Enzimas

DEFINICIN
ENZIMA
PROTENA BIOCATALIZADORA
Actan en
pequeas
cantidades
sobre gran
cantidad de
sustrato
No alteran su
estructura ni
funcin luego
de actuar sobre
el sustrato
Disminuye energa de
activacin, acelera
reaccin y no afecta
concentraciones finales
en equilibrio
Pueden ser
endo o
exocelulares
Cofactores enzimticos
Transferencia de electrones
Algunos compuestos necesitan formar un
complejo con un metal, generalmente
Mg2+, para as poder unirse al
sitio activo de la enzima.
Aunque los sustratos de la reaccin sean
neutros, durante el transcurso de la
reaccin pueden surgir intermediarios o
estados de transicin con cargas
negativas que son estabilizados por un ion
metlico, generalmente Mg2+, facilitando
de esta forma el avance de la reaccin
hacia el producto
El ion hidroxilo es un buen agente
nucleoflico pero su concentracin
en un medio acuoso a pH neutro es muy
baja.
Ciertos metales, muy frecuentemente
Zn2+, que son grupos prostticos
del sitio activo de algunas enzimas estn
coordinados a una molcula
de agua y de esta forma aumentan
notablemente su acidez,
permitiendo as que el agua est como
ion hidroxilo a pH neutro.
La funcin de este metal es por ello
incrementar la concentracin de
iones hidroxilo en el sitio activo de la
enzima que usa a este ion como
agente nucleoflico en la catlisis.
Ejemplos: anhidrasa carbnica,
carboxilasa C.
Proenzimas
Zimogenos o proenzimas son precursores inactivos de las enzimas. Observe
que este concepto es diferente a decir que son enzimas inactivas. Una
enzima inactiva es una enzima que ha perdido su actividad debido a diferentes
factores, como factores fisicos, quimicos o aun metabolicos.
La pepsina es sintetizada como pepsinogeno, la tripsina como tripsinogeno, la
quimotripsina como quimotripsinogeno, carboxipeptidasas como
procarboxipeptidasas.
Un buen ejemplo de lo que ocurre cuando algunos zimogenos son activados
antes de tiempo, en el interior de las celulas, se ve en la pancreatitis aguda
, en la cual la activacion prematura de algunas de las enzimas pancreaticas
como tripsina, fosfolipasa A2 y elastasa, producen la autodigestion del tejido
pancreatico.
Isoenzimas
Isoenzimas o isozimas son enzimas que difieren en la
secuencia de aminocidos, pero que catalizan la misma
reaccin qumica.
Un ejemplo de una isoenzima es la glucoquinasa, una
variante de hexoquinasa que no es inhibida por la
glucosa-6-fosfato. Sus diferentes funciones de regulacin
y su menor afinidad por la glucosa (en comparacin con
otros hexoquinasas), le permiten tener diferentes
funciones en las clulas de determinados rganos, como
el control de la liberacin de insulina por las clulas beta
del pncreas, o la iniciacin de la sntesis de glucgeno
por las clulas del hgado. Ambos procesos deben ocurrir
solamente cuando la glucosa es abundante, o ocurre
algn problema.
Clasificacin (International Union of Biochemists: IUB)
ENZIMAS

Oxidorreductasas

Transferasas

Hidrolasas

Liasas

Isomerasas

Ligasas
Clases
Oxidoreductasas
1) OXIDORREDUCTASAS: reacciones REDOX
Existen dos tipos esenciales:
Con transferencia de hidrgenos








Sin transferencia de hidrgenos




Ejemplos: Deshidrogenasas, citocromooxidasas, catalasas,
aminooxidasas
Transferasas
2) TRANSFERASAS:
transferencia de grupos funcionales
Ejemplo: transaldolasas, transcetolasas, transaminasas, Hexocinasas
Hidrolasas
3) HIDROLASAS:
rotura de enlaces por medio de agua. Enlaces
C C, C O, C N
Ejemplos: Glucosidasas, lipasas, peptidasas, estearasas, fosfatasas
Liasas
rotura o formacin de molculas sin intervencin del
agua, por adicin a dobles enlaces (C=C, C=O, C=N)
Ejemplo: descarboxilasas, aldolasas
Isomerasas
cambio de posicin de grupos dentro de la molcula
Ejemplos: epimerasas (mutasas), racemasas
Ligasas
6) LIGASAS O SINTETASAS:
Formacin de enlaces con rotura de ATP
Ejemplos: ADN polimerasas, peptidosintetasas, carboxilasas, polimerasas






Energa de
activacin

Curso de la reaccin



Sin enzima
Con enzima


CINETICA ENZIMATICA
Especificidad enzimtica
Especificidad
Absoluta
Especificidad
Estereoqumica
Especificidad
de Grupos
Especificidad
De Enlaces
SITIO ACTIVO
Zona que presenta grupos funcionales que participan
directamente en la ruptura o formacin de enlaces en el sustrato.
Representa una pequea porcin de la molcula enzimtica.
Es una estructura tridimensional compleja
La especificidad enzimtica depende del ordenamiento de los
tomos en el sitio activo.
La unin enzima sustrato, se produce mediante fuerzas
relativamente dbiles.

CINETICA ENZIMATICA
V1= k1[E] [S]
V2= k2[ES]
V3= k3[ES]




k2
k3
Hay enzimas que no obedecen la ecuacin
de Michaelis-Menten. Se dice que su cintica
no es Michaeliana. Esto ocurre con los
enzimas alostricos, cuya grfica v frente a
[S] no es una hiprbola, sino una sigmoide
(Figura de la derecha). En la cintica
sigmoidea, pequeas variaciones en la [S] en
una zona crtica (cercana a la K
M
) se traduce
en grandes variaciones en la velocidad de
reaccin.
Para evitar el tratamiento de grficos curvilneos de las reacciones
catalizadas por enzimas, los bioqumicos Lineweaver y Burk
introdujeron un anlisis de la cintica Enzimtica basndose en el
siguiente rearreglo de la ecuacin de Michaelis-Menten:


Caractersticas de K
m
: la constante de Michaelis-Menten es caracterstica de una
enzima y particular para un substrato. Refleja la afinidad de la enzima por ese substrato. K
m

es numricamente igual a la concentracin de substrato a la cual la velocidad de reaccin es
la mitad de la Vmax (K
m
= Vmax/2). Este parmetro, K
m
no vara con la concentracin de
enzima.

Significado de una K
m
pequea: un valor numrico pequeo de K
m
refleja una alta
afinidad de la enzima por su substrato porque a una baja concentracin del mismo, la
enzima a desarrollado ya la mitad de la velocidad mxima.

Significado de una K
m
grande: el valor numrico grande de K
m
refleja una baja
afinidad de la enzima por su substrato porque a una concentracin elevada del mismo, la
enzima desarrolla la mitad de la velocidad mxima.

Relacin de la velocidad con la concentracin de enzima: la velocidad de la
reaccin es directamente proporcional a la concentracin de la enzima a cualquier
concentracin de substrato. Por ejemplo, si la concentracin de enzima es disminuida a la
mitad, la velocidad inicial de la reaccin (v
0
) es reducida tambin a la mitad de la original.

Orden de la reaccin: cuando S es mas pequea que la K
m
, la velocidad de la
reaccin es aproximadamente igual a la concentracin de substrato. La velocidad de reaccin
se dice en estas condiciones es de primer orden con respecto al substrato. Cuando S es
mas grande que la K
m
, la velocidad es constante e igual a la Vmax. La velocidad de la
reaccin es independiente de la concentracin de substrato y se dice que es de orden cero
con respecto a la concentracin de substrato

Factores que afectan la actividad
enzimtica.-
Concentracin del sustrato.- A mayor concentracin del
sustrato, a una concentracin fija de la enzima se obtiene la
velocidad mxima. Despus de que se alcanza esta velocidad, un
aumento en la concentracin del sustrato no tiene efecto en la
velocidad de la reaccin.

Concentracin de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato
disponible, un aumento en la concentracin de la enzima aumenta
la velocidad enzimtica hacia cierto lmite.

Temperatura.- Un incremento de 10C duplica la velocidad de
reaccin, hasta ciertos lmites. El calor es un factor que
desnaturaliza las protenas por lo tanto si la temperatura se eleva
demasiada, la enzima pierde su actividad.

pH.- El pH ptimo de la actividad enzimtica es 7, excepto las
enzimas del estmago cuyo pH ptimo es cido.

Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los
cofactores, sean activadores o coenzimas para funcionar
adecuadamente. Para las enzimas que tienen cofactores, la
concentracin del cofactor debe ser igual o mayor que la
concentracin de la enzima para obtener una actividad cataltica
mxima.
Mecanismos que facilitan la catlisis enzimtica
Catlisis por proximidad: molculas se aproximan a distancia de
formacin de enlace. El aumento de concentracin favorece el
encuentro entre molculas.

Catlisis cido base: Grupos funcionales ionizables de cadenas R y
grupos prostticos facilitan catlisis al actuar como cidos y bases.

Catlisis por deformacin: enzimas se unen deformando o
alargando el enlace a romper hacindolo ms vulnerable

Catlisis covalente: Se forma enlace covalente entre enzima y uno
o ms sustratos. Energa de activacin es menor por modificacin.
Comn intervencin de Cisteina y serina en cat. Covalente.

Inhibicin enzimtica
La actividad de una enzima puede ser disminuida o eliminada completamente por
la accin de ciertas sustancias a las cuales se las conoce con el nombre genrico
de inhibidores enzimticos.
Los inhibidores pueden clasificarse en dos grandes grupos:
1) Irreversibles.
2) Reversibles
i) competitivos
ii) no competitivos
REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Dentro de las clulas se llevan a cabo infinidad de procesos metablicos, todos
ellos relacionados entre s, de manera que deben estar controlados en forma
precisa, para que a cada instante la clula disponga de los metabolitos
necesarios para su funcionamiento
Tipos de mecanismos regulatorios de
la actividad enzimtica:
1. Inhibicin por producto final
2. Regulacin alostrica
3. Regulacin por modificacin
covalente
4. Regulacin gentica
Regulacin alostrica
Compartimentalizacin celular. La distribucin por compartimentos en
la clula ayuda a preservar el equilibrio entre defensa y energa en el
tiempo, a expensas de mltiples organelos , como lisosomas, aparato de
Golgi, mitocondrias, retculo endoplsmico y ribosomas que fungen como
terminales reguladoras de las seales bioqumicas y factores de
transcripcin que hay entre la membrana, citoplasma, ncleo y gen
(ADN).
IMPORTANCIA
La medida de la actividad enzimtica en el
suero es importante para:
Diagnstico
Monitoreo del tratamiento de diversas
enfermedades.
Detectar recuperacin luego de ciruga
Detectar rechazo de transplantes
Determinar la actividad
enzimtica para diagnstico clnico requiere:

La enzima este presente en sangre, orina o fludo
disponible.
La enzima debe ser fcil de analizar y el mtodo
automatizado.
Las diferencias entre las actividades enzimticas entre la
condicin normal y la enfermedad debe ser significativa.
La enzima debe ser estable para poder ser almacenada
por un tiempo limitado.



Consecuencia de la deficiencia enzimtica

Problemas de deficiencia enzimtica como
consecuencia de dao gentico.
Ejemplos de condiciones:
Fenilcetonuria: retardacin mental
Galactosemia: retardacin mental, prdida de
peso, hgado agrandado, catratas.
Anemia hemoltica: rompimiento clulas
rojas.
Terapia de enzimas
Se utiliza para :

- Remover sustancias txicas de la sangre.

- Enfermedades de deficiencia gentica.

- Cncer.

- Degradacin de tejido necrtico usando enzimas
proteolticas.

- Remocin de cogulos.

- Tratamiento de insuficiencia pancretica.