Tema IV: CIDOS NUCLEICOS

Definicin y composicin
Nucletidos: nuclesido (pentosa + base nitrogenada)
fosfato
oligonucletidos y polinucletidos
ADN: Descubrimiento
Estructura y formas
Plegamiento
Desnaturalizacin
FUNCIN
ARN: Caractersticas
Tipos y localizacin
ARNm: llevar el mensaje desde el ADN
ARNt: transferir los aminocidos a la cadena peptdica
ARNr: constituir el ribosoma
Ribozimas
cidos nucleicos
Polinucletidos formados por nucletidos, molculas compuestas de
C, H, O y P.
Nucletidos
Bases nitrogenadas
Polinucletidos
Cadenas lineales de nucletidos.
Se forman mediante un enlace ster entre el OH
del grupo fosfato situado en 5 y el OH situado
en 3 liberando una molcula de agua.
Siempre presenta dos extremos 3 y 5.
Puede observarse que la estructura es una
cadena de pentosas y fosfatos de los que salen
bases nitrogenadas.
ADN: cido desoxirribonucleico
Cadena de polinucletidos donde la pentosa es la 2desoxirribosa y
las bases nitrogenadas son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y
timina (T).
Se encuentra en el ncleo de la clula eucariota, asociado a protenas
de carcter bsico, histonas, y en mitocondrias, plastos y citosol de
clulas procariotas. Adems puede formar parte de virus ADN.
Al igual que el ARN tiene carcter cido por lo que se tie con
colorantes bsicos.
Descubrimiento del ADN
Streptococcus pneumoniae Frederick Griffith 1928
Alfred D. Hershey
Martha Chase
S*en protenas y P*en cidos
nucleicos de fago.
1952
Establece la composicin del ADN Alexander R. Todd 1950-51
Friedrich Miescher 1869 Aisl el ADN del ncleo celular
Oswald Avery
Colin MacLeod
Maclyn McCarty
1944
Bacterias S lisas virulentas
Bacterias R rugosas no virulentas
(pgina 102)
James Watson
Francis Crick
Maurice Wilkins
Rosalind Franklin
Erwin Chargaff
1953
Estructura del ADN
Fotografa de rayos X de la forma B del ADN
A +T = G + C
Estructura del ADN
Formas del ADN
ADN. Tamao
Siempre es una molcula muy grande.
Los virus, que tienen las molculas ms pequeas, superan los 5000
pares de bases.
El ADN humano tiene 3.000.000.000 pares de nucletidos.
El lugar que una especie ocupa en la escala evolutiva no tiene
relacin directa con el nmero de nucletidos de su genoma:
Una cebolla tiene un genoma 5 veces mayor que el del humano.
Un helecho presenta un genoma casi 10 veces mayor que el de la
cebolla.
Si estirramos el ADN de un ncleo de clula humano, medira 1
metro de longitud. Veremos cmo se empaqueta.
ADN. Forma
Plegamiento del ADN
ADN. desnaturalizacin
ADN (doble hlice) ADN (hlice sencilla)
Desnaturalizacin. Variando T y/o pH
Renaturalizacin. A 65 C.
Gran afinidad entre las bases complementarias.
Utilidad:
Comparacin de secuencias: medicina forense, estudios evolutivos...
Tcnicas de ingeniera gentica: Bsqueda de genes mediante sondas
genticas, PCR, ARN de interferencia.
Aplicaciones biomdicas.
Etc.
ADN. Funcin
Almacn de la informacin:
Gobierno de la actividad celular
ADN ARN Protenas
transcripcin traduccin
Epigentica.
Transmite la informacin de una generacin celular a la siguiente:
ADN
duplicacin o replicacin
ARN: cido ribonucleico
ARN: tipos y localizacin
ARN mensajero (ARNm)
ARN transferente (ARNt)
ARN ribosmico (ARNr)
Estos tres tipos de ARN se pueden encontrar en el ncleo de clulas
eucariotas, donde se forman, y en el citoplasma donde ejercen su
funcin; el ARNr forma la estructura de los ribosomas. En el
citoplasma de bacterias, mitocondrias y plastos, donde se forman y
ejercen su funcin; el ARNr en los ribosomas.
ARN heterogneo nuclear (ARNhn) se encuentran en el ncleo y son
los precursores de diferentes ARNm.
ARN de interferencia (ARNi). Descritos recientemente, parece que
intervienen en la regulacin de la actividad gnica.
ARN mensajero
Se encuentra en menor cantidad en la clula (5%).
Es el que lleva el mensaje que va a dar lugar a protenas, por tanto,
puede ser, en algunos casos, el de mayor longitud.
Se forma en el ncleo de eucariotas o en el citosol de bacterias,
plastos y mitocondrias y se traduce a protenas en los ribosomas.
Presenta estructura lineal.
Su funcin es transmitir el mensaje codificado en el ADN.
En eucariotas sufre el proceso de maduracin.
ARN transferente
ARN ribosmico
Es el ms abundante (>75%), el de mayor tamao y peso molecular?
Junto a protenas forma los ribosomas. Estos, sern los encargados
de traducir el cdigo gentico a protenas.
En eucariotas se forman en el nuclolo. ARN nucleolar (ARNn)
Eucariotas: genes en tndem.
ADN
45S ARN
28S 18S 5,8S 5S

33 prot. 49 prot.
4OS 6OS
Procariotas:

16S + 21 prot. 5S + 23S +
+ 34 prot.


30S 50S
Ribozimas
Sidney Altman y Robert Cech obtuvieron el premio Nobel de
qumica por descubrir la actividad cataltica del ARN.
La capacidad enzimtica de muchas molculas de ARN apoyara la
teora de que fue el ARN la primera molcula con capacidad de
replicacin necesaria para el origen de la vida.
Las molculas de ARN son ms inestables que las de ADN.
GENTICA MOLECULAR: Dogma Central? de la Biologa
Transcripcin (cdigo en ADN a ARN)
ADN ADN
Duplicacin
Replicacin
Sntesis de ADN
FASE S del
Ciclo Celular
ARN
Mensajero
Transferente
Ribosomal
PROTENAS
Traduccin (nucletidos a aminocidos)
Transcripcin
inversa (virus)
Mutacin: alteracin del ADN
Duplicacin o replicacin del ADN
Proceso de sntesis o autocopiado de todo el ADN nuclear (eucariota)
o cromosmico (procariota). Descrito por Arthur Kornberg.
El mecanismo fue propuesto por Watson y Crick y demostrado por
Matthew S. Meselson y Franklin W. Stahl en 1957 (pgina 103).
Requerimientos en procariotas:
Molcula de ADN molde.
Protenas: iniciadoras (Ori I), helicasas y topoisomerasas,
estabilizadoras (abrir la hlice, girarla y estabilizarla), primasa
(sintetizar los primer o cebadores), ADN polimerasas III (genera las
nuevas hebras), II (ADN mitocondrial) y I (retira los primer, rellena
los huecos y repara posibles errores) y ADN ligasa (une los
fragmentos de Okazaki).
Nucletidos: NTP. energa
Energa: NTP NMP + E (ATP AMP)
Duplicacin del ADN. Proceso
Duplicacin del ADN en eucariotas
Diferencias con el proceso descrito en procariotas:
Distintos orgenes de iniciacin.
Formacin de mltiples horquillas de replicacin y de burbujas.
Hay que separar las histonas que se vuelven a unir tras la creacin
de la nueva copia. Estas protenas se han sintetizado previamente.
Diferencias en las protenas: ver cuadro de la pgina 84.
Construccin de los extremos: telomerasa.
Implicaciones de la existencia y funcionamiento de la telomerasa.
Transcripcin del ADN. Sntesis de ARN
Transcripcin. Proceso
Transcripcin en eucariotas I
Transcripcin en eucariotas II. Maduracin
Traduccin. Sntesis de protenas
Tras la transcripcin se forma, entre otros, el ARNm. En eucariotas
cada ARNm es monocistrnico; tiene informacin para una nica
protena; en procariotas puede ser policistrnico, es decir, da lugar a
varias protenas.
Los aminocidos deben ser transportados
en ARNt para formar la protena, luego
deben ser activados. Cada aminocido se
une al ARNt que tenga el anticodn que le
corresponda segn el Cdigo Gentico.
El ARNm presenta una secuencia de
nucletidos que se leen de tres en tres y
que tienen sus correspondientes
complementarios en el ARNt. Este
triplete se denomina codn.
Cdigo Gentico
Cdigo Gentico. Caractersticas
Lo intuy Francis Crick. Lo demostraron Niremberg, Khorana y
Ochoa.
Cada tres bases o triplete se denomina codn.
Es especfico: cada triplete slo codifica para un aminocido.
Es degenerado: varios tripletes codifican para el mismo aminocido.
Conviene observar que son las bases que ocupan el tercer lugar las
que cambian generalmente (leucina, serina y arginina).
No presenta solapamientos ni discontinuidades.
Es universal.
Traduccin. Fases y requerimientos
Al igual que en la transcripcin se definen tres fases:
Iniciacin: ARNm, ribosoma separado en subunidades, factores proteicos
de iniciacin, energa cedida por GTP, iones Mg
2+
, el primer aminocido
siempre es la metionina (eucariotas) y en procariotas la formilmetionina, el
codn de iniciacin AUG, se acoplan el codn con el anticodn en la
posicin P y a continuacin la subunidad mayor del ribosoma se une a la
subunidad menor.
Elongacin: Son necesarios los factores de elongacin y los distintos
aminocidos unidos a los ARNt. Se une en la posicin A el aminoacil-tRNA
correspondiente al segundo codn. Se produce el enlace peptdico mediante
la peptidiltransferasa de la subunidad mayor del ribosoma. Se desplaza el
ARNm en sentido 5 3. El pptido pasa al lugar P, deja el sitio A para el
nuevo a y sale el ARNt que ha quedado sin a. Se utiliza la energa de
GTP.
Terminacin: codn de terminacin. Factores de terminacin que
bloquean el sitio A. Separacin de la cadena polipeptdica del ARNt ltimo
y degradacin del ARNm por las ARNasas.
Traduccin. Proceso
Regulacin de la expresin gnica
Regulacin en eucariotas
Procesos ms complejos y peor conocidos.
Diferentes niveles:
Transcripcin: momento y frecuencia (protenas
reguladoras: activadores y represores; cambios
en la estructura del ADN (compactacin,
metilacin, factores de transcripcin
Maduracin del ARNm.
Transporte del ARNm.
Traduccin.
Degradacin de los ARNm.
Actividad de las protenas.
Elementos transponibles o transposones.
Factores extracelulares: hormonas, etc.
ARN de interferencia. Premio Nobel
de Medicina,2006. Fire, A y Mello, C.
Mutaciones
Alteraciones de la informacin gentica.
Tipos: gnicas. Afectan a la estructura molecular del gen.
cromosmicas: afectan al cromosoma.
genmicas. Afectan al genoma.
Se estudiarn en los temas
de gentica mendeliana
Clasificacin de mutaciones gnicas:
sustitucin: una base nitrogenada por otra.
delecin: prdida de uno o varios nucletidos.
insercin: ganancia de uno o varios nucletidos.
5ATTGCCGTGACTAC 3 5ATTGCTGTGACTAC 3
5ATTGCGTGACTAC 3
5ATTGCACGTGACTAC 3
Anlisis de las
consecuencias
Mutaciones. Causas y reparacin
Causas:
Errores de lectura: fallos de la polimerasa; en las oxidaciones,
radicales libres provocan que G se altere y se una a T en vez de
C.
Cambios qumicos: desaminaciones (C x U), despurinaciones
(rotura del enlace N-glucosdico), formacin de dmeros de T
mediante radiacin ultravioleta.
Transposiciones: transposones.
Reparaciones: ADN polimerasa I, accin de endonucleasas,
sntesis de protenas reparadoras (ante los dmeros de T),
reparacin inespecfica y posterior apoptosis, ...
Ingeniera Gentica I.
Manipulacin del material gentico
Objetivos:
Conocer el material gentico. Genmica (Proyecto Genoma
Humano).
Sustitucin de genes defectuosos por genes normales.
Introduccin de genes nuevos: terapia gnica, organismos
genticamente modificados (OGM) o transgnicos.
Obtencin de pptidos y protenas en grandes cantidades:
hormonas, antibiticos, vacunas, etc.
Ingeniera Gentica II.
Tcnicas de manipulacin
Tecnologa del ADN recombinante:
Enzimas de restriccin (extremos cohesivos o pegajosos y extremos
romos).
Mutagnesis dirigida.
Electroforesis en gel.
Clonacin.
PCR (reaccin en cadena de la polimerasa).
Hibridacin.
Ingeniera Gentica III.
Logros alcanzados
Proyecto Genoma Humano
Secuenciacin de diferentes genomas.
Mapas genticos: posicin relativa de genes conocidos por su funcin.
Mapas fsicos: secuencia de nucletidos a lo largo del cromosoma.
Terapia gnica.
Transgnesis: seres transgnicos, alimentos transgnicos, productos,
xenotransplantes, etc.
Clulas madre: embrionarias y adultas.
Consideraciones ticas, legales y sociales.
???
Proyecto Genoma Humano
Proyecto genoma
Cromosomas Genes Bases Bases determinadas
1 2968 245.203.898 218.712.898
2 2288 243.315.028 237.043.673
3 2032 199.411.731 193.607.218
4 1297 191,610,523 186,580,523
5 1643 180,967,295 177,524,972
6 1963 170,740,541 166,880,540
7 1443 158,431,299 154,546,299
8 1127 145,908,738 141,694,337
9 1299 134,505,819 115,187,714
10 1440 135,480,874 130,710,865
11 2093 134,978,784 130,709,420
12 1652 133,464,434 129,328,332
13 748 114,151,656 95,511,656
14 1050 105,311,216 87,410,661
15 1122 100,114,055 81,117,055
16 1098 89,995,999 79,890,791
17 1576 81,691,216 77,480,855
18 766 77,753,510 74,534,531
19 1454 63,790,860 55,780,860
20 927 63,644,868 59,424,990
21 303 46,976,537 33,924,742
22 288 49,476,972 34,352,051
X 1184 152,634,166 147,686,664
Y 231 50,961,097 22,761,097
Sin colocar 25,263,157 25,062,835