EL NUCLEO CELULAR

EL NUCLEO
Partes del ncleo
Envoltura nuclear y sus poros
La envoltura nuclear es una doble
membrana que rodea al ncleo celular
Poro nuclear
Las protenas diferentes que forman los complejos de poro nucleares son
conocidas como nucleoporinas.
Permiten el movimiento de ARN y ribosomas desde el ncleo al citoplasma, y
movimiento de protenas (tales como ADN polimerasa y lamininas),
carbohidratos, molculas de seal y lpidos hacia el ncleo.



Tamao y complejidad
El complejo de poro tiene un
dimetro de cerca de 120
nm, el dimetro de la
abertura es cercano a los 50
nm de ancho.
En condiciones normales, la
seccin que contiene las
nucleoporinas FG, se colapsa
reversiblemente dependiendo
de reguladores del transporte
nuclear. Estas nucleoporinas
estn por lo general,
localizadas en el lado de la
periferia citoplasmtica.

Transporte a travs del complejo de
poro nuclear
Las partculas pequeas (< 50 kDa)
pasaran por el poro mediante difusin
pasiva. Partculas ms grandes pasarn a
travs del dimetro grande del poro, pero
a tasas casi insignificantes.
El paso eficiente a travs del complejo
requiere varios factores proteicos. . La
sencillez del transporte por los poros
nucleares es facilitada por receptores
citoplasmticos llamados Carioferinas
(exportinas e importinas) que se uirn a
FG, los cuales son requeridos para el
transporte ncleo-citoplsmico de
molculas mayores a 40 kDa. En la
ausencia de estos receptores, los
dominios FG imponen una barrera fsica
que impide el paso.
Importacin y exportacin de
protenas
La seal de localizacin nuclear es
reconocida en el citosol por una protena
importina que es capaz de interaccionar
con elementos mviles del complejo del
poro permitiendo el paso de la protena
al interior del ncleo. Ya en el ncleo la
protena se separa y la importina vuelve
al citosol saliendo por el poro. El proceso
implica un gasto de energa de GTP que
va unido a la importina.
Existe adems un sistema anlogo de
exportacin muy parecido en el que
participa una protena llamada
exportina. Mediante este sistema de la
exportina salen los ARN mensajeros ya
procesados en el ncleo. Hay procesos,
como el ensamblaje de las subunidades
del ribosoma, que requieren varios
pasos de sus elementos a travs del
poro. En estos casos primero se
sintetizan las subunidades proteicas en
el citosol que son internalizadas por la
importina al ncleo donde se unen a
ARN ribosmico y una vez ensamblados
salen por el poro va exportina.

El transporte mediado por los poros nucleares
est orquestado por las protenas Ran-GTPasas
ademas de importinas y exportinas. Las
molculas Ran-GTPasas son trascendentales
tanto para la importacin como para la
exportacin de molculas. Son las responsables
de crear un gradiente que dirige el transporte y
crear este gradiente es la nica parte del
transporte por parte de los poros nucleares que
gasta energa.

Las protenas que tienen que ser importadas al
nucleoplasma necesitan poseer una secuencia
de aminocidos o pptido seal de entrada y las
que tienen que ser exportadas un pptido seal
de salida. Estas secuencias de aminocidos
sern reconocidas por las importinas o por las
exportinas, respectivamente. Las protenas de
los poros nucleares no interaccionan
directamente con las protenas transportadas
sino son las importinas y las exportinas.

La capacidad de las importinas
y las exportinas para
transportar su carga est
regulada por GTPasas, enzimas
que hidrolizan GTP liberando
energa. La GTPasa clave en el
transporte nuclear es Ran, que
puede unir o bien GTP o bien
GDP (guanosina difosfato),
dependiendo de si est
localizada en el ncleo o en el
citoplasma.

Mientras que las importinas
dependen de Ran-GTP para
disociarse de su carga, las
exportinas necesitan Ran-GTP
para unirse a su carga.
Gradientes creados por las molculas
Ran entre el citoplasma y el
nucleoplasma
La energa se consume en el
nucleoplasma para crear Ran-GTP a
partir de Ran y fsforo inorgnico,
manteniendo la concentracin de Ran-
GTP elevada, mientras que, en el
citoplasma las Ran-GTP son
rpidamente convertidas en Ran-GDP,
manteniendo la concentracin de
estas ltimas elevada.

Matriz nuclear
El nucleolo
Zonas presentes en el nucleolo
Participacin del nucleolo en la
sntesis de subunidades
ribosomales
Cromatina
Niveles de compactacin de ADN para la
formacin de Cromosomas
Niveles de condensacin del ADN
Nucleosomas
Histonas del "core"
Protenas pequeas y bsicas muy conservadas en la
evolucin. La regin ms conservada de estas histonas
es su dominio central, con un "dominio de plegamiento.

Las colas aminoterminales ricas en lisina y arginina de
estas histonas son ms variables y carentes de
estructura comn. Esta regin es el lugar de numerosas
modificaciones post-traduccionales que, se ha
propuesto, modificaran la carga de la histona, alterando
la accesibilidad del ADN y las interacciones
protena/protena con el nucleosoma.
Es interesante hacer notar que otras protenas que
interaccionan con el ADN tambin presentan el "dominio
de plegamiento" de las histonas.

Histonas de unin
Estas histonas no estn muy conservadas entre las
distintas especies. En los eucariotas superiores estn
compuestas de tres dominios: uno central globular y no
polar, esencial para establecer las interacciones con en
ADN y dos colas amino y carboxilo terminales no
estructuradas y altamente bsicas, que se cree son el
lugar para las distintas modificaciones post-
traduccionales.
Nucleosomas y Fibra
cromatinica
Bucles, asas , minibandas y
cromosoma
El Cromosoma
Cromosomas

El ncleo de cada clula sexual humana,
contiene 46 cromosomas, que son unos
orgnulos filiformes en forma de hilos y
cada uno de ellos, tiene una larga
molcula enroscada de una sustancia
qumica llamada ADN o Acido
desoxirribonuclico, que es la molcula
informativa de la vida.

Cinetocoro del cromosoma
Los cinetocoros inician, controlan y
supervisan los movimientos de los
cromosomas durante la divisin celular. Los
cinetocoros presentan dos regiones:
-el cinetocoro interno se organiza
normalmente sobre secuencias de ADN
altamente repetido (el ADN satlite) y se
ensambla en una forma especializada de
cromatina que persiste a travs del ciclo
celular.
-el cinetocoro externo es una estructura
proteica con muchos componentes
dinmicos que se ensambla y funciona slo
durante la divisin celular.
Cinetocoro del cromosoma
Los telmeros humanos contienen hasta 2.000 veces
repetida la secuencia 5' TTAGGG 3':

5'...TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG..3'
3'...AATCCC AATCCC AATCCC AATCCC AATCCC AATCCC..5




Los telomeros son como los relojes o temporizadores de la
clula, ya que marcan el nmero de divisiones celulares, hasta
que la clula muere

Los telmeros
-La telomerasa es una enzima formada por un complejo
protena-cido ribonucleico con actividad polimerasa, producida
en clulas germinales embrionarias que permite el alargamiento
de los telmeros.
-La telomerasa es reprimida en las clulas somticas maduras
despus del nacimiento, lo que producen un acortamiento del
telmero despus de cada divisin celular.
-Cuando la longitud del telmero alcanza cierto lmite, se
interrumpen las mitosis quedando las clulas en el estadio G0 (G
Cero) de su ciclo celular.
-El desgaste del telmero en el transcurso de ciclos celulares,
impide su funcin protectora del cromosoma, con lo que ste se
vuelve inestable, se fusiona o se pierde. Las clulas que
presentan estos defectos, no slo son incapaces de duplicarse,
sino que dejan de ser viables y se activan los procesos de
apoptosis.
-Se estima que cada telmero humano pierde unas 100 pares de
bases de ADN telomrico en cada replicacin
Complemento cromosmico
Pasos para la elaboracin de un cariotipo
1. Obtencin de la muestra
2. Siembra: agregando 1 mililitro de sangre entera heparinizada a un
medio de cultivo enriquecido con suero fetal bobino, y mitgenos
fitohemaglutinina.
3. Incubacin: Se mantiene a 38.0 grados centgrados con una atmsfera
de CO2 al 5 % y humedad por 72 horas idealmente.
4. Cosecha: Se agrega colchicina a la muestra para detener los ncleos
celulares en metafase,
-posteriormente se cenfrifuga la mezcla para retirar el sobrenadante (suero
sanguineo y medio de cultivo). Se extrae el botn de leucocitos.

Se agrega solucin hipotnica de cloruro de potasio para romper las
membranas celulares y para finalizar el paso de la cosecha se realizan 3
lavados con una solucin de metanol-cido actico 3:1.
5. Goteo: Posterior a los lavados, por medio de centrifugacin, se obtiene
un botn celular blanco, el cual se suspende en la misma solucin fijadora
metanol-cido actico 3:1 y se procede a gotear en un portaobjetos a unos
cuantos centmetros.
6. Envejecimiento: En este paso se espera a que los cromosomas pierdan
humedad. Se puede aplicar calor al portaobjetos para deshidratar la
muestra.
7. Tincin: Existen muchos tipos de tinciones para observar
Bandeo G:

-Digestin de cromosomas con la enzima tripsina de manera controlada.
Desnaturalizacin posterior de estos mediante calor en solucin salina
-Se tien con Giemsa a continuacin. Colorante qumico que enlaza
ADN.
Las bandas oscuras de tincin positiva, son las bandas G. Las plidas
son G negativas, se denominan bandas R. Las regiones oscuras son las
que se replican ms tarde en la fase S y contienen contienen cromatina
ms condensada. Las bandas R suelen replicarse temprano en la fase S
y tienen menos condensada la cromatina. Los genes se concentran
sobre todo en esta banda, mientras que el ADN de las bandas G es
menos activo transcripcionalmente. Las bandas R son Q negativas.

Bandeo Q:

Se tien los cromosomas con un colorante fluorescente quinacrina que
se enlaza preferentemente a ADN abundante en AT y se observan
mediante fluorescencia UV. Las bandas fluorescentes indican los mismos
segmentos que las bandas G.
Cariotipo
- Cromosomas grandes
Grupo A, (cromosomas 1, 2 y 3), meta y
submeta y metacntricos respectivamente.
Grupo B, (cromosomas 4 y 5),
submetacntricos
- Cromosomas medianos
Grupo C, (cromosomas 6, 7, 8, 9, 10, 11,
12 y adems los cromosomas X),
submetacntricos
Grupo D, (cromosomas 13, 14 y 15)
acrocntricos
- Cromosomas pequeos
Grupo E, (cromosomas 16, 17 y 18)
submetacntricos
Grupo F, (cromosomas 19 y 20)
metacntricos
Grupo G, (cromosomas 21 y 22)
acrocntricos
Estructura del cromosoma X
-Tiene una baja proporcin de genes
-Esta compuesto por muchos segmentos de ADN repetitivo que no
codifica para ninguna protena o su funcin no es conocida. Solo el
1,7% del cromosoma codifica para protenas funcionales que
curiosamente son de baja longitud.
-El cromosoma X es ms grande y tiene mayor cantidad de regiones
de eucromatina que su pareja, el cromosoma Y.
-Presenta regiones de homologa con el cromosoma Y sin embargo
existen evidencias de que es posible que el cromosoma Y proceda
de una degeneracin progresiva de un cromosoma X. Adems y
siguiendo con el posible origen de los cromosomas sexuales se suele
aceptar que el cromosoma X procede de una derivacin de algn
cromosoma autosmico
Los nuevos trabajos indican que el cromosoma X que se
crea 'dormido en la mujer tiene activos de forma
permanente cerca del 15 % de sus genes.

Estas grandes zonas despiertas estn bien definidas y
cada mujer las tiene distribuidas de una forma bastante
diferente.

El X guarda en su estructura ms de 1.000 genes y el Y
slo 100. Las mujeres, por lo tanto, tienen en su genoma
muchos ms genes disponibles para ser activados. Segn
Willard, "gran parte de uno de los cromosomas X de la
mujer est 'dormido' para que ambos sexos tengan ms o
menos la misma cantidad de genes expresados".




Cada ser humano tiene aproximadamente 30.000 genes
distribuidos en 46 cromosomas (23 pares) dentro de
nuestras clulas.

Los pares del 1 al 22 son iguales en hombres y mujeres
y se conocen como autosomas. El par nmero 23 est
compuesto por los cromosomas que determinan el sexo.
Las mujeres tienen dos cromosomas X y los hombres un
cromosoma X y un cromosoma Y.


El genoma humano es el ms grande de todos los
genomas. Su talla de 3,2 gigabases (mil millones de
bases) (Gb) (90,6% asociado a la eucromatina*, es
decir, 2,9 Gb vs un total de 3,2 Gb) contiene un nmero
aproximado de 30 000 genes
El genoma humano
Como an falta secuenciar menos del 10% del genoma.
Algunas caractersticas de base de nuestro genoma han
sido identificadas:

a) Las regiones codificantes* del genoma humano
representan solamente alrededor de 1% del total de su
composicin. Del resto, mal llamado junk DNA (ADN
basura), simplemente no se conoce su funcin actual o
pretrita.

b) Nuestros genes estn compuestos de regiones
codificantes (exones) y no codificantes (intrones). Estos
ltimos son significativamente ms grandes en nuestra
especie que en cualquier otro genoma secuenciado
hasta la fecha.



c) Las regiones ricas en pares G-C son tambin las que
presentan mayor densidad de genes y corresponden
mayoritariamente a las bandas claras de los cromosomas
visualizados al microscopio despus de ser coloreados.

d) Una quinta parte del genoma humano est integrado
por regiones de ms de 500 kb, en las cuales no hay
ningn gen. Nuestros genes estn dispersos en un
desierto de reas no codificantes.


e) Se sabe ahora que la complejidad y diversidad de
nuestra especie no est determinada por el nmero de
genes y, mas bien, aparece asociada a las caractersticas
de su proteoma. Este no es otra cosa que el conjunto de
protenas producidas por un organismo. Una estructura
ms compleja (es decir, varios dominios o subregiones
adicionales) y una interaccin ms rica interdominios.

f) Tampoco se ha encontrado diferencias significativas
en los genomas de humanos pertenecientes a distintas
razas.