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HEMOCULTURA

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FAINOR FACULDADE INDEPENDENTE DO NORDESTE

FARMCIA
7 SEMESTRE
MATUTINO
MICROBIOLOGIA
CLNICA

COMPONENTES:
Abino
Ailton
Ariele
Cosme Maciel
Emerson Batista
Fernando
Francisco
Jair
Jamille Magalhes
Jssica
Juliana
Jussara
Luan Magalhes
Maik Chapadeiro
Patrick Novais
Roberto Santos
Tssia Fernandes
Tiago Dutra
Valria
Vanessa Matias
Vnia Lopes



HEMOCULTURA
Hemocultura um exame laboratorial que pesquisa
microrganismos patognicos no sangue por meio da
utilizao de meios de cultura especficos.
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HEMOCULTURA
Hemoculturas so usadas para a deteco de micro-organismos,
como, bactrias ou fungos, presentes no sangue, de maneira em
que se possa identificar os micro-organismos presentes e orientar
o tratamento aos pacientes, ou seja, qual medicao ir usar.

- possvel observar se h ou no a presena de bactrias. Caso
haja, coloca-se o material em outros meios de cultura para
identificar a espcie e, por conseguinte, realiza-se tambm
um antibiograma.
- Dentre as bactrias mais comumente encontradas na
corrente sangunea esto o Staphylococcus sp., Streptococcus
sp. e bacilos gram-negativos.


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HEMOCULTURA
As bactrias responsveis pela infeco podem ser identificadas
pela realizao da hemocultura e so teis no diagnstico
etiolgico e na escolha da terapia.
O exame deve ser solicitado em certos quadros infecciosos, como:
Suspeita de endocardite;
Sepse;
Infeces hospitalares;
Febre de origem no definida;
Infeces em pacientes imunodeprimidos;
Meningites;
Pneumonias graves;
Bacteremia;

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BACTEREMIA
Bacteriemia o termo que designa a indicao da presena
de microrganismos viveis na corrente sangunea.

A maioria dos episdios spticos tem
origem hospitalar e com certa
frequncia envolvem microrganismos
que apresentam grande resistncia aos
antimicrobianos.
Neste contexto o laboratrio clnico
tem um papel importante no manejo
de pacientes com bacteremia, uma vez
que a hemocultura positiva para
microrganismo patognicos.


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A bacteremia tem duas origens :


Bacteremia Primria: que tem origem no prprio sistema
circulatrio, ou pela entrada direta de microrganismo na corrente
sangunea atravs de agulhas, infuses contaminadas, cateter, etc.
Bacteremia Secundria: O corre atravs de drenagem de
pequenos vasos sanguneos ou linfticos, seguindo para corrente
circulatria atravs de disseminao hematognica.

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BACTEREMIA
BACTEREMIA
Conceitualmente, as bacteriemias se classificam em
transitria, intermitente, contnua ou de escape.

TRANSITRIA
rpida;
a mais comum, e ocorre aps a
manipulao de algum tecido
infectado;
Em cirurgias que envolvem reas
contaminadas;
Tambm ocorre em algumas
infeces agudas, localizadas ou
sistmicas;

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INTERMITENTE

Geralmente este tipo ocorre em processos infecciosos
relacionados a abscessos intra-abdominais, plvicos,
perinefrticos, hepticos, prostticos e outros,
caracterstica da endocardite infecciosa aguda e
subaguda e de outras infeces endovasculares.

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BACTEREMIA
CONTNUA OU DE ESCAPE

Ocorre mesmo enquanto o paciente
esteja recebendo antibioticoterapia
sistmica apropriada.
Na maioria das vezes, as bacteriemias
so causadas por um nico
microrganismo.

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BACTEREMIA
SEPTICEMIA

A septicemia uma infeco generalizada considerada
grave, que comea numa regio do corpo e se espalha por
meio da corrente sangunea.


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O QUE CAUSA ?

- Quando o organismo invadido por microrganismos
patognicos (vrus, bactrias, fungos) e esses invasores
conseguem se desenvolver e reproduzir h o incio de uma
infeco. Geralmente, as infeces se mantm locais, ou seja,
acometendo apenas uma regio especfica. No entanto, essa
infeco pode ser tornar sistmica quando o patgeno
consegue se disseminar e atingir as demais localidades do
corpo, dando origem, assim, uma septicemia.


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SEPTICEMIA
SINTOMAS

A febre alta; Fraqueza;
Calafrios; Queda da presso arterial;
Enjo; Vmitos; Diarria;
Acelerao cardaca; tremores;
Aparecimento de nguas e erupes na pele.

Tambm pode ocorrer, ao invs de um estado febril, uma queda
considervel de temperatura (que ter a mesma funo da
febre).

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SEPTICEMIA
DIAGNSTICO

dado atravs da cultura do sangue, mais conhecida como
HEMOCULTURA.


A amostra de sangue submetida a um meio de cultura em que
o microrganismo ter condies adequadas para crescer e se
multiplicar.
O desenvolvimento do microrganismo causador da infeco
possibilita sua identificao, o que fundamental ao tratamento
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SEPTICEMIA
Idealmente, a coleta deve ser feita ANTES do incio da
ANTIBIOTICOTERAPIA de pacientes que configurem quadro
clnico sugestivo de infeco e suficiente para serem submetidos
internao e que apresentem:


Febre(> 38C)
Ou hipotermia (< 36C),
Leucocitose (> 10.000/mm3, especialmente com desvio
esquerda)
Ou granulocitopenia absoluta (< 1000 leuccitos/mm3).
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QUANDO A HEMOCULTURA
INDICADA?
QUANDO A HEMOCULTURA
INDICADA?
As principais indicaes para a realizao da hemocultura so:


Mudana repentina no pulso
Prostrao e hipotenso arterial;
Temperatura corporal apresentando ou no calafrios,
Pacientes com histria de febre baixa, interrompida por
perodos, porm persistente e interligando-se com a presena
de sopro cardaco, e demais casos suspeitos conforme a
avaliao clinica.


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NORMALMENTE INDICADA A
HEMOCULTURA NO APARECIMENTOS DAS
SEGUINTES DOENAS
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NMEROS DE AMOSTRAS

Dever ser considerado de acordo com a condio clnica do
paciente;

Um total de trs culturas em 24 horas costuma ser suficiente
para descartar bacteremias, endocardite ou fungemias;




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Adultos e adolescentes

Endocardite Bacteriana Aguda: Coletar trs amostras de punes venosas
diferentes (brao direito e esquerdo), com intervalo de 15 a 30 minutos, 1-
2 horas antes da antibioticoterapia;
Endocardite Bacteriana Subaguda: Coletar trs amostras, nas primeiras 24
horas, com intervalo mnimo de 15 minutos, com punes venosas
diferentes;
Infeces Sistmicas e Localizadas: Sepsis aguda, Meningite, Osteomielite,
Artrite ou Pneumonia Bacteriana Aguda: Coletar duas amostras de punes
venosas diferentes, antes da antibioticoterapia, com intervalos de cinco
minutos entre as punes. Se possvel, 10 a 20 mL por amostra.
Bacteremia de Origem Indeterminada: Coletar de duas a trs amostras com
15 a 20 minutos de intervalo entre as colheitas.
Paciente com picos febris regulares: Coletar no mais que trs amostras
antes do incio da febre (1 hora) e evitar o pico febril;

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NMEROS DE AMOSTRAS

Crianas

Coletar amostras com 1 a 3 mL.
Duas culturas so
recomendadas para
diagnstico de bacteremias em
recm-nascidos.


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NMEROS DE AMOSTRAS

ORIENTAO PARA OBTER
HEMOCULTURA
Idealmente uma equipe bem treinada de flebotomia deve
coletar todas as hemoculturas de acordo com os protocolos
estabelecidos.

As hemoculturas so indicadas quando est presente uma
doena febril grave que precisar de terapia antimicrobiana,
ou quando uma infeco em um sistema orgnico possa ser
elucidada isolando um patgeno do sangue


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ETAPAS DA HEMOCULTURA

Preparar o material e colocar etiqueta
corretamente;
Limpar a tampa de borracha com lcool 70;
Fazer a antissepsia com clorexidine alcolico 0,5;
Colocar novamente o garrote e puncionar a veia
com agulha e seringa ou dispositivo para coleta
a vcuo.

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Coletar de 5 a 10ml de sangue (adultos)
ou de 1 a 4ml de sangue (crianas) para
cada frasco;
Ao retirar a agulha, fazer compresso
local com algodo seco;
Transferir a amostra para os frascos de
hemocultura;
Dispensar o material de puno em local
apropriado (caixa de perfurocortante).

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ETAPAS DA HEMOCULTURA


HORAS, INTERVALOS E LOCAL DA
COLETA

A coleta deve ser indicada precocemente ao incio dos
sintomas de infeco e antes do incio do tratamento com
antibiticos.

Preferencialmente so coletadas por puno venosa, to logo
se inicie o aumento de temperatura do paciente.

O estado clnico do paciente que vai determinar o momento e o
intervalo entre as coletas.

Nas infeces agudas, recomenda-se a coleta de duas a trs
amostras (dois frascos por puno/amostra) em curto espao
de tempo, ou seja, sequenciais ou dentro de 1 hora.

Preferencialmente no devem ser coletadas a partir de cateter;



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RECOMENDAES PARA COLETA DE
HEMOCULTURAS EM DIFERENTES CONDIES
OU SNDROMES INFECCIOSAS

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CONDIO OU SNDROME INFECCIOSA RECOMENDAES
Suspeita de bacteremia ou fungemia primria
ou secundria, (endocardite, meningite,
osteomielite, artrite e pneumonia.
Obter 2-3 amostras, uma aps a outra, de
diferentes stios anatmicos, logo aps o
incio dos sintomas.
Febre de origem indeterminada (ex.
abscessos ocultos, febre tifide, brucelose ou
outra sndrome infecciosa no diagnosticada)
Obter 2-3 amostras, uma aps a outra, de
diferentes stios anatmicos, inicialmente. Se
negativas nas primeiras 24-48h de incubao,
obter mais duas amostras, uma aps a
outra, de diferentes stios anatmicos
Suspeita de bacteremia ou fungemia com
hemoculturas persistentemente negativas
Considerar mtodos alternativos de
hemoculturas, especficos para aumentar a
recuperao de micobactrias, fungos ou
microrganismos fastidiosos
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RECOMENDAES PARA COLETA DE
HEMOCULTURAS EM DIFERENTES CONDIES
OU SNDROMES INFECCIOSAS

CONDIO OU SNDROME
INFECCIOSA
RECOMENDAES

Endocardite aguda 3 amostras, com intervalo de 15
minutos entre cada uma das
amostras;

Endocardite Subaguda 3 amostras, dentro de 24 horas
Infeces Sistmicas e
localizadas
2 amostras simultneas em stios
diferentes ou em intervalo de
15/20 minutos entre as amostras,
de locais diferentes;

VOLUME DE SANGUE
O volume do sangue uma das variveis mais crticas para a
positividade do exame, pois quanto maior o volume,
maior ser a chance de positividade. Entretanto ,
devemos respeitar:

A idade do paciente (adulto ou criana).
O volume recomendado pelo fabricante para os tipos
de frascos utilizados, mantendo a proporo de
sangue/ caldo de cultura de 1:5 a 1:10 (2).
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Para adultos, coleta-se 5 a 10ml de sangue por frasco em cada
puno, totalizando 20ml, distribudos pelo nmero de frascos
indicados, ou seja, um par de frascos por puno .

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VOLUME DE SANGUE
Na suspeita de fungos dimrficos ou filamentosos (ex.:
Histoplasma) ou micobactrias, o indicado coletar 5 a 10ml
por frasco (conforme instrues do fabricante), de duas a trs
amostras, coletadas com o intervalo de ao menos um dia
entre elas.



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VOLUME DE SANGUE
Para crianas, o volume timo de sangue ainda no est bem
definido, mas os dados da literatura demonstram que h uma
relao direta entre o volume de sangue obtido e a deteco
de ICS.

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VOLUME DE SANGUE
MTODOS PARA A COLETA E
AMOSTRA DE HEMOCULTURA
Lavar as mos;
Usar luvas estril para o procedimento;
Selecionar o frasco de hemocultura que ser utilizado;
Remover a tampa externa do frasco e limpar vigorosamente a
tampa de borracha com lcool 70% , e deix-la protegida com
outro algodo embebido com lcool 70%, at o momento da
inoculao do sangue;

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Definir a veia que ser puncionada, escolher o melhor acesso
venoso para coleta;
Fazer a antissepsia com clorexidine alcolico 0,5%,
friccionando a pele em crculos semi-abertos a partir do ponto
a ser puncionado. Secar por 30 segundos. Em seguida, aplicar
novamente clorexidine alcolico 0,5% utilizando novo algodo
ou gaze. Esperar cerca de 30 segundos para secar, repetir o
procedimento por mais uma vez e aguardar secar.


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Fazer a puno, aspirar coletando a quantidade
de sangue e o nmero de amostras
recomendados
Remover o algodo protetor da tampa do
frasco e deixar secar.
Fazer a inoculao do sangue diretamente no
frasco sem fazer a troca da agulha. Deixando-o
escoar livremente, pois os frascos para
hemocultura so fechados a vcuo.

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MTODOS PARA A COLETA E
AMOSTRA DE HEMOCULTURA
Homogeneizar a amostra por inverso do frasco, duas a trs
vezes;
Identificar a amostra corretamente com os dados do paciente
e o horrio da colheita, sem rasurar o cdigo de barras;
Encaminhar ao laboratrio rapidamente, em temperatura
ambiente;

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MTODOS PARA A COLETA E
AMOSTRA DE HEMOCULTURA
TIPOS DE FRASCOS
Tradicionalmente um par de hemoculturas (equivalente a uma
amostra ou uma puno) compreende um frasco aerbio e
um anaerbio.

Estudos anteriores, das dcadas de 80 e incio dos anos 90,
Indicavam que a recuperao de anaerbios estava em declnio,
j que alguns dados deram fundamentao ao conceito de
que os frascos anaerbios deveriam ser dirigidos a casos
selecionados.

Sendo assim, alguns autores preconizaram o uso de rotina de
somente frascos aerbios.


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Estudos que mostram que a coleta do par incluindo o frasco
anaerbio leva ao aumento do isolamento de Staphylococcus
spp., Enterobacteriaceae, alguns Streptococcus spp. e
Enterococcus spp., anaerbios estritos e facultativos.

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TIPOS DE FRASCOS
Os materiais devem ser colhidos e inoculados em frascos
anaerbios de hemocultura, at o volume mximo permitido,
que de 8 mL.
De uma maneira geral deve-se colher 20,0 mL de sangue por
hemocultura
Frasco aerbio adulto: 8 a 10 mL/frasco.
Frasco anaerbio adulto: 8 a 10 mL/frasco.
Frasco peditrico: 1 a 3 mL/frasco.

Quando o material for sangue e lquidos biolgicos,
pode ser armazenado por um perodo de at 24 horas,
temperatura ambiente, em frascos anaerbios.



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TIPOS DE FRASCOS
Quando a amostra obtida possuir volume total inferior ao
preconizado por frasco, o maior volume de sangue deve ser
inoculado no frasco aerbio para que no haja perda na
deteco de bacteriemias causadas por Pseudomonas
aeruginosa, Stenotrophomonas maltophilia ou leveduras,
que so aerbios estritos.
O menor volume restante deve ser inoculado no frasco
anaerbio.
Ao ser coletada mais de uma amostra, anotar nos respectivos
frascos (aero e anaero) quais frascos so do mesmo local de
puno ou stio anatmico (ex.: 1 amostra, veia perifrica,
cateter etc.).

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TIPOS DE FRASCOS


FATORES QUE INFLUENCIAM DIRETAMENTE
OS RESULTADOS DE HEMOCULTURAS:


Volume de sangue coletado por frasco:

O volume ideal corresponde a 10% do volume total do frasco de
coleta. Quanto maior o volume de sangue inoculado no meio de
cultura, por amostra, melhor recuperao do microrganismo,
respeitando-se a proporo sangue/meio citada, pois o sangue
em desproporo com o meio pode inibir o crescimento de
microrganismos.

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Mtodo de antissepsia:

A execuo de tcnica de antissepsia para reduzir os riscos de
contaminao de hemocultura.

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FATORES QUE INFLUENCIAM DIRETAMENTE
OS RESULTADOS DE HEMOCULTURAS:


IDENTIFICAO DOS FRASCOS E
PEDIDO MDICO
REQUISIO MDICA
Toda requisio de exames microbiolgicos deve conter:

Identificao do paciente: Nome completo, nmero de
pronturio ou registro.
Local de internao: Clnica e leito.
Data da solicitao:
Identificao da amostra: stio de coleta e tipo de amostra.
Uso de antimicrobianos
Suspeita Clnica
Exames solicitados
Identificao do mdico requisitante: carimbo.



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IDENTIFICAES DAS AMOSTRAS

Nome completo do paciente;
Identificao da amostra;
Horrio da coleta.


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IDENTIFICAO DOS FRASCOS E
PEDIDO MDICO
TRANSPORTE
Nunca refrigerar o frasco.
Manter o frasco em temperatura ambiente e encaminhar o
mais rpido possvel para o laboratrio.



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IDENTIFICAO DOS FRASCOS E
PEDIDO MDICO


Dever ser considerado de acordo com a condio clnica do
paciente.


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NMERO DE FRASCOS

ADULTOS E ADOLESCENTES

Endocardite bacteriana aguda: coletar trs amostras de
punes venosas diferentes (brao direito e esquerdo), com
intervalo de 15 a 30 minutos, 1 a 2 horas antes da
antibioticoterapia.


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NMERO DE FRASCOS

Endocardite bacteriana subaguda: coletar trs amostras, nas
primeiras 24 horas, com intervalo mnimo de 15 minutos, com
punes venosas diferentes.

Infeces sistmicas e localizadas: como sepsis aguda,
meningite, osteomielite, artrite ou pneumonia bacteriana
aguda: coletar duas amostras de punes venosas.



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NMERO DE FRASCOS

Bacteremia de origem indeterminada: coletar quatro a seis
amostras de punes venosas diferentes em 48 horas;




Paciente com picos febris regulares: coletar no mais que
trs amostras antes do incio da febre (1 hora).


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NMERO DE FRASCOS

CRIANAS

Coletar amostras com 0,5 ml a 3 ml.
Duas culturas so recomendadas para diagnstico de
bacteremias em recm-nascidos.


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NMERO DE FRASCOS


CONSIDERAES GERAIS

Coletar amostra, sempre que possvel, antes da
antibioticoterapia;
Fazer antissepsia antes de coletar as amostras;
Aguardar 72 horas aps mudana na antibioticoterapia para
coletar novas amostras do mesmo stio de infeco;
Utilizar frascos e meios de transporte apropriados
Enviar a amostra ao laboratrio o mais breve possvel
Em situaes onde o prprio paciente ir realizar a coleta
(urina, fezes), instruir de maneira clara o paciente e certificar-
se de que ele entendeu suas orientaes.

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SISTEMAS MANUAIS
Utiliza um caldo enriquecido (TSB ou BHI)
inocular 2 frascos
Aerobiose
anaerobiose (feito vcuo e contem suplemento para produo
de CO2 , N2 , H2).

Os frascos so incubados a 35C por 7 dias, podendo ser visualizado
por:
turvao do caldo;
hemlise, quando as bactrias so hemolticas;
produo de gs;
Mais raramente pela presena de microcolnias na superfcie
da camada de sangue.
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Lmina para microscopia (Gram);
Subcultivo;
Subcultivo + bacterioscopia;
Alterao no meio de cultura, nas primeiras 24 horas (6-
18h)sub-cultivo a cego;
Inspeo visual diria;
Caso s cresa em antibiose;
Repique para gar enriquecido;
A maioria dos microrganismos crescem de 48 a 72 horas

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SISTEMAS MANUAIS
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SISTEMAS MANUAIS
O sistema manual em caldo tem a vantagem de ser de baixo
custo;
Bem trabalhoso;
Aumenta o risco de contaminao porque vrias
manipulaes so necessrias;


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SISTEMAS MANUAIS

SISTEMA SEPTI-CHEK (BBL)

Sistema bifsico que utiliza :
Meio de cultura slido em lmina:
Cmara plstica que acoplada ao frasco com caldo de
hemocultura padro.
O sangue inoculado no caldo e a cmara para laminocultivo
adicionada, formando o conjunto a ser usado.
Aps 4 a 6 horas de incubao a 35C;
A lmina banhada com o caldo, por inverso do frasco
(sendo assim inoculado como um sub-cultivo), sem a
necessidade de abertura do frasco.
Inspecionados visualmente para evidncia de crescimento.

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O sistema funciona bem para recuperao de aerbios e
facultativos;
O mtodo menos trabalhoso que o manual em caldo e as
colnias j so disponveis para testes de identificao e
testes de sensibilidade a antimicrobianos.

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SISTEMA SEPTI-CHEK (BBL)

Mediante a presena de microscopia com morfologia
suspeita e sem crescimento no subcultivo em aerobiose
ou caso haja crescimento somente no frasco anaerbio,
suspeita-se de anaerbios.

Em suspeitas diagnsticas de microrganismos de
crescimento mais lento, perodos mais prolongados de
incubao devem ser indicados.


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SISTEMA SEPTI-CHEK (BBL)

BENEFCIOS:

Contnuo monitoramento pelo sistema (leitura em minutos).
Maior sensibilidade e rapidez para deteco de positividade
da amostra (agitao).
Possibilidade de criao de banco de dados dos
microrganismos isolados e dados demogrficos, alm do
interfaceamento com o sistema do laboratrio, o que facilita
a liberao dos resultados negativos.

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SISTEMA SEPTI-CHEK (BBL)

Menor risco de contaminao laboratorial, pois o repique s
realizado em amostras positivas.
No necessrio repicar amostra negativa.
Economia de tempo e material (agulha, seringa e placas com
meios de cultura para repiques) com menor risco de
manipulao.
Determinao do tempo para positividade de cada frasco,
auxiliando no diagnstico de infeces relacionadas a cateter.



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SISTEMA SEPTI-CHEK (BBL)

Os frascos de plstico possuem a vantagem de serem mais
leves e provocarem menos risco de acidentes.

A principal desvantagem do mtodo o custo ainda elevado,
algumas vezes no compensados pelas fontes pagadoras.

Os frascos aerbios devem manter rea suficiente de volume
de ar para permitir crescimento de bactrias aerbias estritas
como Pseudomonas aeruginosa e leveduras,enquanto os
frascos para anaerbios devem ter uma mistura de gases livres
de oxignio, evitando-se a introduo de ar durante a coleta.
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SISTEMA SEPTI-CHEK (BBL)

Pacientes com infeco avanada pelo HIV, bem como outros
imunossuprimidos, tem risco elevado de infeces por
Mycobacterium tuberculosis e pelo complexo Mycobacterium
avium, assim como por Histoplasma capsulatum.

Em geral, a maioria dos meios comercializados para
automao tem desempenho semelhante para os patgenos
usuais. Apesar da recomendao de coletar amostras antes do
incio da antibioticoterapia, muitos pacientes j esto
recebendo antimicrobianos no momento da coleta,
diminuindo potencialmente a chance de positividade.

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SISTEMA SEPTI-CHEK (BBL)

Em situaes rotineiras, utilizando-se o mtodo automatizado
de monitorao contnua, recomenda- se que os frascos de
hemocultura sejam incubados por cinco dias para bactrias
aerbias, anaerbias e a grande maioria das leveduras (16), e
42 dias para frascos especiais para outros fungos e
micobactrias (32), ou conforme instrues do fabricante.

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SISTEMA SEPTI-CHEK (BBL)

MTODO DE LISE-CENTRIFUGAO
Durante muitos anos foi considerado o padro ouro para
hemoculturas.

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O sistema Isolator (laboratrios Wampole) constitui de tubo
a vcuo adulto e peditrico contendo uma substncia lisante
de leuccitos e hemcias, liberando microrganismos
intracelulares.

Os tubos so centrifugados e, aps desprezar-se o
sobrenadante (contendo debris celulares, agentes
antimicrobianos, plasma e complemento), o sedimento
contendo o suposto agente etiolgico semeado em
qualquer tipo de meio inclusive para patgenos especiais
como Legionella, Micobactrias e fungos.

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MTODO DE LISE-CENTRIFUGAO
Tem ainda a possibilidade de se fazer a contagem de colnias
por mL de sangue (cultura quantitativa).

Este mtodo tem como limitao o custo elevado e o fato de
ser trabalhoso, o que inviabiliza o processamento de grande
nmero de amostras.
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MTODO DE LISE-CENTRIFUGAO
O sistema Hemobac Trifsico (Probac) composto por um
laminocultivo com duas fases acoplado parte superior de
um recipiente plstico contendo caldo suplementado com
extrato de levedura e SPS que pode ser acrescido de
substncias para neutralizao de antimicrobianos.

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MTODO DE LISE-CENTRIFUGAO

AS FACES DO LAMINO CULTIVO SO:

Face larga: gar Chocolate e prximo tampa o Indicador de
CO2 (de forma redonda) que detecta o crescimento de
bactrias e fungos;
Face dividida: gar Sabouraud, gar MacConkey.

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CARACTERSTICAS DOS COMPONENTES:
Fase 1: - Caldo suplementado (TSB, Piridoxina, L-Cistena,
Extrato de levedura): promove o crescimento de
microrganismos, devido riqueza de nutrientes.

SPS: possui efeito anticoagulante, favorece o cultivo devido
ao anticomplementar, antifagocitria e inibitria da
atividade microbiana dos aminoglicosdeos e outras drogas
que podem estar presentes no sangue.

Substncias orgnicas e inorgnicas que inibem os
antibiticos, favorecendo o isolamento bacteriano durante a
teraputica com antimicrobianos.

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Fase 2: Meios de cultura slidos que permitem o crescimento
das bactrias (gar Chocolate, gar MacConkey) e fungos
(gar Sabouraud) produtores de bacteriemia.

Fase 3: Indicador: a viragem de cor para rosa forte e vermelho
ocorre pela presena de CO2 produzido pelo microrganismo.

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CARACTERSTICAS DOS COMPONENTES:
HEMOCULTURA AUTOMATIZADA
O QUE ?

A hemocultura automatizada permite contnua monitorizao
do crescimento bacteriano, que permite deteco de
bactrias 24 horas ao dia.

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FATORES DE INTERFERNCIA NO
RESULTADO
Contaminao com flora normal da pele;
Volume do sangue cultivado;
Tipos de meios utilizados;
Uso de antibiticos; e
Presena de microrganismos fastidiosos.
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IMPORTANTE PARA A COLETA
Quando solicitado hemocultura para aerbios, anaerbios e
fungos, so colhidos 3 frascos (1 aerbio, 1 anaerbio e 1
fungo) no mesmo acesso e momento. Se houver solicitao
de 2 amostras, aguarda-se 20 minutos e colhe-se os 3 frascos
de outro acesso venoso (nova puno).

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VANTAGENS
Contnuo monitoramento pelo sistema (leitura em minutos).
Maior sensibilidade e rapidez para deteco de positividade
da amostra(agitao).
Possibilidade de criao de banco de dados
dos microrganismos isolados e dados demogrficos, alm do
interfaceamento com o sistema do laboratrio, o que facilita a
liberao dos resultados negativos.
Determinao do tempo para positividade de cada frasco,
auxiliando no diagnstico de infeces relacionadas a cateter.


73
Menor risco de contaminao laboratorial, pois o repique s
realizado em amostras positivas.

No necessrio repicar amostra negativa.

Economia de tempo e material (agulha, seringa e placas com
meios de cultura para repiques) com menor risco de
manipulao.

Os frascos de plstico possuem a vantagem de serem mais
leves e provocarem menos risco de acidentes.

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VANTAGENS
DESVANTAGENS

A principal desvantagem do mtodo o custo ainda elevado,
algumas vezes no compensados pelas fontes pagadoras.

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MTODO AUTOMATIZADO
ltimos anos foram desenvolvido novos mtodos;
Grandes vantagens (rapidez);
Monitorizaro constante das amostras;
Baseado na deteco de CO2, produzido pelos
microrganismos .

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Segundo protocolos, so 5 dias de incubao;
Maioria dos resultados ocorrem nas primeiras 24 horas;
O subcultivo torna-se desnecessrio quando o negativo.


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MTODO AUTOMATIZADO

Na incubao, os equipamentos monitoram continuamente a
cada 10 minutos durante 24 horas ao dia;
Aviso imediato caso haja positividade, alarmes e por meio da
cor da tela no mdulo.

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MTODO AUTOMATIZADO
Identificao final para bactrias ocorre entre 4horas a
18horas;
J para as leveduras o resultado final ocorre na maioria dos
casos at 24horas.
Em monitorao contnua recomenda-se 42 dias para frascos
especiais para outros fungos e micobactrias.


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MTODO AUTOMATIZADO
IMPORTANTE:

O tempo de incubao diretamente proporcional ao
nmero de microrganismos presente no sangue;
Sendo menor quando a carga bacteriana for alta.

80
MTODO AUTOMATIZADO

COLETA DE HEMOCULTURAS PARA DIAGNSTICO
DE INFECO RELACIONADA A CATETER VASCULAR

A remoo e cultura do cateter vascular foram durante muito
tempo o padro-ouro para o estabelecimento do diagnstico
de infeco relacionada a cateter, especialmente em cateteres
venosos centrais (CVCs) de curta permanncia.

Apenas 20% a 25% dos cateteres removidos com suspeita de
infeco realmente eram os responsveis pelo processo
infeccioso.

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Atualmente o diagnstico laboratorial pode ser dividido em
tcnicas que necessitam da retirada do cateter e tcnicas
conservadoras, que so realizadas na presena do cateter,
buscando obter o diagnstico sem a sua remoo.



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COLETA DE HEMOCULTURAS PARA DIAGNSTICO
DE INFECO RELACIONADA A CATETER VASCULAR

Se a amostra for obtida a partir de cateter vascular, deve ser
realizada a antissepsia do local a ser puncionado com lcool
70% (dispositivo) ou clorexidine alcolico (pele).

no necessrio descartar o volume inicial de sangue ou lavar
o acesso com salina para eliminar heparina ou outros
anticoagulantes, pois a alta concentrao protica dos meios
de cultura normalmente neutraliza o efeito antimicrobiano
eventual do anticoagulante.

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COLETA DE HEMOCULTURAS PARA DIAGNSTICO
DE INFECO RELACIONADA A CATETER VASCULAR

Alm disso, o descarte do volume inicial de sangue do cateter
com o intuito de evitar contaminao assunto controverso e
esta prtica ainda realizada em muitas instituies, mesmo
nas peditricas, onde o volume de sangue ponto crtico.
Porm, estudo realizado por Dwivedi e col. Em 2009,
demonstrou que o descarte da alquota inicial no diminui a
chance de contaminao da amostra, tornando esta prtica
desnecessria.

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COLETA DE HEMOCULTURAS PARA DIAGNSTICO
DE INFECO RELACIONADA A CATETER VASCULAR

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MTODO MAKI
MTODO MAKI
O mtodo descrito por Maki o mais amplamente utilizado
para determinar a relao entre colonizao do cateter e
infeco. O segmento distal do cateter rolado (deve-se
evitar a esfregao) 4 a 5 vezes sobre a superfcie de uma
placa de gar-sangue, com auxlio de uma pina estril.
Aps incubao, durante 18 24 horas 35C,
preferencialmente em atmosfera de CO2, realizada a
contagem de colnias. recomendvel fazer uma nova
observao da placa aps 48 - 72h. Esta tcnica avalia
somente a superfcie externa do cateter. Considera-se o
crescimento de 15 UFC por placa como sugestivo de
colonizao do cateter.

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Na ausncia de cultura semiquantitativa, a infeco
relacionada ao dispositivo vascular tambm pode ser
diagnosticada clinicamente quando h drenagem de secreo
purulenta na juno da pele com o cateter e realizando-se a
cultura deste material.
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MTODO MAKI

A tcnica mais sensvel a cultura quantitativa, em que o
segmento do cateter imerso em caldo e sonicado
(ultrassom) para a liberao dos microrganismos aderidos nas
superfcies intra e extraluminal. Em seguida so executadas
diluies e culturas quantitativas a partir do caldo, aps
sonicao.

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MTODO MAKI
I
INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Por muitos anos tem sido consenso entre
clnicos e microbiologistas que a
hemocultura um dos testes
laboratoriais mais importantes para o
diagnstico de infeces graves.
O ndice de positividade pode variar
bastante de acordo com o tipo e o grau
de complexidade da instituio.

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Quando uma hemocultura inesperadamente positiva (na
ausncia de sinais ou sintomas) ou quando somente uma
dentre vrias amostras positiva para um determinado
microrganismo, este pode eventualmente ser considerado um
contaminante.
90
I
INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Alguns microrganismos tm alto valor preditivo positivo
para bacteremia verdadeira (> 90%), mesmo quando
isolado em somente uma amostra.
J alguns tipos de microrganismos so mais
frequentemente associados com contaminao (< 5% de
chance de bacteremia verdadeira).

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I
INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Microrganismos que apresentam
infeco verdadeira:
Staphylococcus aureus, Escherichia coli e
outras Enterobacteriaceae, Neisseria
meningitidis, Streptococcus pneumoniae,
Pseudomonas aeruginosa, Brucella spp.,
Streptococcus pyogenes, Streptococcus
agalactiae, Listeria monocytogenes,
Neisseria meningitidis, Neisseria
gonorrhoeae, Haemophilus influenzae,
membros do grupo Bacteroides fragilis,
Candida spp. e Cryptococcus spp.

92
I
INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Microrganismos como Streptococcus viridans representa 38%
das bacteremias verdadeiras;

Enterococcus spp. 78%;

Staphylococcus coagulase
negativo 15%.

93
I
INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Alguns tipos de microrganismos so mais frequentemente
associados com contaminao, como:

Corynebacterium spp.;
Micrococcus spp.;
Bacillus spp.;
Propionibacterium acnes.

94
I
INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Alm disso, hemoculturas falsamente positivas
levam a trabalho extra ao laboratrio, realizao
de exames adicionais, uso desnecessrio de
antibiticos e tempo prolongado de internao,
com aumento dos custos.

95
I
INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Portanto, toda hemocultura positiva, com
germes potencialmente contaminantes, deve ser
criteriosamente avaliada, incluindo pacientes
neonatos e lactentes, pela dificuldade de coleta
em diferentes stios anatmicos.
Muitos destes casos no so suficientemente
avaliados somente pela identificao do
gnero/espcie.

96
I
INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Os mtodos em uso requerem de horas a dias de incubao
para detectar o crescimento de microrganismos.

No h um sistema comercial disponvel ou meio de cultivo
capaz de possibilitar a deteco de todos potenciais
patgenos.

Quanto maior a quantidade de sangue inoculada no meio,
maior ser a sensibilidade do teste.

A contaminao ocasional do sangue difcil de ser evitada,
principalmente no ato da coleta e semeadura.





97
I
LIMITAES DO MTODO

O momento da coleta muito importante para a eficcia do
exame, e, apesar de no haver um consenso geral,
recomenda-se que a coleta seja efetuada preferencialmente
no momento do pico febril e antes de se iniciar qualquer
procedimento teraputico com antibiticos e
quimioterpicos.
98
I
LIMITAES DO MTODO

O nmero de amostras coletadas no consensual, porm,
admite-se que o ideal um mnimo de 3 amostras em 24
horas, em duplicata (desta forma pode-se rastrear possveis
contaminaes)

Algumas bactrias fastidiosas como brucelas e alguns
hemfilos podem no ser recuperadas pela hemocultura.

99
I
LIMITAES DO MTODO

COMUNICAO DOS RESULTADOS
O exame mais importante a ser realizado em qualquer
hemocultura sinalizada como positiva a colorao de Gram.

altamente provvel que esta informao descritiva das
caractersticas morfotintoriais, juntamente com os dados do
paciente, ir ditar a escolha da antibioticoterapia primria
com impacto positivo na escolha teraputica e na evoluo
clnica.

100
Portanto, o resultado parcial de hemoculturas deve ser
considerado de alta prioridade para notificao ao mdico
assistente, inclusive por escrito. sempre til rever outras
culturas do mesmo paciente, para identificar possveis pistas
da identificao do agente.

O nmero de hemoculturas positivas sobre o total de
amostras enviadas e o tempo de positividade tambm devem
ser analisados ao reportar os resultados.

101
COMUNICAO DOS RESULTADOS
Estudos mostram que um perodo curto para a notificao do
resultado ao mdico consiste de importante fator para
diminuir o tempo de internao e propiciar melhor evoluo
do paciente. Este deve ser considerado um resultado crtico.

102
COMUNICAO DOS RESULTADOS
REFERNCIAS
Koneman, Elmer; et al. Diagnostic Microbiology. Lippincott, USA, 5 ed.
1997.

Hemocultura. Disponvel em :
<http://www.labtestsonline.org.br/understanding/analytes/blood-
culture/tab/test> Acessado em: 29 de maro de 2014.

BACTEREMIA. Disponvel em :
<http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/microbiologia/mod_1_2004.
pdf> Acesso em: 02 de abril de 2014.

103
INFECTOPEDIA COLETA E HEMOCULTURA. Disponvel em:
<http://infectopedia.com/exames/hemocultura > Acesso em 09 de
abril de 2014.

HEMOCULTURA: RECOMENDAES DE COLETA, PROCESSAMENTO E
INTERPRETAO DOS RESULTADOS. Maria Rita Elmor de Araujo,
Mdica Patologista Clnica Coordenadora mdica dos setores de
Microbiologia dos Laboratrios do Hospital Beneficncia Portuguesa,
So Paulo (SP) e Hospital do Corao, So Paulo (SP), Brasil. Disponvel
em: <file:///C:/Users/Gilson%20Pereira/Downloads/12-41-1-PB.pdf.>
Acesso em 09 de abril de 2014.


104
REFERNCIAS
Weinstein, M.P., M.L. Towns, S.M. Quartey, S. Mirrett, , L.G. Reimer, G.
Parmigiani, and L.B. Reller. The clinical significance of positive blood
cultures in the 1990s; a prospective comprehensive evaluation of the
microbiology, epidemiology and fungemia in adults. Clin. Infect. Dis.
1997. 24:584-602.

Baron, E.J., M.P. Weinstein, W.M.Dunne Jr, P.Yagupsky, D.F. Welch, and
D.M. Wilson. Cumitech 1 C, Blood Cultures IV. Coordinating ed. E.J.
Baron. 2005. ASM Press, Washington D.C.

Araujo, M.R.E. Como pode ser feito o diagnstico microbiolgico das
infeces relacionadas a cateter? em Microbiologia Clnica: 156
perguntas e respostas / Caio Marcio Figueiredo Mendes ..[et al] So
Paulo: Sarvier, 2005, p. 98.


105
REFERNCIAS
106
OBRIGADO!