Hemoprotenas:

Hemoglobina y Mioglobina
Hemoprotenas
Son protenas conjugadas cuyo grupo prosttico es una porfirina
coordinada a un ion metlico. Suelen estar relacionadas con todos los
aspectos del metabolismo aerbico

- Transportadores de oxgeno como la hemoglobina y la mioglobina
- Clorofilas: porfirinas coordinadas a un ion Mg
++

- Transportadores electrnicos como los citocromos
- Enzimas relacionadas con el transporte electrnico como la
citocromo oxidasa
- Enzimas relacionadas con el stress oxidativo, como las peroxidasas
- Coenzimas cobamdicas o corrinoides (vit. B
12
)
Fe
++
N
CH
3
HO
N
CH
2
CH
2
CH
3
COO
-
N
H
3
C CH
CH
2
N
C
CH
2
CH
2
COO
-
O
H
Hemo a:
citocromo oxidasa
Fe
++
N
CH
3
CH
2
CH
2
S
Cys 14
N
CH
2
CH
2
CH
3
COO
-
N
H
3
C CH
2
CH
2
S
Cys 17
N
H
3
C
CH
2
CH
2
COO
-
Hemo c:
citocromo c
Citocromo c
Hemo c
Fe
Met 80
His 18
Cys 17
Cys 14
Entorno del grupo hemo
en el citocromo c
Fe
++
N
O
O
N
CH
2
R
CH
3
N
H
3
C CH
CH
2
N
CH
3
C
O
C
O
O CH
3
CH
3
en clorofila a
CHO en clorofila b
R:
Clorofilas
Mg++
Bacterioclorofila
1 L de sangre arterial desprende 200 mL de O
2
STP. Dada su poca
solubilidad, es de suponer que la mayora circula en forma de alguna
combinacin qumica.

En efecto, el oxgeno circula en combinacin con la hemoglobina,
presente a la concentracin de 145 g/L en sangre, toda ella en el
interior del hemate (eritrocito, gbulo rojo), a su vez en cantidad
de unos 5 x 10
6
por ml.

El peso molecular de la hemoglobina es de 64000 (2.2 mmoles.L
-1
);
los 200 mL de O
2
suponen 8.8 mmoles.L
-1
; por tanto, el transporte
se hace en razn de 8.8/2.2 = 4 moles de oxgeno por mol de hemo-
globina.
Transporte en sangre de O
2

Teniendo en cuenta que en la molcula de hemoglobina hay cuatro
tomos de hierro, podemos decir que el transporte tiene lugar en
una proporcin de un mol de oxgeno por mol de hierro.

La sangre arterial est equilibrada con una presin parcial de
oxgeno de aproximadamente 95-100 mm Hg. La sangre venosa
est equilibrada con una presin parcial de oxgeno de
aproximadamente 40 mm Hg.

La sangre arterial est saturada prcticamente a 100 %; la venosa,
un 70 %. Por tanto, el paso por los tejidos perifricos desprende un
30 % del oxgeno combinado con la hemoglobina.
Hemoglobina: protena globular, conjugada y oligomrica

- Grupo prosttico: hemo
hemo: protoporfirina IX + ion ferroso Fe
2+


- Cuatro subunidades, iguales dos a dos:
Hemoglobina A1 (HbA
1
): a
2
b
2

Hemoglobina A2 (HbA
2
): a
2
d
2


Hemoglobina fetal (HbF): a
2
g
2

Hemoglobina Gower 1: z
2
e
2

Hemoglobina Gower 2: a
2
e
2

Hemoglobina Portland: z
2
g
2


- Se conoce, adems, un gran nmero de hemoglobinas
mutantes.
Fe
++
N
CH
3
CH H
2
C
N
CH
2
CH
2
CH
3
COO
-
N
CH
CH
2
H
3
C
N
H
3
C
CH
2
CH
2
COO
-
Grupo Hemo b:
Protoporfirina IX + Fe
His 93
Hlice F
Hlice E
Entorno del
grupo hemo
en la
mioglobina
Fe
++

Tanto en la hemoglobina como en la mioglobina,
el hierro siempre est en estado ferroso, Fe
++

Cuando el ion ferroso, Fe
++
se oxida a frrico, Fe
+++
,
la hemoglobina se convierte en metahemoglobina, que
no es funcional

Conviene no confundir metahemoglobina con
oxihemoglobina, que es la forma oxigenada (pero no
oxidada) de la hemoglobina
Desoxihemoglobina + 4O
2
Oxihemoglobina
Cadena a V-LSPADKTNVKAAWGKVGAHAGEYGAEALERMFLSFPTTKTYFPHF-DLSH-----GSA 53
Cadena b VHLTPEEKSAVTALWGKV--NVDEVGGEALGRLLVVYPWTQRFFESFGDLSTPDAVMGNP 58
Mioglobina -GLSDGEWQLVLNVWGKVEADIPGHGQEVLIRLFKGHPETLEKFDKFKHLKSEDEMKASE 59
*: : * **** . * *.* *:: .* * * * .*. ..

Cadena a QVKGHGKKVADALTNAVAHVDDMPNALSALSDLHAHKLRVDPVNFKLLSHCLLVTLAAHL 113
Cadena b KVKAHGKKVLGAFSDGLAHLDNLKGTFATLSELHCDKLHVDPENFRLLGNVLVCVLAHHF 118
Mioglobina DLKKHGATVLTALGGILKKKGHHEAEIKPLAQSHATKHKIPVKYLEFISECIIQVLQSKH 119
.:* ** .* *: . : : .. : .*:: *. * :: :.::.. :: .* :

Cadena a PAEFTPAVHASLDKFLASVSTVLTSKYR------ 141
Cadena b GKEFTPPVQAAYQKVVAGVANALAHKYH------ 146
Mioglobina PGDFGADAQGAMNKALELFRKDMASNYKELGFQG 153
:* . .:.: :* : . . :: :*:

Homologa de secuencia a - b - Mioglobina
N
C
Hlice B
Hlice C
Hlice D
Subunidad a
Subunidad b
Mioglobina
Situacin del
grupo hemo
Hemoglobina A
1

(forma T, desoxi-)
b
1

b
2

a
2

a
1

Hemoglobina A
1

(forma R, oxi-)
a
1

b
1

a
2

b
2

Entorno del
grupo hemo en la
desoxihemoglobina
Hlice F
Hlice E
His 87 (a)
His 92 (b)
Entorno del
grupo hemo en la
oxihemoglobina
Hlice F
Hlice E
O
2

His 87 (a)
His 92 (b)
P
O2
, mmHg
0 20 40 60 80 100
S
a
t
u
r
a
c
i

n

d
e

O
2
,

%
0
20
40
60
80
100
Saturacin de O
2
en Mioglobina y Hemoglobina
Hemoglobina
Mioglobina
PO
2
, mmHg
0 20 40 60 80 100
S
a
t
u
r
a
c
i

n

d
e

O
2
,

%
0
20
40
60
80
100
Vol., Hb
Vol., Mb
P
O2
, mmHg
0 20 40 60 80 100
S
a
t
u
r
a
c
i

n

d
e

O
2
,

%
0
20
40
60
80
100
P
50
Mb P
50
Hb
Concepto de P
50

Efecto del pH sobre la saturacin de la hemoglobina
PO
2
, mmHg
0 20 40 60 80 100
S
a
t
u
r
a
c
i

n

d
e

O
2
,

%
0
20
40
60
80
100
pH 7.4
pH 7.0
pH 6.6
(Efecto Bohr)
Efecto de la presin parcial de CO
2
PO
2
, mm Hg
0 20 40 60 80 100
S
a
t
u
r
a
c
i

n

d
e

O
2
,

%
0
20
40
60
80
100
40 mmHg
60 mmHg
80 mmHg
Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)
sobre la saturacin de la hemoglobina
PO
2
, mmHg
0 20 40 60 80 100
S
a
t
u
r
a
c
i

n

d
e

O
2
,

%
0
20
40
60
80
100
0
0.1 mM
1 mM
s
s s s s s
s
s s
s
L
i
i i i
i i
i
i i
i
Forma R, oxi-
Forma T, desoxi-
Modelo MWC
C
COO
-
(CH
2
)
3
NH
C NH
2
+
H
2
N
-
OOC CH
2
C
+
H
3
N (CH
2
)
4
C
+
H
3
N C
Val 1
Lys 127
Asp 126
Arg 141
a
a
Contacto a-a, desoxihemoglobina
a
1

a
2

a
1

Arg 141 (C-t)
Asp 126
Lys 127
Arg 141 (C-t)
Desoxi-
Oxi-
Contacto a-a
a
2

Lys 127
Asp 126
C
(CH
2
)
3
NH
C NH
2
+
H
2
N
Arg 92
CH
2
C CH
2
-
OOC
C (CH
2
)
4
NH
3
+
-
OOC
CH CH
2
NH
+
HN
Lys 40
His 146 (C-t)
Glu 43
a
b
Contacto a-b, desoxihemoglobina
a
b
Lys 40
Arg 92
Glu 43
His 146 (C-t)
a
His 146 (C-t)
Lys 40
Glu 43
Arg 92
b
b
Contacto a-b
Desoxi-
Oxi-
Tyr 42
Tyr 42
Asp 99
Asp 99
b
a
a
b
Forma T, desoxi-
Forma R, oxi-
Contacto a-b
NH
+
HN
CH
2
C
C CH
2
COO
-
Asp 94
His 146
Contacto b-b, desoxihemoglobina
b
b
Forma T, desoxi- Forma R, oxi-
2,3-BPG
His 2
His 2
His 2
His 2
Val 1
Val 1
Val 1
Val 1
Lys 82
Lys 82
Lys 82
Lys 82
His 143
His 143
His 143
His 143
Contacto b-b
Movimiento del
ion Fe++ en la
oxigenacin de la
hemoglobina
Forma T, desoxiHb
Forma R, oxiHb
Inmunoglobulinas
Todos los organismos vivientes tienen mecanismos
para distinguir lo propio de lo extrao

- Hongos y plantas, por ejemplo, mediante la produccin de
metabolitos secundarios potencialmente txicos para otros
organismos: antibiticos, alcaloides, etc.

- Bacterias, mediante el sistema de restriccin de DNA: DNAs
extraos son degradados especficamente por las enzimas de
restriccin

- Vertebrados, mediante el sistema inmune.
El sistema inmune consta de dos tipos de respuesta:

- La inmunidad celular, mediante la cual clulas inmunocompe-
tentes ( linfocitos T) eliminan clulas extraas introducidas en
el organismo (p.e. un injerto, un tumor, una clula transforma-
da por un virus, etc.)

- La inmunidad humoral, en la que otras clulas inmunocom-
petentes (linfocitos B) producen protenas especficas dirigidas
contra lo extrao, llamadas anticuerpos.

- Todos los anticuerpos pertenecen a una superfamilia de protenas
conocidas como inmunoglobulinas
Llamamos antgeno a la molcula que, introducida en un orga-
nismo, produce una respuesta inmune, sea humoral o celular.

En la inmunidad humoral, el antgeno se une especficamente a
un linfocito B que produce un anticuerpo complementario. Este
linfocito se multiplica (clon celular) y se transforma en clula
plasmtica o plasmocito, que es la clula encargada de la
produccin de anticuerpos.

Cada linfocito B produce un solo y nico tipo de anticuerpo. Por
esa razn, los anticuerpos obtenidos de un nico clon de
linfocitos B reciben el nombre de anticuerpos monoclonales.
El estudio de las inmunoglobulinas se vio facilitado por la
naturaleza de los mielomas, tumores malignos de clulas
plasmticas, que producen un solo tipo de anticuerpo (anti-
cuerpo monoclonal).

En algunos mielomas humanos se produce la llamada protena
de Bence-Jones, que es excretada en la orina, a partir de la que
se puede purificar.

Es fcil inducir mielomas en ratn.

A partir de todas estas circunstancias se pueden obtener anti-
cuerpos qumicamente puros (monoclonales) lo cual facilita
el estudio qumico de las inmunoglobulinas
Porter, 1959:
El tratamiento con papana escinde la molcula de
inmunoglobulina (Ig) en tres fragmentos, dos de ellos
idnticos: dos Fab y un Fc
Fab: Antigen Binding (fijador de antgeno)
Fc: Crystallizable (cristalizable)
Edelman, 1959:
El tratamiento con mercaptoetanol y guanidina 8M, seguido
de cromatografa, disocia la Ig en dos componentes de pesos
moleculares 50 kDa (H, de heavy, pesado) y 25 kDa (L, de
light, ligero). Como el peso molecular de la Ig nativa es de
150 kDa, se deduce que su estructura es H
2
L
2

Por estudios inmunolgicos, se detectan los siguientes isotipos:

- Cadena ligera: k, l
- Cadena pesada: g, a, m, d, e

En los dominios constantes puede haber una ligera variabilidad
en cada cadena (afecta a uno o dos aminocidos) dando lugar a
las variantes conocidas como alotipos

En los dominios variables hay muy poca homologa de secuencia;
cada anticuerpo es nico hacia su antgeno: los idiotipos

En cualquier caso, en cada anticuerpo las dos cadenas ligeras y las
dos pesadas son iguales entre s.
CH2
CH2
CH3
CH3 H
H
Cadena pesada o H: g, a, m, d, e

Cadena ligera o L: k, l
Puente disulfuro
C
C
Inmunoglobulinas
Cadenas ligeras

212 aminocidos
2 dominios:
VL, N-t (108aa)
CL, C-t (104 aa)

Cadenas pesadas

Variable; 450 aminocidos en IgG
Cuatro o cinco dominios:
VH, N-t (108 aa)
CH1, CH2, CH3 (y CH4)

En los dominios constantes hay posibilidad de
variaciones alotpicas (uno o dos aminocidos solamente)
1 30 50 93
N C
N C
35
60 87
105
L
H
Regiones hipervariables (CDR) en el dominio
variable de las cadenas H y L en las Ig
Dominio de
Inmunoglobulina
N
C
VL
CL
Cadena ligera, L
N
C
VH
CH1
CH2
CH3
Oligosacrido
Cadena pesada, H
Puente disulfuro entre cadenas pesada y ligera
H
L
Cys H128
Cys L 214 (C-t)
Inmunoglobulina G
Fc
Fab
Fab
H1
H2
L1
L2
Oligosacrido
Inmunoglobulina G
- Constituye el 70-80 % de las Ig sricas
- Contingente mayoritario de la respuesta inmune secundaria
- Cuatro tipos distintos: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4
- Monomrica
- Bajo contenido en carbohidrato (2-3 %)
g
2
k
2
, g
2
l
2

Inmunoglobulina A
- Constituye el 10-20 % de las Ig sricas
- Es la Ig propia de las secreciones (jugo gstrico, saliva, leche)
- Dos tipos: IgA1, IgA2
- Normalmente dimrica: unin covalente por el pptido J
- Alto contenido en carbohidrato (7-12 %)
(a
2
k
2
)
2
, (a
2
l
2
)
2

Inmunoglobulina M
- Constituye el 5-10 % de las Ig sricas
- Es la respuesta inmune primaria
- Cinco dominios en la cadena pesada
- Elevada proporcin de carbohidrato (12 %)
- Pentmero unido por disulfuros y un pptido J
(m
2
k
2
)
5
, (m
2
l
2
)
5

Inmunoglobulina D
- Muy baja concentracin en suero (1 %)
- Posiblemente relacionada con el receptor de antgeno
- Alto contenido en carbohidrato (9-14 %)
d
2
k
2
, d
2
l
2

Inmunoglobulina E
- La ms minoritaria
- Cinco dominios en la cadena H
- Membrana de mastocitos y basfilos
- Relacionada con inmunidad a parsitos helmnticos
- Relacionada con fenmenos de hipersensibilidad
(alergia) inmediata: fiebre del heno, asma.
- Alto contenido en carbohidrato
e
2
k
2
, e
2
l
2

Colgeno
Protena fibrosa, constituda por empaquetamiento de
molculas de tropocolgeno o monmero de colgeno

Tropocolgeno: tres helicoides entrecruzados, cada uno
de peso molecular en torno a los 300 kDa, alrededor de 1000
aminocidos, con una gran cantidad de residuos de Gly, as
como de Pro, normal o hidroxilada.

Los residuos de Lys pueden aparecer asimismo modificados,
bien como 5-hidroxilisina, o como lisina aldehdica (Al-lisina).

Es muy abundante en todos los tejidos de origen mesodrmico,
particularmente en tendones, dermis, fascias y hueso.
Tropocolgeno
Disposicin de los monmeros
de colgeno en la microfibrilla,
que da lugar a un patrn
estriado al microscopio electrnico
Las cadenas de tropocolgeno aparecen unidas unas a otras
en la microfibrilla mediante:

- Cadena lateral de al-lisina unida a cadena lateral de lisina no
modificada a travs de base de Schiff y posterior reduccin

- Cadena lateral de al-lisina unida a otra al-lisina a travs de
condensacin aldlica

- Enlaces de hidrgeno entre el grupo -C=O de la prolina y el
-N-H de la glicina, siempre intercatenarios
MFSFVDLRLLLLLAATALLTHGQEEGQVEGQDEDIPPITCVQNGLRYHDR 50
DVWKPEPCRICVCDNGKVLCDDVICDETKNCPGAEVPEGECCPVCPDGSE 100
SPTDQETTGVEGPKGDTGPRGPRGPAGPPGRDGIPGQPGLPGPPGPPGPP 150
GPPGLGGNFAPQLSYGYDEKSTGGISVPGPMGPSGPRGLPGPPGAPGPQG 200
FQGPPGEPGEPGASGPMGPRGPPGPPGKNGDDGEAGKPGRPGERGPPGPQ 250
GARGLPGTAGLPGMKGHRGFSGLDGAKGDAGPAGPKGEPGSPGENGAPGQ 300
MGPRGLPGERGRPGAPGPAGARGNDGATGAAGPPGPTGPAGPPGFPGAVG 350
AKGEAGPQGPRGSEGPQGVRGEPGPPGPAGAAGPAGNPGADGQPGAKGAN 400
GAPGIAGAPGFPGARGPSGPQGPGGPPGPKGNSGEPGAPGSKGDTGAKGE 450
PGPVGVQGPPGPAGEEGKRGARGEPGPTGLPGPPGERGGPGSRGFPGADG 500
VAGPKGPAGERGSPGPAGPKGSPGEAGRPGEAGLPGAKGLTGSPGSPGPD 550
GKTGPPGPAGQDGRPGPPGPPGARGQAGVMGFPGPKGAAGEPGKAGERGV 600
PGPPGAVGPAGKDGEAGAQGPPGPAGPAGERGEQGPAGSPGFQGLPGPAG 650
PPGEAGKPGEQGVPGDLGAPGPSGARGERGFPGERGVQGPPGPAGPRGAN 700
GAPGNDGAKGDAGAPGAPGSQGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGDRGDAGP 750
KGADGSPGKDGVRGLTGPIGPPGPAGAPGDKGESGPSGPAGPTGARGAPG 800
DRGEPGPPGPAGFAGPPGADGQPGAKGEPGDAGAKGDAGPPGPAGPAGPP 850
GPIGNVGAPGAKGARGSAGPPGATGFPGAAGRVGPPGPSGNAGPPGPPGP 900
AGKEGGKGPRGETGPAGRPGEVGPPGPPGPAGEKGSPGADGPAGAPGTPG 950
PQGIAGQRGVVGLPGQRGERGFPGLPGPSGEPGKQGPSGASGERGPPGPM 1000
GPPGLAGPPGESGREGAPGAEGSPGRDGSPGAKGDRGETGPAGPPGAPGA 1050
PGAPGPVGPAGKSGDRGETGPAGPAGPVGPAGARGPAGPQGPRGDKGETG 1100
EQGDRGIKGHRGFSGLQGPPGPPGSPGEQGPSGASGPAGPRGPPGSAGAP 1150
GKDGLNGLPGPIGPPGPRGRTGDAGPVGPPGPPGPPGPPGPPSAGFDFSF 1200
LPQPPQEKAHDGGRYYRADDANVVRDRDLEVDTTLKSLSQQIENIRSPEG 1250
SRKNPARTCRDLKMCHSDWKSGEYWIDPNQGCNLDAIKVFCNMETGETCV 1300
YPTQPSVAQKNWYISKNPKDKRHVWFGESMTDGFQFEYGGQGSDPADVAI 1350
QLTFLRLMSTEASQNITYHCKNSVAYMDQQTGNLKKALLLKGSNEIEIRA 1400
EGNSRFTYSVTVDGCTSHTGAWGKTVIEYKTTKTSRLPIIDVAPLDVGAP 1450
DQEFGFDVGPVCFL 1464
Seal
Propptido
N-terminal
Helicoide
Propptido
C-terminal
GKTGPPGPAGQDGRPGPPGPPGARGQAGVM
GFPGPKGAAGEPGKAGERGVPGPPGAVGPA
GKDGEAGAQGPPGPAGPAGERGEQGPAGSP
GFQGLPGPAGPPGEAGKPGEQGVPGDLGAP
GPSGARGERGFPGERGVQGPPGPAGPRGAN
Fragmento de secuencia del colgeno aI(1)

(Muchos residuos de Pro aparecen hidroxilados)
Helicoide de poliprolina
Helicoide triple del
tropocolgeno
(fragmento, 14 aa/helicoide)
Cada helicoide es levgiro,
pero se entrelazan en
forma dextrgira
Tropocolgeno
(fragmento)
Vista lateral
Vista frontal
Helicoide aislado del tropocolgeno
Enlaces H a otras cadenas
(grupo -C=O peptdico)
Glicina cada
tres residuos
Residuos de Gly
en tropocolgeno
N
C O
C
O
OH
N
C O
C
O
HO
4-Hidroxiprolina
(mayoritario)
3-Hidroxiprolina
(minoritario)
Hidroxilacin de prolina
Enzima: procolgeno:prolina monooxigenasa
(prolil hidroxilasa), requiere cido ascrbico
La hidroxilacin de prolina favorece la formacin de enlaces H
entre las cadenas
NH
3
+
CH
2
HC OH
CH
2
CH
2
CH
N C
H O
5-Hidroxilisina
Hidroxilacin de lisina
Enzima: Procolgeno:lisina monooxigenasa
(lisil hidroxilasa), requiere cido ascrbico
La lisina hidroxilada es el punto de unin
de oligosacridos al colgeno
CHO
CH
2
CH
2
CH
2
CH
N C
O H
Al-Lisina
(Lisina aldehdica)
Forma enlaces cruzados
(entrecruzamientos) covalentes
entre los helicoides del colgeno
Enzima: lisil aminooxidasa
Al-Lisina
N C
(CH
2
)
4
NH
3
+
O H
CHO
CH
2
)
3
C
C
O
N
H
(
Lisina
Al-lisina
N C
(CH
2
)
4
N
O H
C
(CH
2
)
3
C
C N
H O
N C
(CH
2
)
4
NH
O H
CH
2
(CH
2
)
3
C
C N
H O
Base de Schiff
Entrecruzamiento
(lisil norleucina)
Formacin de entrecruzamiento covalente entre cadenas de
colgeno a travs de lisina y al-lisina, (va base de Schiff)
N C
(CH
2
)
3
O H
CHO
CHO
CH
2
)
3
C
C
O
N
H
(
Al-lisina
N C
(CH
2
)
3
CH
O H
C
(CH
2
)
2
C
C N
H O
C
O
H
Al-lisina
Entrecruzamiento
aldlico
Formacin de entrecruzamiento covalente entre cadenas de
colgeno a travs de dos al-lisinas, (va condensacin aldlica)
Tipo I [a1(I)]
2
a2(I) Mayoritario (huesos, piel, tendones)

Tipo II [a1(II)]
3
Cartlago, vtreo

Tipo III [a1(III)]
3
Vasos sanguneos, cicatrices

Tipo IV [a1(IV)]
3
Membrana basal, cristalino
[a2(IV)]
3

Tipo V [a1(V)]
2
a2(V) Superficies celulares
[a1(V)]
3

[a1(V)][a2(V)][a3(V)]

Tipo VI ntima de la aorta
Tipos de colgeno
Elastina:

Tramos sin estructura definida entrecruzados
por desmosina
N C
(CH
2
)
4
NH
3
+
O H
N C
(CH
2
)
4
NH
3
+
O H
N C
O H
(CH
2
)
4
NH
3
+
N C
O H
(CH
2
)
4
NH
3
+
N C
(CH
2
)
4
O H
+
N
(CH
2
)
2
C
N
(CH
2
)
3
C N
(CH
2
)
2
C
N
O
H
O H
H
O
Lys
Lys Lys
Lys
Desmosina
Formacin de entrecruzamiento covalente entre cadenas de
elastina a travs de cuatro lisinas, (va formacin de desmosina)