UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO.

FACULTAD DE
MEDICINA.


HISTOLOGA 2014-II
MIE 13 AGOSTO 2014

CL1. MTODOS DE ESTUDIO DE CLULAS Y TEJIDOS.MICROSCOPA
Estudio post morten de tejidos, Tcnica Histolgica H.E.
Coloraciones especiales.- Inmunohistoqumica y marcadores.
Tipos de microscopa. Uso adecuado del sistema ptico y de
iluminacin.
Microscopio electrnico, de barrido y de transferencia:
Fundamentos.

DR. ANIBAL EDUARDO MONGE MOYANO

TCNICA HISTOLGICA

BIOPSIA
Aqullas muestras de pacientes
para el DX o investigacin
etiolgica.

TCNICA HISTOLGICA

TCNICA HISTOLGICA
Es el conjunto de procedimientos que
se utilizan para el estudio
microscpico de clulas, tejidos
rganos. Puede ser: IN-VIVO
POST-MORTEM

TCNICA HISTOLGICA

TCNICA HISTOLGICA
1.ESTUDIO IN VIVO SIN COLORANTES VITALES:
Se observa directamente una muestra sin emplear
colorante alguno: Examen directo, Ej. gota de sangre.

2.ESTUDIO IN VIVO CON COLORANTES VITALES.
No destruye la estructura celular, no son txicos: Rojo
neutro, Azul de tripn, Verde jano.

MTODOS HISTOPATOLGICOS


MUESTRAS DE TEJIDOS

INCLUSION CASET

CORTES PARA HISTOPATOLOGIA.- EJEMPLO: APENDICE CECAL
CANASTILLA DE PROCESO

ETAPAS DE PREPARACION TISULAR
DESHIDRATACION: Baos en alcohol
desde 50% - 100%.
ACLARAMIENTO: Xileno.
INCLUSION O INFILTRACION: Parafina
lquida
SECCION: Micrtomo

FIJACION

MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


TACO DE PARAFINA

MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


EXTENDIDO

UNIDAD DE MEDIDA:micra
El conocimiento del mundo microscpico
estuvo vedado al hombre hasta que la
unidad de medida: el micrmetro (m),
llamado tambin micrn o micra ().
MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS HISTOPATOLGICOS


LAMINA DE ESTUDIO
LAMINAS TERMINADAS

LAMINAS COLOREADAS CON H-E LISTAS PARA SU
OBSERVACION MICROSCOPICA
CRIOSTATO/CORTES X CONG.


MTODOS HISTOPATOLGICOS


MICROSCOPA



MICROSCOPA
-El Microscopio es un instrumento ptico, que nos
permite visualizar imgenes difcilmente perceptibles con
nuestros rganos visuales.

-Es as como podemos llegar a reconocer una clula y
los componentes texturales de los diferentes rganos de
nuestra anatoma, con la microscopa de luz.

-Pero si queremos conocer la ultraestructura celular
histolgica de estos mismos rganos, tendramos que
recurrir al Microscopio Electrnico.
MICROSCOPA


MICROSCOPIA DE LUZ
-El microscopio de luz puede ser simple, si est
constituida por un solo lente.

-Compuesto, cuando posee dos o ms lentes;
pueden utilizar luz natural o incorporada (elctrica).

-Existen varios tipos de microscopio de luz, : de
campo claro y campo oscuro; el de contraste de
fase, de fluorescencia, luz polarizada y el
estereoscpico.
MICROSCOPA
MICROSCOPA
Posee 3 sistemas.
Mecnico:Base o estativo - Brazo o columna
- Platina (con pinzas o carro) - Revlver
- Macro y Micromtricos -Cremallera
- Cabezal
Optico:- Revlver
- Macro y Micromtricos -Cremallera
- Cabeza
Luz: Natural. Incorporada(elctrica)
:
-
MICROSCOPIO COMPUESTO
MICROSCOPIO COMPUESTO
MICROSCOPIO MULTICABEZAL
MICROSCOPA


MICROSCOPIA ELECTRONICA.-
-El microscopio electrnico, denominado as
por emplear electrones en su poder de
resolucin para la observacin
ultraestructural celular o histolgica.
-Gracias a este invento, conocemos cmo
son las diferentes organelas
intracitoplasmticas.
MICROSCOPA


MICROSCOPIA ELECTRONICA

Existen dos tipos de Microscopio Electrnico: El
de Transmisin (MET) y el de Barrido (MEB).

-El MET, permite observar la ultraestructura
interna tridimensional de un espcimen. Su
poder de resolucin para especimenes
biolgicos es de 0.5 a 1.0 nm.

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION
El MET, permite observar
la ultraestructura interna
tridimensional de un
espcimen.
Su poder de resolucin
para especimenes
biolgicos es de 0.5 a 1.0
nm.

Microscopio electrnico de barrido

El MEB, permite el estudio
de las superficies de
cualquier espcimen.
Su poder de resolucin es de
10 20 nm. , con un
aumento efectivo hasta de
50,000 dimetros.
ME: barrido
MICROSCOPA
MICROSCOPIA ELECTRONICA.-

MUESTRAS
BIOPSIAS
AUTOPSIAS
EXTENSIONES CITOLGICAS(Papanicolaou)


PROCESAMIENTO DE TEJIDOS

FIJACIN: FORMOL 10%
Evitar:
AUTLISIS: autodig.enzimtica.
PUTREFACCIN: microorganismos.
-FIJACIN TISULAR: Conservar la
arquitectura y composicin tisular lo ms
prxima a la normalidad.

MTODOS HISTOPATOLGICOS


Pasos de la tcnica histolgica

Obtencin del material histolgico(seleccin)
Proceso de fijacin
Lavados
Deshidratacin
Aclaramiento
Infiltracin
Inclusin
Microtoma
Tincin
PROCESAMIENTO-PASOS

FIJACIN: FORMOL 10%
DESCALCIFICACIN(hueso/cido)
DESHIDRATACIN ( alcoholes:70-90-100)
ACLARAMIENTO (xiloles)
IMPREGNACIN ( parafina 58)
INCLUSIN ( parafina)
CORTES
COLORACIN
MONTAJE



COLORACIONES
HEMATOXILINA-EOSINA
XILOLES(DESPARAFINAR):XILOL1,XILOL2,XILOL3 DURANTE 3min
ALCOHOLES (HIDRATACIN):100-70-50
AGUA CORRIENTE
HEMATOXILINA ( NCLEO):2-3 min
AGUA CORRIENTE
EOSINA (CITOPLASMA: 1-2min
LAVADO AGUA CORRIENTE
SECADO ESTUFA
MONTAJE:BLSAMO
MICROSCOPA: DIAGNSTICO

COLORACIONES ESPECIALES
PAS (Membrana basal, hongos, mucosustancias.
TRICRMICA MASSON (tej conjuntivo: azul,tej musc:rojo,fibras elst:amarillo)
PLATA( MB, HONGOS)
GIEMSA (PARSITOS)
GRAM: GRMENES
SUDAN: GRASA ( CORTES POR CONGELACIN- GRASA OBLIGADA)
MTODOS HISTOPATOLGICOS


MTODOS DE COLORACIN
DIAGNSTICA
HEMATOXILINA-EOSINA
HISTOQUMICA:
-PAS( Periodic Acid Schiff )
-TRICRMICA DE MASSON
-RETICULINA-PLATA
-GOMORI
-GROCOTT
-ORCENA: Fibras elsticas
INMUNOHISTOQUMICA: Deteccin de Ag
celulares o tisulares por reaccin Ag-AC.

PAPANICOLAOU
Dr. George Nicols Papanicolaou.
Creador del mtodo de citologa
vaginal para deteccin temprana
de neoplasia de crvix.
PAPANICOLAOU
Mtodo por el cual se obtiene clulas
desprendidas de la regin cervical
para detectar anormalidades en su
revisin microscpica.
La muestra se extiende sobre una
lmina portaobjeto y se fija con alcohol
etlico al 95%.

PAPANICOLAOU
MTODOS HISTOPATOLGICOS


PAPANICOLAOU

PAPANICOLAOU

MUSCULO ESTRIADO

PIEL
RETICULINA:MB TUBULAR
TRICRMICA DE MASSON
BIOPSIA POR CONGELACIN
CRIOSTATO
CRIOSTATO



INMUNOHISTOQUIMICA
INMUNOHISTOQUIMICA
EJEMPLOS DE MARCADORES IHQ
Anticuerpo
Clulas/antgenos
detectados
CD1a clula de Langerhans
CD4 linfocito T de auxilio
CD8 linfocito T citotxico
CD30
clula de Reed-
Sternberg
CD45 leucocitos
CD68 macrfagos
S100 clulas de Schwann
HMB-45 melanocitos
AE1
citoqueratinas de bajo
peso molecular
AE3
citoqueratinas de alto
peso molecular
DESMINA clulas musculares
GFAP gla
CEA
antgeno carcino-
embrionario
AFP alfa-fetoprotena
REN
receptores nucleares
de estrgenos
VIM sarcomas
IH-LINFOMAS
Macrfagos-Linfoma folicular
con clulas plasmocitoides
INMUNOHISTOQUIMCA



YO SOY ..



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