el fondo es amarilla y la
superficie permanece del color del medio, ya que solo hay
fermentacin de glucosa.
La desaminacin de la lisina a cido cetocarbnico, este forma
compuestos pardo-rojizos en el pico de flauta del medio con la
sal de hierro y por la accin del oxigeno.
La formacin del cido sulfhdrico da una coloracin negra
debida al sulfuro de hierro producido.

Agar Citrato de Simmons
Para la identificacin de
Enterobacterias, basndose en el
citrato como nica fuente de
carbono.
El cloruro de sodio mantiene el
equilibrio osmtico del medio.
Cuando las bacterias utilizan el
citrato, el medio se alcaliniza y
cambia de color inicial verde
(neutro), que esta dado por la
presencia de azul de bromotimol
a color azul (alcalino, prueba
positiva)
La reaccin negativa se
manifiesta por la ausencia de
crecimiento y no hay cambio de
color.
Caldo urea
Utilizacin de urea como fuente de
carbono.
La enzima ureasa hidroliza la urea en
amoniaco y anhdrido carbnico, ante la
variacin del pH por la alcalinizacin el
indicador Rojo Fenol, vira de amarillo
claro a ligeramente rosado o rosa
mexicano.
Se utiliza solamente para la deteccin de
la ureasa en especies del gnero
Proteus.
Si los nutrientes suministrados por el
extracto de levadura se consumen antes
que la bacteria muestre crecimiento no
podr determinarse con exactitud su
capacidad de hidrolizar urea.
Pero si es capaz de hidrolizar la urea,
pero no utilizar el amoniaco como fuente
de nitrgeno, no se produce crecimiento
y puede dar un falso negativo.

Caldo Rapapport Vassiliadis

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA

Cloruro de magnesio hexahidratado. 29.0
Peptona de casena. 4.0
Cloruro de sodio. 8.0
Peptona de soya. 1.0
Fosfato monobsico. 0.4
Verde de malaquita. 0.036

Agar xilosa lisina desoxicolato XLD

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA


Agar. 13.5
Citrato frrico. 0.8
Cloruro de sodio. 5.0
Desoxicolato de Na. 2.5
Extracto de levadura 3.0
Lactosa. 7.5
L-Lisina. 5.0
Rojo fenol. 0.085
Sacarosa. 7.5
Tiosulfato de Na. 6.8
Xilosa. 3.5



Agar verde brillante BGA

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA


Agar. 20.0
Cloruro de Na. 5.0
Extracto de carne.3.0
Lactosa. 10.0


Peptona especial. 10.0
Rojo de fenol. 0.08
Sacarosa. 10.0
Verde brillante. 0.0125


Agar triple azcar de hierro TSI


FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA
Agar. 13.0
Cloruro de Na. 5.0
Dextrosa. 1.0
Lactosa. 10.0
Peptona especial. 20.0

Rojo de fenol. 0.025
Sacarosa. 10.0
Sulfato de hierro y
amonio. 0.2
Tiosulfato de Na. 0.2


Agar lisina descarboxilasa LIA

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA
Agar. 13.5
Citrato frrico de amonio. 0.5
Dextrosa. 1.0
Extracto de levadura. 3.0
L-Lisina. 10.0
Peptona de gelatina. 5.0
Prpura de bromocresol. 0.02
Tiosulfato de Na. 0.04



Agar Citrato de Simmons

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA
Agar. 15.0
Azul de bromotimol. 0.08
Citrato de Na. 2.0
Cloruro de Na. 5.0
Fosfato dihidrogenado de amonio. 1.0
Fosfato dipotsico. 1.0
Sulfato de magnesio. 0.2



Caldo urea

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA
Extracto de levadura. 0.10
Fosfato monopotsico. 9.10
Fosfato disdico. 9.50
Rojo de fenol. 0.01
Urea. 20.0