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Alunas: Paula Suellen Guimares Gois

Thdia Evelyn de Arajo


Universidade Federal de Uberlndia
Instituto de Cincias Biomdicas
Programa de Ps-graduao em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Disciplina IPA: Imunologia Fundamental
Introduo
Sistema Imune Inato

Grupos de protenas => MAMPs (padres
moleculares associados a patgenos);

Receptores NLR = NOD1 e NOD2
Introduo


Infeces bacterianas;
Protenas citoslicas;

NOD1 e NOD2
Fragmentos de
peptideoglicanos
Inicia a transcrio
de genes
NF-B MAPK
Introduo


iE-DAP (D-glutamilmeso diaminopimlico) = dipeptdeo (Gram- e
algumas Gram+)



MDP= muramildipeptdeo (todos os grupos de bactrias existentes)
NOD 1
NOD 2
NOD2 e Doena de Crohn
Predisposio
gentica
Fatores
ambientais
-Resposta
inflamatria
anormal contra
microbiota;
-Desordem
gentica; (Ogura et
al, 2001)
Mutao
Biologia da ativao de NOD
Arquitetura de NOD1 e NOD2: terminaes ricas em leucina (LRR),
domnio central de ligao de nucleotdeos (NBD), domnio de
recrutamento de caspases (CARD).
Domnios LRR (terminaes ricas em leucina)
Deteco e reconhecimento
MDP
(NOD2)
iE-DAP
(NOD1)
Alterao conformacional
de protenas
Oligomerizao de NBD
Recrutamento de RIP2 CARD CARD
Plataforma de
sinalizao
NOD1: grande variedade de clulas, de origem hematopoitica ou
no;
NOD2: clulas hematopoiticas de origem linfide ou mielide.





Cls do epitlio
intestinal
(Paneth Cells)
TNF, IFN,
vitamina
D3,
butirato
Regulao
positiva de
NOD2
Responsividade
a MDP
Regulao da expresso de NODs: LPS, IFN ou TNF em macrfagos.
A exposio ao peptideoglicano no citosol
A transduo de sinais NOD na ausncia de infeco celular.
Cls. Epiteliais: ligantes de NODs absorvidos por endocitose.


Ligantes modificados de NODs tem sido utilizados:

-L18-MDP: para NOD2;
-C12-iE-DAP: para NOD1;
Facilitam a
ativao de
NODs

Junes GAP: medeiam a ativao de NOD1 em cls adjacentes s
cls infectadas.
NOD 1 e NOD2 podem detectar ligantes
liberados por bactrias extracelulares!
Oligopeptdeos transportadores: peptdeo transportador 1
(PEPT1) e famlia de transportadores de soluto 15, membro 4
(SLC15A4).
Ativao de NOD por peptideoglicanos ambientais

Estimulao de NODs pela microbiota intestinal = homeostase;

Estimula a secreo de
antimicrobianos
Durante diviso celular bacteriana: transglicosilases lticas
quebram peptideoglicanos;
Peptideoglicano continuamente liberado: bactrias Gram -
Ligantes de NOD em sobrenadantes de cultura;
Peptideoglicanos de bactrias comensais participam da
regulao da resposta imune;


Lactobacillus salivarius
Colite induzida por TNBS
Efeito protetor
dependente de
NOD2 (IL-10)
Linfcitos intra-epiteliais => amidase peptideoglicana (PGLYRP2)
Clivam MDP in vitro
Reduo a secreo de
citocinas dependente de
NOD 2
Fragmentos estimuladores de NOD;
Doena de Crohn
Alterao da sinalizao
atravs de NOD2
Alterao da deteco de
bactrias no-patognicas
Homeostase
intestinal
Localizao celular de NOD
Recrutamento de NOD1 e NOD2 para a membrana;

S. flexneri
NOD1
NOD2
ATG16L1
Autofagossomos
Mutao de
NOD2: Doena
de Crohn
Sinalizao pode ocorrer em outras regies;
Bactrias residentes em endossomos
Proximidade a uma membrana
Mais trabalhos nessa rea so
necessrios!
Ligao dos ligantes NOD


Ligao direta ;
MDP
iE-DAP
Sinalizao NOD
Sinalizao de NOD2 deve ser regulada
Perda de funo Aumento da
funo
Doena de Crohn
Sndrome de Blau e incio
precoce de sarcoidose
Funo de ligao de nucleotdeos
NOD1 e NOD2 so capazes de se ligar a ATP.
NBD
ATP
Se ligam a ATP: ativao;
Hidrolisam o ATP: desativao;
Ativao e regulao de RIP2
NOD1 e NOD2 passam por auto-oligomerizao : ativao de RIP2;
Papel de RIP2;



RIP2
TAK1
(NR2C2)
TAB2
TAB3
IKB-
quinase
(IKK)
Inibidor de
NF-B (IB )
Fosforilao e
degradao
NOD 1 e NOD2: ativao de
MAPK (ERK1) ERK2, JNK e
p38)
Regulao de NOD pelo citoesqueleto
Tratamento de macrfagos com citoealasina D: potencializa
macrfagos para ligantes de NOD;
Reguladores do
citoesqueleto:
Rac1 e ARGHEF7
Aumento da ativao
direcionada a MDP
Vimentina
interage com
NOD2
Afeta a induo de
NF-B em resposta
a MDP
GTPases: RAC1, CDC42 e RHOA:
direcionam a ativao de NF-B
dependente de NOD1;

ARGHEF2: potencializa sinalizao de
NOD1 e NOD2
Ausncia de
Peptideoglicano
GTPases ativam NOD
independente de
ligantes
Consequncias da ativao de NOD
Ativao de NODs: resposta inflamatria inata
Pelas vias de sinalizao NF-B e MAPK
TNF, IL-6, CCL2,
CXCL8 (IL-8),
CXCL2, defensina
Recrutamento e
produo de clulas
do S.I. Inato
Resposta imune adaptiva
NOD1, NOD2 e co-estimulao por TLR: direciona diferenciao de LT
para fentipo TH2.
Associado a
R.I. contra
patgenos
extracelulares
Doena de Crohn: polimorfismo
de NOD2 provoca uma R.I. de
perfil Th1 exacerbado.
(Magalhes et al., 2008)
Funes antimicrobianas das protenas NOD
Camundongos deficientes em NOD1 e NOD2: susceptibilidade a m.o.
patgenos;

Yersinia pseudotuberculosis,
Listeria monocytogenes,
Citrobacter rodentium
Staphylococcus aureus
Helicobacter pylori
Legionella pneumophila
Salmonella spp
NOD2
NOD1
Mecanismo de escape
Modulao da composio ou liberao de peptideoglicano;
Ex: Desacetilao de N-acetilglucosamina de Listeria spp.
Impede a deteco por NOD
Enzimas modificadoras de peptideoglicanos; Helicobacter
pylori
Protena EnhC: restringe a degradao de
peptideoglicanos em ligantes de NOD no interior da
cl.;
NOD1 e NOD2 interagem com ATG16L1
Ao recrutar ATG16L1
para a membrana, NOD1 e NOD2 podem
detectar alguma bactria cito-invasiva
no ponto de entrada
Interage com um conjugado de Atg5 e ATG12
Determina o stio de converso de LC3
em LC3 II associada a membrana
Protenas NOD e autofagia
NOD1 e NOD2 podem induzir a formao de autofagossomo
Ligantes de NODs estimulam fibroblastos, cls epiteliais e CDs:
desencadeiam a formao de autofagossomos.


Atividade de RIP2: autofagia mediante a ativao de
ERK, p38 e ULK1
Sinalizao RIP2: desativao
do complexo de protena
fosfatase 2A(PP2A).
Regula negativamente a
autofagia dependente
de NOD;
NODs e ATG16L1 em respostas inflamatrias:
Regula negativamente a resposta de citocina estimulao
NOD ou infeco com bactria cito-invasiva;

Camundongos com ATG16L1 so
resistentes a C. rodentium :papel
hiper imune no intestino
Funo receptor NOD no intestino
Controle da homeostase intestinal;

Funo protetora de NOD2;

Interao com microorganismos.


Google Imagens
Principais funes :

Fortificao da barreira epitelial intestinal;
Proteo;
Respostas imunes tolerantes;
Regulao da microbiota.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/P
MC3799574/figure/fig02/
Sinalizao de NOD e regulao da funo da
barreira intestinal
NOD2: manter a integridade da membrana.

Criptas das clulas epiteliais e clulas Paneth

Produo de fatores antimicrobianos


NOD2
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/P
MC3799574/figure/fig02/
NOD2: regula a expresso e secreo de peptdeos
antimicrobianos;


BISWAS, 2010
Exagerada
resposta Th1
em
camundongos
deficientes em
NOD2
Outras pesquisas, no encontraram diferenas na
expresso de peptdeos antimicrobianos, n e
fentipo de cls Paneth.


Doena de Crohn: insuficiente proteo
antimicrobiana na barreira intestinal e
subsequente disbiose.

Camundongos deficientes em NOD

Defeitos na recuperao da integridade da membrana


Desafio imunolgico


Defeitos na funo da barreira

IL-23
Sinalizao de NOD e a regulao da
homeostase imunolgica no
intestino
Tecido intestinal: estado de inflamao fisiolgica;


Protenas NOD importantes contribuidores
PROBLEMA
Sinalizao de NOD que contribuem para a
homeostase intestinal:

- Regula populaes de clulas T;
- Dirige respostas das clulas Th17;
- Recruta moncitos LY6C
hi





Razo principal para o desenvolvimento da doena de Crohn:
microbiota intestinal;

Disbiose.




Regulao da microbiota por sinalizao de
NOD
Alteraes na microbiota tem susceptibilidade na
doena






microbiota
Ratos deficientes na
sinalizao de NOD
Tcnicas de identificao microbiana

Gene RNA ribossomal 16S
(16S rRNA)
Colite transmitida atravs da microbiota



Transplante fecal
Existncia de microorganismos colitignicos



COUTURIER-MAILARD, 2013
Anlise pacientes com risco e com doena de Crohn e
variaes sem diferenas significantes;

Pesquisas:
- disbiose ocorre antes do aparecimento da doena;
- Espcies de microorganismos so biomarcadores
precoces da susceptibilidade a doena.
Protenas NOD em doenas extra intestinais e
cncer

- Sndrome de Blau;
- Doenas aps transplantes (GVHD);
- Asma;
- Atopia.
Papel de NOD2 na sndrome de Blau e GVHD
Sndrome de Blau


Sndrome de Blau: 3 mutaes misssense em NBD;


Sintomas:
Sndrome de Blau x doena de Crohn


Mutaes nas protenas NOD2 e NLPR3 em
sequncias anlogas prope uma provvel conexo
entre doena de Crohn e sndrome de Blau.
GVHD

- Polimorfismos de NOD2 e ATG16L1 na doena de
Crohn esto associados com doenas aps transplantes
(GVHD);

- no ocorrer se doadores e receptores no forem
parentes;
HLA
PENACK, 2009
Por que mutaes em NOD2 provocam doenas
aps transplantes?
NODs e cncer
Cncer de clon;

Induziram
colite por
DSS
Camundongos deficientes
em NOD2 ou RIP2
Displasia
epitelial
NOD1 colite e plipo adenomatoso do
clon.

NOD2

Associao com o cncer de estmago na infeco por
Helicobacter pylori

Relacionado ao polimorfismo em NOD2
COMPANIONI et al., 2014
Doena de Crohn

Presena de ATG16L1 susceptibilidade a H.
pylori
Resposta
Imunolgica
Inata
manuseia
patgenos
Infeco crnica e
ao cncer
Susceptibilidade ao cncer
Concluses e perspectivas

Relao NOD2 e doena de Crohn
Perguntas intrigantes
Qual o principal tipo de clula/tecido que
dirigem sinais regulatrios mediados por
NOD2
Disfuno autofgica
Referncias Bibliogrficas
BISWAS, A. et al. Induction and rescue of Nod2-dependent TH1-driven granulomatous
inflammation of the ileum. Proc. Natl Acad. Sci. USA 107, 1473914744 (2010).
COMPANIONI, O. et al. Polymorphisms of Helicobacter pylori signaling pathway genes
and gastric cancer risk in the European Prospective Investigation into Cancer-Eurgast
cohort. Int. J. Cancer, v. 134, p. 92101, 2014.
COUTURIER-MAILARD, A. et al. NOD2-mediated dysbiosis predisposes mice to
transmissible colitis and colorectal cancer. The Journal of Clinical Investigation, v. 123,
n.3, p. 700-711, 2013.
MAGALHES, J. G. et al. Nod2-dependent TH2 polarization of antigen-specific immunity.
J. Immunol. 181, 79257935 (2008).
OGURA, Y. et al. A frameshift mutation in NOD2 associated with susceptibility to Crohns
disease. Nature 411, 603606 (2001).
PENACK, O. et al. NOD2 regulates hematopoietic cell function during graft-versus-host
disease. J. Exp. Med., v. 206, n. 10, p. 2101-2110, 2009