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Dra.

Andra Pires Fernandes


Preparo de Amostras
UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA
GRUPO DE PESQUISA EM QUMICA ANALTICA
INSTITUTO DE QUMICA
Misso da qumica analtica
Propor os meios para a determinao
da composio qumica dos materiais
A seqncia analtica
Definio do problema
Escolha do mtodo
Amostragem
Pr-tratamento da amostra
Medida
Calibrao
Avaliao
Ao

- Qual a informao analtica necessria?

- Amostragem: adequada?

- Qual mtodo de anlise fornecer a informao?

- PREPARO: converter a amostra em forma adequada para anlise.

- Calibrao: obteno com padres adequados.

- Medio: obteno de dados da amostra.

- Avaliao: resultado obtido confivel?

SEQUNCIA ANALTICA
Definio do problema
Determinao de elementos em baixas concentraes
em diferentes amostras
Avaliao dos teores de mercrio em
guas e sedimentos
Nveis tpicos de Hg
em amostras ambientais
Ar
Chuva
Oceano aberto
gua costeira


Sedimentos marinhos
Solos contaminados
1 - 4 ng m
3

5 - 100 ng l
-1

0,5 - 3 ng l
-1

2 -15 ng l
-1



< 100 ng g
-1
50 -100 g g
-1

Rios e lagos 1 - 3 ng l
-1
Sedimentos e solos < 700 ng g
-1
fjkrug@cena.usp.br
A seqncia analtica
Definio do problema
Escolha do mtodo
Amostragem
Pr-tratamento da amostra
Medida
Calibrao
Avaliao
Ao
Limites de deteco tpicos para as principais
tcnicas espectroanalticas
Figura adaptada de http://www.perkinelmer.com/
FAAS
ICP-OES Radial
ICP-OES Axial
HGAAS
GFAAS
ICP-MS
100 10 1 0,1 0,01 0,001
Limites de deteco (g / L)
0,0001 1000
FAAS
ICP-OES Radial
ICP-OES Axial
HGAAS
GFAAS
ICP-MS
100 10 1 0,1 0,01 0,001
Limites de deteco (g / L)
0,0001 1000
FAAS
ICP-OES Radial
ICP-OES Axial
HGAAS
GFAAS
ICP-MS
100 10 1 0,1 0,01 0,001
Limites de deteco (g / L)
0,0001 1000
ESTRATGIAS ANALTICAS PARA A DETERMINAO DE
METAIS E AMETAIS EM MAMFEROS AQUTICOS
AMOSTRAGEM


ESCOLHA DA TCNICA PR-TRATAMENTO

DETERMINAO


CONTROLE DE QUALIDADE - BRANCOS
- REPLICATAS
- MATERIAL DE REFERNCIA CERTIFICADO



TRATAMENTO/INTERPRETAO DOS DADOS


(Skoog et al., 2006; Krug,2006)
TRATAMENTOS PRELIMINARES

DECOMPOSIO DA AMOSTRA
ETAPAS DA ANLISE
AMOSTRAGEM
ESCOLHA DAS ESPCIES/TECIDOS

CONDIO DA CARCAA

MATERIAL UTILIZADO E LOCAL
DE COLETA

ACONDICIONAMENTO DAS AMOSTRAS

PROFISSIONAL QUALIFICADO

(Geraci& Lounsburry,1993; OShea,1999)
PROCESSO DE COLETAR UMA PEQUENA MASSA DE UM MATERIAL CUJA
COMPOSIO REPRESENTE TODO O MATERIAL QUE EST SENDO AMOSTRADO.
(Skoog et al, 2006)
AMOSTRAGEM

ANIMAIS SELVAGENS

ENCALHES CONDIO DA CARCAA

LOCAL DE COLETA INADEQUADO
TRANSPORTE P/ LABORATRIO

DIFICULDADES
Pr-tratamento da amostra

oportuno observar que, entre todas as operaes
analticas, a etapa de pr-tratamento das amostras
a mais crtica. Em geral, nesta etapa que se
cometem mais erros e que se gasta mais tempo.

tambm a etapa de maior custo.


Tempo gasto na anlise qumica
Preparo da amostra
61%
Amostragem
6%
Anlise
6%
Tratamento dos dados
27%
http://www.sampleprep.duq.edu/dir/why_sp_2.html
Adaptado de Ronald E. Major An overview of sample preparation, LC-GC,vol 9, n1, 1991.
A importncia do preparo de amostras nos
mtodos analticos
Mxima
60,6%
Nenhum
a 1,6%
Mnima
6,8%
Moderada
31,0%
http://www.sampleprep.duq.edu/dir/why_sp_1.html
Adaptado de Ronald E. Major An overview of sample preparation, LC-GC,vol 9, n1, 1991.
Preparo da Amostra
Os procedimentos de preparo de amostras dependem da
natureza da amostra, dos analitos a serem determinados e
sua concentrao, do mtodo de anlise e da preciso e
exatido desejadas.
DECOPOSIO POR
VIA SECA ???
DECOMPOSIO POR VIA
MIDA ???
DILUIO ???
ANLISE DIRETA ???
EXTRAO ???
AMOSTRA
REAGENTES
ENERGIA
Rompimento das ligaes/
destruio da estrutura cristalina
Reagentes complementares
SOLUO ANALITOS
Prof. Dr. Celso Spinola- UFBa
Tratamentos Preliminares
Amostra
Lavagem
Secagem
Moagem
Peneiramento
Refrigerao
Agitao mecnica
Polimento
Procedimentos
Fsicos
Tratamentos Preliminares
Lavagem
Normalmente utilizada para poucos materiais, como
partes de vegetais como razes, folhas e frutos.
Procedimento: soluo detergente neutra (01-3% v/v) +
gua desionizada
O procedimento deve ser rpido

Ateno!!! Pode haver perdas de
elementos por lixiviao
Tratamentos Preliminares
Secagem
A secagem a peso constante comum para amostras slidas que
apresentam gua em quantidade varivel e em forma no determinada.

Solos, rochas, minrios e sedimentos

Materiais biolgicos

Minerais (aluminatos, silicatos)

105 C

60 65 C (estufa com circulao
forada de ar)

> 1000 C

Ateno!!!

Vegetais secagem em sacos de papel ou algodo em estufa
com circulao de ar por 48h ou at peso constante.


- ESTUFA COM CIRCULAO FORADA DE AR (60-65 C)

- MICROONDAS DOMSTICO

- LIOFILIZAO (remoo de gua de uma amostra por sublimao a
vcuo)

Tratamentos Preliminares
Secagem
Tratamentos Preliminares
Moagem
Melhora a homogeneidade da amostra
Ocorre basicamente pelo choque entre a amostra e o
material que compe o moinho, logo uma grande fonte
de contaminao
Pode ser promovida por esmagamento entre duas
superfcies, frico contra uma superfcie e alterao e
fragilizao da estrutura
Pode ser classificada como: grosseira, que empregada
como uma pr-moagem (5 mm); fina (63 m) e extra-
fina (< 63 m)
Tratamentos Preliminares
Moagem extra-fina Moagem grosseira
Liquidificador
Processador
Moinho de facas
Moagem fina
Moinho de disco
Almofariz e pistilo
Moinho de bolas
Moinho vibracional
Moinho de jato de ar
Moinho criognico
Moinhos mecnicos perdas
de elementos volteis devido
ao aquecimento da amostra
Tratamentos Preliminares
Moagem criognica

Amostra
Congelada em N
2
(-196 C) ou acetona
(-78 C) para aumentar a dureza e
provocar falhas na estrutura
Facilita a cominuio
Utilizado para materiais com
baixo ponto de fuso que possam
obstruir outros equipamentos (ex:
gorduras e graxas duras), partes
de plantas resistentes e elsticas,
substncias sensveis oxidao
(ex: vitamina A e carotenos),
substncias que podem perder seu
aroma (ex: caf e pimenta) e
tambm hormnios, pinicilinas e
semelhantes
Precaues
Dureza
1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Mineral
Talco

Gypsum

Calcita

Fluor-spar

Apatita

Feldspato

Quartzo

Topzio

Corundum

Diamante

Equipamentos desgastados propiciam maiores riscos
A resistncia abraso do material do equipamento deve ser
sempre maior que o grau de dureza do material da amostra
Os minerais em geral apresentam alto grau de dureza
Tratamentos Preliminares
Separao de componentes de amostras slidas
Extrao de espcies inorgnicas em amostras slidas
inorgnicas (p.e. solos).
Lixiviao de compostos de elementos metlicos solveis
presentes em slidos inorgnicos

Filtrao
Materiais em suspenso podem entupir irreversivelmente
nebulizadores pneumticos utilizados em espectrometria
atmica
Decomposio e solubilizao de
amostras
A grande maioria das tcnicas analticas usadas para
determinao de elementos em amostras orgnicas e
inorgnicas, requer que a amostra esteja na forma
de uma soluo aquosa.
As amostras na forma de solues so mais versteis que
na forma de slidos;
As curvas analticas de calibrao podem ser feitas com
solues-padro de fcil preparao;
Diluies so simples;
Separaes de constituintes com ou sem pr-concentrao
so possveis.
Parmetros para a escolha do mtodo
de decomposio:
Amostra propriamente dita
Elementos ou compostos a serem determinados
Faixas de concentrao
Tipo, composio, e homogeneidade das amostras analticas
Quantidade de amostra disponvel para anlise
Quantidade de amostra necessria para as determinaes
Requisitos especiais: local da anlise, controle na produo
Escolha do mtodo de pr-tratamento depende de
vrias consideraes:

Soluo obtida deve ser compatvel com o mtodo de determinao
Exigncias metrolgicas






Aspectos restritivos


Calibraes exigidas (balana, temperatura, pipetas, bales
volumtricos)
Homogeneidade = f(massa de amostra, analitos)
Repetibilidade e reprodutibilidade, acurcia, seletividade e limite
de deteco
Custo
Tempo disponvel
Espao fsico
Competncia do analista
Tcnicas Convencionais
Via mida

cidos ou misturas de cidos, agentes oxidantes

Via seca (Combusto mineralizao)

Incinerao presso atmosfrica
Incinerao vcuo
Fuso


PREPARAO DE AMOSTRAS
VIA MIDA
VIA SECA
Decomposio e solubilizao de slidos
inorgnicos
Abertura ou decomposio significa converter a amostra
em uma outra forma slida com transformao qumica. A
nova forma facilmente solvel em soluo aquosa.
Ex.: fuso de uma amostra de silicato insolvel com Na
2
CO
3
at a
formao de um produto claro que se solidifica aps esfriar, sendo
prontamente dissolvido com soluo de cido ntrico diludo.
Dissoluo ou solubilizao significa que a amostra
slida, lquida ou gasosa dissolvida em lquidos
adequados a baixas temperaturas. Pode ou no ocorrer
uma reao qumica.
Dissoluo x Abertura
Mineralizao e Decomposio da Matria
Orgnica
Amostras orgnicas ou de natureza mista sofrem dois
processos distintos de ataque, que muitas vezes acontecem
simultaneamente: mineralizao e dissoluo.

Mineralizao Destruio da mat. orgnica
Dissoluo Dissoluo da mat. inorgnica
Um procedimento IDEAL para dissoluo de amostras deve ser:
Capaz de dissolver a amostra completamente, sem deixar nenhum
resduo.
Razoavelmente rpido para ser executado
Os reagentes utilizados no devero interferir na determinao do
analito e/ou na separao dos constituintes de interesse.
Os reagentes devero estar disponveis em alto grau de pureza para
no contaminar as amostras.
As perdas por volatilizao, por adsoro e/ou absoro ou por
quaisquer outras razes devero ser desprezveis;
Tanto os reagentes como a amostra no devero atacar o recipiente
onde ser feita a reao;
As contaminaes devidas ao ambiente devero ser desprezveis;
O procedimento deve apresentar o mnimo de insalubridade e
periculosidade;
A soluo final dever conter todos os analitos de interesse.
Decomposio e solubilizao de amostras
Fora do cido;
Ponto de ebulio;
Poder oxidante do cido e/ou de um de seus produtos de
decomposio;
Poder complexante com respeito aos ons de interesse;
Solubilidade dos sais correspondentes;
Grau de pureza e/ou facilidade de purificao;
Aspectos relacionados segurana durante a manipulao.

cidos Minerais
PONTO DE EBULIO PRESSO ATMOSFRICA
cido Concentrao
P.E. (C)
HCl 37% (m/v) 110
HF 49% (m/v) 108
HNO
3
70% (m/v) 120
gua-rgia (HCl:HNO
3
3:1) v/v 112
H
2
SO
4
98,3% (m/v) 338
H
3
PO
4
85% (m/v) 150
Os cidos minerais mais comuns so: HCl, HNO
3
, H
2
SO
4
, HClO
4
e HF
Decomposio e solubilizao de amostras
Classificao dos cidos na decomposio de amostras por via
mida
No oxidantes

HCl
HF
H3PO4
H2SO4 diludo
HClO4 diludo
Oxidantes

HNO
3

HClO
4
conc. a quente
H
2
SO
4
conc. a quente


Decomposio e solubilizao de amostras
cido ntrico - HNO
3


o cido mais usado na decomposio da matria orgnica

ORG + HNO
3
NO
x
+ CO
2
+ H
2
O

Entra em ebulio 120C, o que facilita sua remoo aps a
oxidao, mas limita a sua eficcia

Em sistemas abertos, no oxidante suficientemente forte para
mineralizar completamente o material orgnico
Decomposio e solubilizao de amostras
cido sulfrico H
2
SO
4


Possui elevado ponto de ebulio (mx. 339C), o que aumenta a
eficcia da decomposio, mas dificulta a sua remoo;

Possui a desvantagem de formar compostos insolveis com alguns
metais: CaSO
4
(pouco solvel), BaSO
4
, SrSO
4
e PbSO
4
;

Sua viscosidade pode causar interferncias em algumas tcnicas de
deteco (e.g. ICP, ETAAS)
cido clordrico HCl


Ponto de ebulio de 110C

Carter no oxidante

Dissolve sais de cidos fracos (carbonatos, fosfatos); a maioria dos
metais solvel com exceo de AgCl, Hg
2
Cl
2
e TiCl

Cloretos volteis: As(III), Sb(III), Ge(IV), Se (IV), Hg(II), Sn(IV)
Decomposio e solubilizao de amostras
cido perclrico HClO
4

Utilizado com conhecimento e ateno, este reagente extremamente
eficiente na destruio da matria orgnica.

Do ponto de vista tcnico, a mistura HNO
3
e HClO
4
a que possui
menos desvantagens.

Mas devido a ocorrncia de ocasionais exploses, aconselhvel
evitar o seu uso.
Decomposio e solubilizao de amostras
Algumas regras na manipulao:
Nunca use cido mais concentrado que 72%;
Nunca deixe que o cido concentrado a quente entre em contato direto com
materiais facilmente oxidveis;
No utilize capelas de exausto com superfcies expostas construdas com
material orgnico no recomendado (p.e. madeira);
No armazene o cido com frascos contendo tampas de borracha;
Lave o papel de filtro com bastante gua aps seu uso com cido perclrico;
Lave com gua os locais onde o cido possa ter entrado em contato.
Decomposio e solubilizao de amostras
As misturas de cidos so muito utilizadas porque:

Diferentes propriedades teis podem ser combinadas (um cido com poder
complexante com um cido oxidante):

HF + HNO
3
, HF + HClO
4
, HF + H
2
SO
4
, HF + HNO
3
+ HCl

Dois cidos podem reagir formando produtos com maior reatividade que
qualquer um deles empregado isoladamente:

gua rgia (HNO
3
:HCl, 1:3)

Uma propriedade indesejvel em um cido pode ser moderada pela presena
de um segundo cido:
HNO
3
+ HClO
4

A amostra pode ser dissolvida com um cido, o qual separado da mistura por
um outro cido que o substitui (HF + HClO
4
, HF + H
2
SO
4
).
Misturas de cidos minerais
Decomposio e solubilizao de amostras
Utilizados para melhorar a eficincia da dissoluo com um ou mais cidos
minerais:

Agentes oxidantes:

H
2
O
2
, Br
2
, KClO
3
+ HCl

Eletrlitos inertes so adicionados para aumentar o ponto de ebulio do
cido, resultando numa maior temperatura final para a dissoluo (adio de
Na
2
SO
4
, K
2
SO
4
ou (NH
3
)
2
SO
4
ao H
2
SO
4
).

Agentes complexantes mantm os analitos em soluo, evitando a
precipitao (cido tartrico, ctrico e ltico combinados com o HNO
3
para
dissolver ligas).

Catalisadores aumentam a velocidade de dissoluo com cidos (Cu
2+
,
Hg
2+
).
Misturas de cidos com outros reagentes
Perxido de hidrognio H
2
O
2

Misturas de cidos com perxido de hidrognio so particularmente eficientes
na oxidao da matria orgnica.
A gua o nico produto de decomposio presente.
encontrado com alto grau de pureza.
Combinado com o poder de desidratao do cido sulfrico, esse tipo de
reao rapidamente degrada a matria orgnica a espcies menores, que
volatilizam facilmente.
Tcnicas de Dissoluo mais usadas
VIA MIDA
Convencional
(sistema aberto/fechado)
Forno de microondas
(sistema focalizado/com
cavidade)
VIA SECA
Decomposio por fuso
Cimento
Aluminatos
Silicatos
Minrios de Ti e Zr
Minrios mistos de Be, Si, Al
Resduos insolveis de minrio de ferro
xidos de cromo, silcio e ferro
xido mistos de tungstnio, silcio e alumnio

Utilizado para material inorgnico de difcil dissoluo, como:
Decomposio por fuso
1. A amostra finamente moda misturada intimamente com um
eletrlito cido ou bsico
Fundentes: Na
2
CO
3
(p.f. 851C), NaOH (p.f. 318C), Na
2
O
2
, KHSO
4
, etc.)
2. A proporo entre a massa de amostra e do eletrlito (fundente)
pode variar de 1:2 a 1:50
3. A mistura geralmente colocada em um cadinho de nquel ou platina
4. O cadinho aquecido por um perodo de tempo suficientemente
adequado para que a amostra fique totalmente dissolvida na soluo
fundida, resultando em um lquido bem claro.
5. O material se solidifica quando resfriado a temperatura ambiente,
sendo quebrado e transferido para um copo
6. Se a fuso for bem sucedida o material ser facilmente solvel em
gua ou cido diludo.
Procedimento geral:
Decomposio por combusto (Dry ashing)
A temperatura conveniente para pirlise da
matria orgnica encontra-se freqentemente entre
450-550C.
A calcinao em mufla baseia-se na queima da
frao orgnica da amostra com o oxignio do ar,
obtendo-se um resduo inorgnico solvel em cido
diludo.
Procedimentos recomendados pela AOAC para
determinao de minerais em alimentos.
.

Calcinao em mufla
Decomposio por combusto (Dry ashing)
Fornos tipo mufla
Decomposio por combusto (Dry ashing)
Possibilidade de tratar grande quantidade de amostra, sendo a
relao massa de amostra/volume final muito flexvel.
Vantagens:
A cinza resultante livre de matria orgnica o que desejvel
para algumas tcnicas analticas.
As cinzas podem ser dissolvidas em meio compatvel com o
mtodo de determinao, sendo necessrio uma pequena
quantidade de cido.
Caracteriza-se pela simplicidade e baixo custo
Decomposio por combusto (Dry ashing)
Requer um longo tempo para calcinao (> 12 h).
Limitaes:
Perdas da amostra como um aerossol slido e/ou perda parcial ou
total de vrios elementos por volatilizao (Hg, As, Se).
Podem existir perdas devido a reteno de elementos-trao nas
paredes do recipiente, ou atravs de combinaes com constituintes
das cinzas.

Alto risco de contaminao.
Difcil dissoluo de algumas cinzas.
0 nenhuma perda
+ 2 a 5% de perda
++ 6 a 20% de perda
+++ >20% de perda

Procedimento analtico para amostras de plantas
*

Pesar em cadinho de platina 1-3 g de amostra seca.
Levar mufla e elevar progressivamente a temperatura at atingir 450 C
em 4 horas.
Manter a essa temperatura por 16 horas.
Aps o resfriamento, adicionar 2 mL de gua deionizada, 3 mL de HNO
3

e 2 mL de HF.
Evaporar lentamente at a secura em banho de areia ou placa de
aquecimento.
Repetir duas vezes o ltimo passo adicionando 2 mL de HNO
3
e 1 mL de
HF.
Dissolver o resduo com 2 mL de HNO
3
, aguardar 15 min, adicionar 20
mL deionizada e aquecer at suave ebulio
Aps resfriamento, transferir para um balo volumtrico e aferir.

* Mtodo do Comit Inter-Instituts dEtude des Techniques Analytiques

Aplicao
Tcnica: ICP OES
Tratamento das amostras: incinerao em mulfla a 450C por
24h e digesto cida em bloco.
1 Determinao de Al, Ba, Ca, Co, Cu, Fe, K, Mg, Mn, Ni, P
e Zn em caf cru
Morgano et al. Cienc. Tecnol. Aliment. 2002, 22(1), 19-23.
Na calcinao:
1 g de amostra de caf cru modo
Dissoluo das cinzas em HCl conc.
Na digesto (12h):
1 g de amostra de caf cru modo + 10 mL HNO
3
conc.
+ 3 mL H
2
O
2
30% (v/v).
Resultados: o procedimento por via seca apresentou maior
repetibilidade e exatido.

Placa Aquecedora
Banho Maria
Bloco Digestor
Chama (bico de Bunsen)
SISTEMA ABERTO
Decomposio por via mida (wet methods)
Decomposio por via mida (wet methods)
Baseiam-se no aquecimento da amostra na presena de um cido mineral
oxidante geralmente concentrado.
A decomposio pode ser realizada presso atmosfrica ou em
recipiente fechado (bomba de decomposio PTFE clssica , microondas
fechado).
Utilizam diferentes fontes de energia: trmica (placa de aquecimento,
bloco digestor), ultra-snica e radiante (infravermelho, ultravioleta e
microondas)
Nos mtodos modernos de decomposio por via mida, vrias
combinaes e propores de cidos fortes garantem tanto a mineralizao
quanto a dissoluo da amostra.
Trs deles contribuem especialmente para a destruio da matria
orgnica: HNO
3
, H
2
SO
4
, HClO
4

Correntes convectivas
.
.
.
.
.
.
Aquecimento por conduo
Temperatura da superfcie externa superior ao P.E.
bomba
digestor Kjeldahl
bloco
Aquecimento condutivo
chapa
Decomposio por via mida (wet methods)
Forno de microondas com cavidade Forno de microondas focalizadas
Sistema assistido por microondas
Decomposio por via mida (wet methods)
Decomposio por via mida (materiais biolgicos)
100 500 mg Moagem Digesto com 5-10 ml HNO
3

Digesto a frio durante 12 h recomendvel
Requer digesto complementar com HClO
4
(1-2 ml)
Digestes durante 3-12 h (depende da matriz)
Baixo custo de instrumentao
Alta freqncia analtica (40-100 amostras/digesto)
Filme
Decomposio por via mida (mat. biolgicos)
Requer combinaes: HClO
4
, H
2
SO
4
, H
2
O
2

Gerao de resduos (solues cidas)
Vapores corrosivos de NO
2
(capelas e tratamento dos
gases)

Digestes podem demorar 5 dias (depende da matriz)
H riscos de perdas por volatilizao: Hg (como
elemento) As, B, Cr, Pb, Sn, Zn (como compostos
halogenados)
Notas sobre a decomposio de materiais
biolgicos com HNO
3
e H
2
SO
4
em sistemas abertos
A mxima temperatura do meio de decomposio limitada pelo
ponto de ebulio do azetropo HNO
3
/gua (ca 120C).

H
2
SO
4
pode ser usado para aumentar a temperatura da
decomposio, mas h desvantagens:
difcil purificar o cido
Interfere em muito mtodos devido alta viscosidade
Forma sulfatos de baixa solubilidade com muitos elementos (e.g.
Cd, Pb, Sr, Ba), prejudicando a exatido dos resultados

Alto consumo de cidos, leva a altos valores de brancos.

As temperaturas atingidas so bem menores do que as
necessrias na via seca, diminuindo, assim, perda por volatilizao
so minimizadas.

Perdas por reteno nas paredes dos recipientes so menos
freqentes.

As reaes dos elementos traos com constituintes da amostra
so limitadas.

Decomposio por via mida (wet methods)
Vantagens:
Pode ocorrer co-precipitao de alguns elementos com um
elemento principal da matriz. Por exemplo, Ca precipitar com
CaSO
4
, se for utilizado H
2
SO
4
.

A presena de cloretos pode levar a perda de alguns elementos
por volatizao (e.g. As)

A dissoluo incompleta um risco maior na via mida devido
escolha inadequada de reagentes ou um inapropriado
programa de aquecimento (temperatura x tempo).
Decomposio por via mida (wet methods)
Limitaes:
1 - Use of Doehlert design for optimizing the digestion of
beans for multi-element determination by inductively coupled
plasma optical emission spectrometry

Wagna Piler Carvalho dos Santos
1,2
, Diogenes Ribeiro Gramacho
1
, Alete
Paixo Teixeira
1
, Antnio Celso Spnola Costa
1
, Maria das Graas
Andrade Korn
1
*

1
Ncleo de Excelncia em Qumica Analtica (NQA-PRONEX), Grupo de Pesquisa
em Qumica Analtica, Instituto de Qumica, Universidade Federal da Bahia,
Campus de Ondina, 40170-290 Salvador, Bahia, Brazil.
2
Centro Federal de Educao Tecnolgica da Bahia, Barbalho, 40.300-010,
Salvador-Bahia




Aplicao
Santos, W., Tese de Doutorado, 2007
1 - Determinao de elementos essenciais (Ca, Cu, Fe, K, Mg, Mn,
Ni, P, Zn) e no-essenciais (Al, Ba, Cd, Pb) em leguminosas de gro

Tcnica: ICP OES

Tratamento das amostras: digesto cida em chapa aquecedora por
20 minutos a 120
0
C
Na digesto (20 min):
0,5 g de amostra de feijo modo + 7
mL HNO
3
conc.
+ 1 mL H
2
O
2
30% (v/v).
Resultados: o procedimento por via mida apresentou boa
repetibilidade e exatido.
Decomposio por via mida com sistemas fechados
Comparando-se com os sistemas abertos, tem-se as seguintes
vantagens:

No h perda por volatilizao
Menor tempo de reao (3 a 10 vezes)
Melhor decomposio devido a maior presso e temperatura
atingidas.
O branco reduzido devido a menor quantidade de reagentes
Nenhuma contaminao por fontes externas.
Decomposio por via mida com sistemas fechados
Pode ser realizada utilizando-se:

Bomba de decomposio PTFE clssica

Microondas com recipiente Teflon, PFA ou TFM baixa presso (at
1,5 MPa)

Sistema a alta presso (at 15 MPa) com recipiente de TFM, PFA ou
quartzo.
Decomposio por via mida com sistemas fechados
Bomba de decomposio PTFE clssica
Aquecidas em estufa
ou mufla at 200C
Presso: 0,1 a 30 MPa
Amostra: 0,1 a 5 g

Bomba de decomposio PTFE
Volumes disponveis: 23 ml, 45 ml e 125 ml
Avaliao da contaminao ambiental por metais
em lagostas (Spiny lobster) no litoral norte do
Estado da Bahia

Aplicao
Adriana Oliveira, Alete Paixo, Gabriel Luiz dos Santos,
Joilma Menezes, Joo David Neto, Ludmila Manhaes, Maria Andra
da Silva, Sidney Santana, Suzana Ms Rosa,Vitria Soares.
Objetivo

Avaliar os impactos ambientais das atividades industriais no litoral norte do
estado da Bahia, atravs da determinao de metais em amostras de sedimento
e lagostas da espcie (Spiny lobster) coletados em estaes prximas a
emissrios localizados na rea de estudo.

Objetivos Especficos

Identificar e quantificar metais (Al, As, Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Pb, Se, Sr, V e Zn)
em amostras de sedimento, msculo e vsceras de lagostas.

Obter dados preliminares sobre a contaminao por poluentes qumicos na
regio utilizando sedimento como indicador ambiental e lagostas da espcie
(Spiny lobster) como bioindicador.
Avaliao da contaminao ambiental por metais em lagostas
(Spiny lobster) no litoral norte do Estado da Bahia

EFLUENTES LANADOS ATRAVS DE EMISSRIOS

+

FALTA DE MONITORAMENTO





LAGOSTAS + SEDIMENTO: INDICADORES

JUSTIFICATIVAS
VSCERAS
MSCULO
PR-TRATAMENTO
LAVAGEM
SEPARAO DE VISCERAS
MOAGEM
PENEIRAMENTO
PR-TRATAMENTO
DIGESTO DE AMOSTRAS
0.20g de AMOSTRA
+
2 mL HNO3
+
2mL GUA MILLIQ
14 HORAS

120 C
DETERMINAO DE METAIS
ICP OES
0,20 g
Digesto em bomba parr
14h = 120 C
Diluio para
15 mL
Determinao de metais ICP OES
Tratamento e interpretao
dos dados
* Tempo de liofilizao varivel
at completa sublimao
Liofilizao*
moagem
Peneira (300 m)
DESCRIO RESUMIDA DAS ETAPAS DAS ANLISES
CONCLUSES
- GRANDE VARIABILIDADE ENTRE METAIS EM CADA ESTAO

- AMOSTRAGEM INADEQUADA DE VSCERAS

- FALTA DE LIMITES ESTABELECIDOS PARA OUTROS
ELEMENTOS IMPORTANTES NA LEGISLAO

- NECESSIDADE DE ESTUDOS LEVANDO EM CONSIDERAO TODA
O ECOSSISTEMA DA REGIO

Emprego de bombas de digesto
2 ml HNO
3
conc
+
H
2
O
2

Temperatura: ?

250 mg de amostra

+
Emprego de bombas de digesto
Emprego de bombas de digesto
Emprego de bombas de digesto
Decomposio por via mida com Microondas
Ultraviolet
Infrared Microwave
V
i
s
i
b
l
e

10
-10
10
-9
10
-8
10
-7
10
-6
10
-5
10
-4
10
-3
10
-2
10
-1
1
3x10
12
3x10
10
3x10
8
3x10
6
3x10
4
3x10
2
Frequency (MHz)
Laser Radiation
Wavelength (m)
Molecular rotations
Molecular
vibrations

Outer-shell
(valence)
eletrons


Inner-shell
eletrons
Espectro Electromagntico
Principais componentes de
um forno de microondas
Magnetron: gerador de microondas
Guia de ondas: canal metlico, paredes refletoras, levam as
microondas at a cavidade
Cavidade: espao interno do forno onde so colocadas as amostras
(paredes feitas de material refletores de MW)
Prato giratrio: assegurar homogeneidade do aquecimento
Espalhador de microondas: distribuir uniformemente a radiao que sai
do guia de ondas
Sistema de ventilao
Interao Radiao Microondas e Matria
Materiais transparentes energia
microondas - no so aquecidos.
Condutor
Isolante
Dieltrico
Metais refletem energia microondas
e no aquecem.
Reflexo
Transparncia
Materiais absorvem energia
microondas - aquecimento.
Absoro
.
.
.
.
.
.
Aquecimento assistido por radiao microondas
Reprinted with premission from Neas, E.; Collins, M. in Introduction to Microwave Sample
Preparation:Theory and Practice, copyright 1988 by The American Chemical Society.
Sample-acid mixture
(absorbs microwave
energy)
Localized
superheating
Vessel wall
(transparent to
microwave energy)
Microwave heating
Lquidos (cidos e solventes) so
rapidamente aquecidos quando
expostos radiao microondas.
Absoro ocorre principalmente
por dois mecanismos:
- ROTAO DE DIPOLOS
- CONDUO INICA
Como materiais so aquecidos?
Rotao de dipolos
Depende da presena de molculas polares.
Normalmente, molculas polares esto orientadas ao
acaso; contudo, em presena de um campo
eletromagntico as molculas so alinhadas.
Quando o campo oscila e a polaridade do campo
eletromagntico varia em uma velocidade
estabelecida pela freqncia, as molculas tentam
seguir a mudana do campo, causando atrito e,
conseqentemente, aquecendo o material.
Aquecimento Assistido por Radiao
Microondas
Liner, sleeve and frame
transparent to MW
energy
Sample-acid mixture
absorbs MW energy

Vapor is not heated
by microwave
Localized superheating

Microwave-assisted
heating
Aspectos Positivos da Tecnologia
Microondas
Aquecimento volumtrico: energia rapida/e
transferida para o material sendo aquecido.
Economia de energia: perdas de calor por
irradiao, conduo e conveco so reduzidas (at
70%).
Tamanho de equipamento reduzido em at 20%.
Controle instantneo do processo: incio e parada
rpidas.
Aspectos Positivos da Tecnologia
Microondas
Transferncia de energia limpa: usualmente
via algum efeito de polarizao no prprio
material.
Temperaturas elevadas.
Controle de reaes qumicas: acelerao de
processos qumicos e reaes sem
solventes.

Aspectos Negativos da Tecnologia
Microondas
Complexidade da rea: difcil previso da natureza
exata da interao entre o campo eletromagntico e
a matria.
Uniformidade de temperatura: profundidade de
penetrao da radiao.
Medida de temperatura: a natureza pontual da
maior parte dos procedimentos de medida de
temperatura e a no uniformidade do aquecimento
pode gerar dados incorretos.

Aspectos Negativos da Tecnologia
Microondas

Custo de implementao: geral/e maior do que
estratgias convencionais de aquecimento.
Tamanho do magnetron e ciclo de trabalho.
R & D: Novas aplicaes geral/e exigem
desenvolvimento e compreenso do comportamento
da amostra. Isso implica que implementao
imediata invivel.

Decomposio por via mida com Microondas
Microondas no focalizado
Frascos Fechados Por-que?
Anlise de Traos
Eliminao do uso de cido sulfrico
Digesto usando somente cido ntrico
Menor consumo de reagentes
Menores brancos analticos
Menor custo de reagentes com alta pureza
Evita perdas de analitos que podem gerar compostos
alta/e volteis
Proteo do ambiente (vapores cidos; menor
volume de resduos cidos)

Controle direto de temperatura
Monitoramento e
controle direto para
um frasco de
referncia at 300C
com termopar ou
fibra ptica
Temperatura
medida 20 vezes
por segundo
Sensor inserido em
tubo cermico inerte

Controle de temperatura em
todos frascos (contact-less)
Sensor focalizado
de IR
Controle seqencial
de temperatura em
todos frascos
Perfil de variao de
temperatura para
cada frasco
Aspectos Positivos do Forno de
Microondas com Cavidade
Possibilidade de atingir temperatura de trabalho >
que P.E. dos reagentes (P
interna
) o que implica em
processos de digesto mais rpidos e maior poder
oxidante.
Digesto simultnea de um grande nmero de
amostras (6-50).
Menor possibilidade de perdas e contaminao
(frascos fechados).

Aspectos Positivos do Forno de
Microondas com Cavidade
Menor consumo de reagentes, resultando em
menores brancos analticos e digeridos menos
concentrados em cidos.
Menor gerao de resduos.
Qumica limpa: reduo de vapores desprendidos
para o ambiente.
Controle da distribuio da radiao microondas
durante o processo de digesto aperfeioa a
repetibilidade.
Aspectos Positivos do Forno de
Microondas com Cavidade
Possibidade de usar reagentes com alta
pureza, e.g. HNO
3
e H
2
O
2
, sem perda de
eficincia devido aos baixos P.E..
Possibilidade de trabalhar com solues
diludas de cido ntrico.
Aspectos Negativos do Forno de
Microondas com Cavidade
Segurana: presso.
Segurana: riscos de exploso devido gerao de
H
2
durante a digesto de ligas e metais.
Limitada massa de amostra.
Limitaes de temperatura e presso devidos aos
materiais dos frascos.
Segurana: necessidade de trabalhar com amostras
similares na maioria dos programas de aquecimento,
i.e. amostras com teores similares de gua e
compostos orgnicos.
Aspectos Negativos do Forno de
Microondas com Cavidade
Limitaes prticas para adicionar reagentes durante
a digesto.
Necessidade de aguardar um longo tempo para
abertura dos frascos aps a digesto.
Baixa reprodutibilidade ao empregar diferentes
equipamentos ou frascos mesmo para
equipamentos e frascos produzidos por um mesmo
fabricante, mas de diferentes lotes.
Decomposio por via mida com Microondas
Microondas focalizado
Forno de Microondas com Radiao
Focalizada
Adequado para massas de amostra elevadas
Adio automtica de reagentes (ou
amostras)
Presso atmosfrica (segurana)
Temperaturas elevadas (uso de cido
sulfrico)
Mltiplos procedimentos simultneos

Forno de Microondas com Radiao Focalizada:

Aplicaes Tpicas
Massas de amostra elevadas (> 1 g)
Amostras orgnicas gerao de gases
Requer mltiplas adies de reagentes
Requer variaes de temperatura
Requer cido sulfrico para atingir altas
temperaturas
Procedimentos de extrao sob baixas
temperaturas
Aplicao
Tcnica: ICP OES
Tratamento das amostras: digesto com HNO
3
conc. e H
2
O
2
30%
(v/v)
5 Determinao de nutrientes minerais e elementos txicos
em cafs solveis
Santos e Oliveira. Food Compos. Anal. 2001, 14, 523-531.
1 g de amostra de caf
6 ml de NHO
3
a 65% (v/v)
0,5 mL de H
2
O
2
a 30 % (v/v)
Nmero de amostras = 21
Resultados: Recuperaes quantitativas (84-102%) foram
obtidas para Na, K, Mg, Al, P, S, Ca, Mn, Fe, Ni, Cu, Zn, Cd, Sb,
Pb, Cr e Sn.
Somente uma amostra com 0,520,02 mg/kg de Cr estava acima
do limite estabelecido pela Legislao Brasileira para alimentos.
Aplicao
Tcnica: ICP OES
Tratamento das amostras: extrao aquosa e digesto em forno de
microondas fechado.
6 Determinao de Ca, Cu, Fe, K, Mg, Mn, Na, Pb, S, Se, Si, Sn e Zn
em cafs brasileiros com o objetivo de caracterizao quanto a regio
geogrfica e modo de produo.
Fernandes et al. Spectrochim. Acta Part B. 2005, 60, 717-724.
Extrao: 1,0 g de amostra + 10 mL de gua
fervente, centrifugar e acidificar o sobrenadante
com HNO
3
(0,014 mol L
-1
).
Digesto: 0,25 g de caf + 3 mL de HNO
3
conc. +
1 mL de H
2
O
2
, em MW ( 700 W/15min).
Resultados: Foi possvel correlacionar a concentrao dos
elementos com o modo de produo (orgnico ou convencional).
Aspectos Positivos do Forno de
Microondas com Radiao Focalizada
Digesto de massas elevadas de amostra (at 10 g)
especial/e para amostras com alto teor de
compostos orgnicos que geram elevados volumes
de gases.
Adio programada de reagentes.
Segurana presso ambiente.
No h uma longa etapa de resfriamento e reduo
de presso aps a digesto.
Aspectos Positivos do Forno de
Microondas com Radiao Focalizada
Uso de frascos construdos com diferentes materiais
(PTFE, vidro borossilicato e quartzo).
Possibilidade de implementar diferentes programas
de aquecimento para diferentes amostras em cada
frasco de digesto.
Variedade de aplicaes: extrao de orgnicos,
extrao para especiao qumica, digesto cida ou
alcalina para determinao de teores totais.
Aspectos Positivos do Forno de
Microondas com Radiao Focalizada
Trabalho sob elevadas temperaturas utilizando-se
cido sulfrico.
Remoo de vapores (para sistemas operando
presso atmosfrica) aumento do rendimento
reacional (Princpio de Le Chatelier)
Segurana para processos reacionais sob baixa
presso.
Possibilidade de combinao com outras fontes de
energia (e.g. ultrassom) para acelerar o processo de
digesto.
Aspectos Negativos do Forno de
Microondas com Radiao Focalizada
Elevada acidez dos digeridos pode dificultar a
determinao de elementos por tcnicas que
envolvem a introduo de amostra por nebulizao
pneumtica (requer elevada diluio).
Elevados volumes de reagentes podem gerar
brancos analticos altos e grande produo de
resduos.
Heterogeneidade de distribuio da radiao
microondas: implica em diferentes condies em
cada frasco reacional, o que afeta a eficincia de
digesto (baixa repetibilidade).
Aspectos Negativos do Forno de
Microondas com Radiao Focalizada
Uso de cido sulfrico (mximo P.E.) para aumento
de temperatura em sistemas operando presso
ambiente: a elevada viscosidade do cido sulfrico
pode interferir no transporte de amostra e
determinaes dos analitos por tcnicas como ICP
OES e ICP-MS. Alm disso, sulfatos insolveis
podem ser formados.
Limitada freqncia analtica: 1 a 6 amostras,
enquanto que no forno de microondas com cavidade
pode-se processar at 80 amostras simultanea/e.
Concluses
O melhor procedimento para decomposio
aquele que resulte em alta porcentagem de
recuperao, requer reduzido volume de
reagentes, menor tempo de anlise e pequeno
potencial de contaminao

O mtodo de combusto, para a maioria dos
metais, fornece resultados exatos; mas requer um
tempo maior do que o necessrio para anlises
por via mida, especialmente aquelas utilizando
sistema fechado ou microondas
Concluses
Para alguns elementos a extrao cida, sem
dissoluo completa da amostra, suficiente para
uma determinao quantitativa
O mtodo de digesto utilizando microondas tem
se mostrado bastante promissor, obtendo-se alta
recuperao, um tempo de digesto bastante curto
e baixa contaminao
OBRIGADA!!!!

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