UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO

VALDIZAN
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
E. A. P. DE AGRONOMIA

TEMA :
CURSO :

DOCENTE:
ALUMNO:

TRANSFORMACIONES GENETICAS
USANDO AGROBACTERIUM
BIOTECNOLOGIA E HIDROPONIA

Ing. MILKA TELLO VILLAVICENCIO

COTRINA RIVERA GIANFRANCO

Mtodos de transformacin de
plantas

Diferentes sistemas de transformacin de plantas han

sido desarrollados con el objeto de hacer ms fcil y
eficiente esta metodologa. Estos mtodos se dividen
en:
a) Transformacin mediada por Agrobacterium
tumefaciens: un vector biolgico que participa de la
transferencia;
b) Mtodos de transformacin gentica directos:
por distintos mecanismos fsicos se introduce el ADN
en la clula

Agrobacterium tumefaciens: un
ingeniero gentico por naturaleza

El mtodo ms difundido para la transformacin

gentica de plantas se basa en un proceso mediado
por Agrobacterium tumefaciens, una bacteria que vive
en el suelo e infecta a un amplio rango de plantas.
Esta bacteria tiene como blanco de infeccin a las
heridas en el tallo o races de la planta
inmediatamente sobre el nivel del suelo, donde ataca
a las clulas, causando su proliferacin y formacin
de tumores. Esta enfermedad se conoce como "agalla
de la corona".

Biologa de Agrobacterium
tumefaciens

Durante el contacto con las clulas vegetales la

bacteria transfiere a las clulas vegetales un plsmido
llamado Ti (inductor de tumores). Este plsmido se
integra en el ADN del cromosoma de la clula
vegetal. Este plsmido transferido o T-ADN
contiene los genes oncognicos (onc) cuya expresin
provoca una mayor produccin de hormonas de
crecimiento, stas son las que inducen las divisiones
celulares que dan origen a la formacin del tumor o
agalla.

Manipulacin gentica de las

plantas: cmo se hace

En las tcnicas de transformacin es necesario disponer del

gen de inters dentro de un vector (vehculo) apropiado
para ser transferido al tejido que se quiere transformar.
Este vector es generalmente un plsmido (porcin de ADN
circular relativamente pequeo que puede mantenerse en
el citoplasma de una bacteria u otro tipo celular) al que se
le inserta el gen de inters .Otro punto esencial es el
establecimiento de un sistema que permita identificar las
clulas o tejidos transformados. Para esto, en el segmento
de ADN que se va a transferir se agrega junto al gen de
inters un gen auxiliar llamado gen de seleccin.

El gen que va a ser transferido o transgn est

compuesto por una secuencia codificante (el gen
de inters) y por secuencias regulatorias. Las
secuencias regulatorias son los promotores (P) que
determinan el momento, lugar y nivel de expresin
de cada gen y los terminadores (T), que indican la
terminacin de la transcripcin (proceso que
interviene en la expresin del gen).
Tambin se utilizan virus mutilados (en los que se
ha eliminado la informacin gentica
potencialmente daina), que tienen una gran
capacidad invasora y pueden incorporar su propia
informacin gentica al ADN de la planta.

Los bordes derecho e izquierdo son necesarios

para dirigir el procesamiento del ADN-T.
Cualquier fragmento de ADN ubicado entre estos
bordes puede ser transferido a la clula vegetal

Dentro del plsmido Ti existe una zona donde se

encuentran los genes vir que son responsables del
procesamiento, corte y transferencia del ADN-T.
La transferencia de ADN es inducida por la expresin
de unos genes llamados vir que se encuentran en el
plsmido Ti por fuera de la secuencia que se
transfiere. Dentro del ADN-T se encuentran genes
bacterianos que intervienen en la sntesis de
fitohormonas (hormonas vegetales) que causan la
proliferacin celular. Tambin genes que participan
de la sntesis de una serie de compuestos
denominados opinas, los que son secretados y
utilizados como nutrientes por Agrobacterium

Transformacin vegetal mediada

por Agrobacterium tumefaciens

La transformacin de la planta se induce a partir del

contacto entre la bacteria que porta el gen de inters
en su plsmido y las clulas vegetales (por ej. hojas,
cotiledones, etc.). El ADN-T es transportado desde la
clula bacteriana a la clula vegetal donde se integra a
su material gentico. Luego de la transformacin, el
tejido vegetal es cultivado in vitro en un medio con
un agente selector (antibiticos o herbicidas) donde
slo las clulas transgnicas sobreviven.

Las clulas vegetales son totipotentes, quiere decir

que una clula de cualquier parte de la planta
puede multiplicarse y generar la planta completa.
Para eso las clulas deben crecer en el medio de
cultivo adecuado y en presencia de determinadas
hormonas vegetales. El resultado de esta etapa es
una planta completa que lleva el gen de inters en
cada una de sus clulas.
Una vez obtenida una planta transgnica, para
que su cultivo y comercializacin sean factibles,
deber presentarse una solicitud ante los
organismos reguladores correspondientes que son
quines determinarn la realizacin de los ensayos
necesarios para el estudio de la bioseguridad
ambiental y alimentaria y los efectos de
su comercializacin y, en ltima instancia, darn o
no la aprobacin del cultivo transgnico