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QUMICA

BIOINORGNICA
Vagner Machado de Assis

Prof Christiane Fernandes
CELLULAR REGULATION OF
RIBONUCLEOTIDE REDUCTASE IN
EUKARYOTES
Autores: Estrella Guarino, Israel
Salguero, Stephen E. Kearsey

Fator de impacto: 5,971
Junho de 2014
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Ribonucleotdeo Redutase
Ribonucleotdeos Redutases (RNR) so
enzimas-chave em todos os organismos
essenciais para a sntese via de
desoxirribonucleotdeo-trifosfatos (dNTPs),
necessrias para a replicao e reparo do
DNA.
Eles so de particular interesse, como a sua
atividade pode determinar em grande parte as
concentraes e propores de dNTPs e estes
fatores so crticos para assegurar a alta
fidelidade da sntese de DNA.
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Figura 1. Estrutura quaternria e Stio ativo de ferro de RNR.
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Figura 2. Mecanismo de ao do RNR.
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Figura 3. Estrutura dos Desoxirribonucleotdeos Fosfatados.
Os desequilbrios nos nveis de dNTP
reduzem a fidelidade da etapa inicial de
polimerizao, e mesmo defeitos sutis
podem ser altamente mutagnico.

A falta de regulao de nveis dNTP durante
a proliferao celular foi mostrado para
promover a transformao induzida pelo
gene cancergeno, enfatizando a
importncia da regulao de RNR para a
estabilidade do genoma.
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O papel fundamental que tem RNR na
proliferao celular explorado na
quimioterapia de vrios tipos de cncer, o
uso de inibidores tais como hidroxiureia,
Clofarabina e gencitabina.

A reserva de dNTP celular suficiente para
a replicao de apenas uma frao do
genoma, de modo que a regulao positiva
da atividade RNR necessrio para que as
clulas entrem na fase S.
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Figura 4. Ciclo Celular
Classificao de RNR
RNRs so classificados em trs classes
principais, dependendo do mecanismo de
gerao de radicais livres, o que essencial
para a catlise:

RNRs classe I so enzimas aerbicas
compostos por duas subunidades, e so
ainda subdivididas em funo do metal
cofator utilizado.
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Os eucariotas utilizam predominantemente
RNRs 1 classe, que tm centros de Fe (III).

RNRs de classe II tm funo
independentemente de oxignio e tem
subunidade nica para a gerao de radical.

Enzimas da classe III esto ativas apenas
sob condies anaerbias, e usam um
radical estvel de glicina para a catlise, que
gerado com o auxlio de uma segunda
protena.
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Figura 5. As estruturas quaternrias das trs classes de RNR.
Regulao do RNR
Leveduras empregam um modo distinto de
regulao do RNR envolvendo pequenas
protenas intrinsecamente desordenadas que
ou se ligam ao RNR e inibem a enzima ou
alteram a localizao celular das subunidades
RNR.
S. cerevisia possui trs genes
relacionados, SML1 , DIF1 e HUG1 , os quais
tm sido implicados em diferentes aspectos da
regulamentao RNR e S. pombe tem dois
genes spd1
+
e spd2
+

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RNR e sntese de DNA
RNR crucial para a manuteno do DNA de
organelas. Embora as vias de salvamento no
interior das mitocndrias fornecem uma fonte
de precursores de mtDNA de replicao,
evidente que RNR tambm importante.

Isto realado de forma dramtica pela
descoberta de que algumas sndromes de
depleo de mtDNA humanos so causadas
por mutaes.
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Deste modo, o baixo nvel de atividade de
RNR proporciona um fornecimento de
nucleotdeos essenciais para a sntese de
mtDNA reduzidas.

O mais provvel que nucleotdeos
reduzidos gerados por RNR so importados
para a matriz da mitocndria como dNTPs,
mas importao de dTMP e possivelmente
outros tipos de nucleotdeos reduzidos
podem ocorrer.
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Figura 6. Estrutura monofosfato de timidina (dTMP).
As mutaes que afetam ao RNR das
plantas causam defeitos na manuteno do
cloroplasto e levam a folha desbotar.

A inibio parcial da RNR levam as folhas
clorticas crescerem sem retardamento, o
que sugere que a replicao do cloroplasto
especialmente sensvel aos defeitos de
fornecimento de dNTP.
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Localizao do RNR
Um estudo realizado em clulas de
mamferos tambm conclui que ambas as
subunidades so constitutivamente
citoplasmtica, tanto durante o ciclo celular
e depois de danos no DNA.


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Localizao dos RNR em clulas de
mamferos pode ser especialmente
importante uma vez que os nveis de dNTP
caem fora da fase S e no so
significativamente aumentados por danos
no DNA.
O conceito de localizar RNR em locais
onde dNTPs so consumidos para
melhorar a eficincia da replicao
remonta h muitos anos.
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Novos Modelos de Regulao
Um relatrio recente mostra que a
deficincia de ferro tambm regula R2 na
localizao celular em S.cerevisiae.
O ferro essencial para a funo de RNR,
pois proporciona um metal cofator na
subunidade R2.
Privao de ferro resulta no movimento de
R2 do ncleo para o citosol para ativar
RNR.
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Figura 7. As Subunidades do RNR.
Ferro deficincia resulta na expresso de
Cth1 e Cth2.

Cth1 e Cth2 tambm interagem com Rnr2 e
transcries Rnr4 de codificao em
resposta deficincia de ferro, e
promovendo a sua degradao pode
permitir que as clulas lidem com os baixos
nveis de ferro.
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Desregulao
claro que a concentrao de dNTP um
fator fundamental para garantir a replicao
exata de DNA, as clulas mantm uma
baixa regulao de RNR fora da fase S, a
fim de diminuir os nveis dNTP.

Altos nveis de dNTP fora da fase S poderia
ter outras consequncias deletrias.
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Grupos de nucleotdeos mitocondriais podem
ser distorcidos pelo aumento transitrio da
concentrao dNTP durante a fase S, e
possvel que a fidelidade da replicao
mtDNA seria prejudicada por nveis elevados
de dNTP.

Tambm tem sido sugerido que os nveis de
dNTP baixos contribuem para a replicao do
DNA fora da fase S, de modo a limitar a
ocorrncia de replicao a partir de uma
iniciao de marcao. Altos nveis de dNTP
tambm perturbar a progresso do ciclo
celular.

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Em S. cerevisiae , os nveis elevados de
dNTP resultantes de uma mutao RNR que
desregula a enzima para a inibio do
feedback, inibem a progresso do ciclo
celular, atrasando a iniciao da replicao
de DNA.

De modo semelhante, em clulas de
mamferos, a elevao dos nveis de dNTP
por regulao negativa SAMHD1 inibe a
entrada na fase S atravs de um
mecanismo desconhecido.
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Concluso
A interao entre a atividade da RNR, os
nveis de dNTP e progresso do ciclo celular
requer maior clarificao. Altos nveis de
dNTP atrasam a progresso do ciclo celular
em ambas as leveduras e clulas de
mamferos, mas no est claro como estas
altas concentraes de dNTPs so sentidas
e como isso traduzidas para atrasar a
entrada na fase S.
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