CULTIVO DE BACTERIAS, POBLACIN DE BACTERIAS CONTEO,

CONTRASTE DE FASES AL MICROSCOPIO

CURSO: BIOMETALURGIA
DOCENTE: ING. CASTILLO MONTALVAN, Jos
ESTUDIANTES:
ALDERETE OSCANOA, Erick
FLORES CRUZ, Christian
LANDA QUILCA, Lean
SALAS ESPINOZA, Milca
GARCIA GARCIA, Luis
SEMESTRE: VIII

INTRODUCCIN
Uno de los sistemas ms importantes para la
identificacin de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales
preparadas en el laboratorio.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en
un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presin de oxgeno adecuado, as como
un grado correcto de acidez o alcalinidad.

1. CULTIVO DE BACTERIAS

Ferrooxidans es la bacteria ms
ampliamente estudiada en procesos
de biolixiviacin.

THIOBACILLUS

LEPTOSPIRILLUM

ACIDOPHILIUM

Obtienen
su
fuente
energtica a partir de la
oxidacin de sulfuros
reducidos
y
sales
ferrosas.
En
medio
con
temperatura moderada
su acidez en el rango de
0.5 a 4 pH.

Se
desarrollan
oxidando
al
hierro
ferroso en compuestos
frricos como la pirita.

Estas bacterias pueden

vivir
a
condiciones
anaerbicas.

Obteniendo crecimiento
ptimo a pH entre 1.5 a
2.5.

Son
consideradas
como
aerobias
estrictas.

Se desarrollan en el
rango 1.5 a 4.0 pH.

Obtienen energa de la
oxidacin del azufre
hierro
y
sulfuros
metlicos.
Son caracterizadas por
su evolucin favorable
a temperaturas entre
28 y 35 C

CARACTERIZACIN
MORFOLGICA

La evaluacin morfolgica de un consorcio de bacterias aisladas

para su clasificacin
est basada en observaciones microscpicas para determinar su
forma, emparejamiento.

TINCIN

La tincin nos sirve para la identificacin la las bacterias.

los microorganismos pueden ser observados fcilmente por medio de
microscopa.

TINCIN GRAM

Basadas en la combinacin qumica entre el colorante y las protenas

de las bacterias.
En soluciones cidas, reaccionan con los cidos.

 Se ha desarrollado una gran

variedad y tipos de medios de
cultivo especficos dependiendo
de las necesidades de cada
bacteria para proveer el ambiente
bioqumico adecuado. Los medios
de cultivo son empleados para el
aislamiento, mantenimiento de
cultivos puros e identificacin de
bacterias, de acuerdo a sus
propiedades
bioqumicas
y
fisiolgicas.

MEDIOS DE CULTIVO
MEDIO DE CULTIVO 9K
El
medio
9K,
contiene
originalmente hierro ferroso
como fuente de energa
para los microorganismos.

CONDICIONES GENERALES PARA EL

CULTIVO DE MICROORGANISMOS
Disponibilidad de nutrientes adecuados
Consistencia adecuada del medio

Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases

Condiciones adecuadas de humedad
Luz ambiental
pH
Temperatura
Esterilidad del medio

2. POBLACIN DE
BACTERIAS CONTEO

El crecimiento bacteriano es la divisin de

una bacteria en dos clulas hijas en un
proceso llamado fisin binaria.
De este modo tiene lugar la "duplicacin
local" de la poblacin bacteriana.

La medicin de una curva del crecimiento

exponencial de las bacterias en un cultivo
ha sido tradicionalmente una parte de la
formacin de todos los microbilogos.

DETERMINACIN DEL CRECIMIENTO DE

POBLACIONES BACTERIANAS
El crecimiento de una poblacin o cultivo
bacterianos se puede expresar en funcin de:
aumento de masa del cultivo
aumento del nmero de clulas

Ambos tipos de expresiones son equivalentes entre s

en cultivos que estn en crecimiento balanceado

MEDIDA DE MASA BACTERIANA

MTODOS DIRECTOS: En estos mtodos se requieren preparaciones limpias, sin
partculas extraas.
DETERMINACIN DEL
PESO HMEDO

DETERMINACIN DEL
PESO SECO

Se tara un tubo de centrfuga.

Se centrifuga el cultivo y se elimina el
sobrenadante.
Se determina el peso del sedimento.

El sedimento se seca antes de ser

pesado (105oC, toda la noche),
hasta peso constante.

MTODOS INDIRECTOS
Medida de consumo de nutrientes o
de produccin de algn metabolito
por unidad de tiempo.
Mtodos turbidimtricos (pticos). La
base comn de estos mtodos
consiste en la medicin de la
cantidad de luz dispersada o
transmitida a travs de un cultivo
bacteriano.
La dispersin de la luz es, dentro de
ciertos lmites, proporcional a la masa
del cultivo.

CRECIMIENTO BALANCEADO (=EQUILIBRADO)

Durante este crecimiento, de tipo exponencial o logartmico, el cultivo se
comporta como una reaccin auto cataltico.
Tambin se puede decir que el no de clulas, la masa celular u otros
componentes se duplican en un mismo lapso de tiempo determinado.
Este tipo de crecimiento se denomina balanceado o equilibrado. Se
caracteriza, pues, por ser el crecimiento en el que:
Todos los constituyentes celulares se duplican en un mismo tiempo
Aquel en el que estos constituyentes aumentan proporcionalmente por un mismo
factor en la unidad de tiempo.

CULTIVO CONTINUO
Es un cultivo balanceado mantenido
por tiempo indefinido por un sistema
de flujo que se compone de:
Una cmara de
volumen constante.

cultivo

de

A la que llega un suministro de

nutrientes.
Y de la que se eliminan o
separan los productos txicos
de
desecho
(por
un
dispositivo de rebosadero).

Los parmetros a tener en

cuenta son:
Flujo (f), medido en ml/h.
Volumen de la cmara de
cultivo
(v, en ml).
Densidad celular en la
cmara (x)
Factor de dilucin D = f/v
(en h--1).
El inverso de este
factor de dilucin es el tiempo
medio de residencia (1/D= TMR).

CULTIVOS EN SISTEMAS
CERRADOS
En los sistemas cerrados
(que pueden ser lquidos o
slidos), no existe aporte
continuo de nutrientes, ni
drenaje de clulas ni de
sustancias de desecho.
En
estos
sistemas
la
fase
exponencial
de
crecimiento
balanceado no restringido dura
slo unas cuantas generaciones,
debido
al
agotamiento
de
nutrientes y/o a la acumulacin
de desechos.

CRECIMIENTO
DIAUXICO
La bacteria usa en primer
lugar
slo
la
fuente
preferencial de C (en este
caso, la glucosa, que
suele
ser
la
fuente
preferencial en muchos
heterotrofos), sin "tocar" la
otra fuente.

CONTEO BACTERIANO

El conteo
bacteriano seala la
magnitud de la poblacin
total bacteriana.

TIPOS DE CONTEO
CONTEO EN CAJAS PETRI: Mtodo ms usado para contar
bacterias. Un caldo de cultivo con microorganismos es
diluido y posteriormente muestras del mismo son distribuidas
en la caja de petri contenedora de agar.

CONTEO POR FILTRACIN: Es realizado cuando la cantidad

de bacterias es muy pequea, como en casos de lagos y
arroyos relativamente puros.

El contraste de fases es el
mtodo de microscopa ideal
para
examinar
preparados
delgados y no teidos, tales
como cultivos de clulas. El ojo
humano no est en condiciones
de percibir las diferencias de
fases

Las variaciones en grosor e ndices de

refraccin son capaces de producir una
diferencia en el curso ptico de la luz
transmitida por las dos regiones

3. CONTRASTE DE FASES AL
MICROSCOPIO
El mtodo del contraste de
fases utiliza los moduladores
pticos "diafragma anular de
fases y anillo de fases", as
como los procedimientos de
interferencia en la formacin
de la imagen intermedia,
para convertir las tenues
diferencias de fases en
diferencias de intensidad y
color visibles por los ojos.

 MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE
FASE

DISEO DEL INSTRUMENTO

OPTIMO

El principio es semejante al de campo

oscuro; se ilumina la muestra con un
cono hueco de luz pero mucho ms
estrecho. Se emplea un filtro en forma
de anillo que disminuye la intensidad
de la luz y al mismo tiempo provoca un
retraso o desfase en la longitud de
onda de la luz.

El sistema ptico del microscopio de

contraste
de
fases
difiere
del
microscopio
ordinario
(de
luz)
solamente en la adicin de un
diafragma anular colocado debajo
de la platina para iluminar el objeto
con un cono de luz estrecho y una
placa de difraccin montada en el
objetivo, muestra el diseo de un
microscopio de contraste de fase.

CONCLUSIONES
Los medios de cultivo, para poder ser utilizados y garantizar que los resultados
obtenidos a partir de ellos sean confiables, deben cumplir con los siguientes
requisitos:
Disponibilidad de nutrientes.
Consistencia adecuada del medio.
Presencia o ausencia de oxgeno y otros gases.
Condiciones adecuadas de humedad (mantener en frigorfico).
Luz ambiental.
pH adecuado.
Temperatura.
Esterilidad.

GRACIAS