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Resumen.
Los hongos asociados a las races de las plantas estn ganando
protagonismo en cuanto a su importancia para la supervivencia
de las plantas en una diversidad de los ecosistemas terrestres. La
evaluacin de la importancia de los tipos de interaccin
depende en parte de la cuantificacin de la interaccin
prevalente, sobre todo en las plantas cosechadas de los
ecosistemas naturales. A su vez, esto depende de un mtodo
sensible para la visualizacin de hongos, y un mtodo fiable
para
cuantificar
potencialmente
mltiples
morfotipos
ectomicorrcicos. Se discuten los desarrollos recientes en estas
reas.
Introduccin
Materiales
Eleccin del marcador
Merryweather y fitter (1991) utilizan lacto fucsina para imgenes
fluorescentes, pero este mtodo no haba sido reportado por los
autores u otros. Se consideraron independientemente fucsina lacto
como un marcador fluorescente de clulas de hongos dentro de
races de las plantas, en particular mediante microscopa confocal
de epifluorescencia.
las races claras suelen teirse
con chlorazole black E (CBE)
(Brundrett et al., 1996), azul de
tripano (Phillips y Hayman,
1970),
o
lactofuchsin
(Carmichael,
1955).
Estos
ltimos a veces tienen un
contraste insuficiente para
alta magnificacin de luz
microscopa transmitida.
Posteriormente las
muestras se cubren
con papel aluminio
Imagen
Mtodo de cuantificacin
mltiple
Con la tcnica de MQM, cada tipo de morfologa de hongos
se marca por separado, y las nuevas categoras se pueden
agregar si es necesario. En las muestras que contienen
mltiples tipos de hongo endfito. puede facilitarse teniendo
en cuenta la morfologa de las hifas a cada lado de la
interseccin (ya que son propensos a ser continuo), pero los
datos de cuantificacin slo debe ser recogidos en la
interseccin. Adems de marcar interacciones de hongos, la
ausencia de interaccin tambin es importante.. De lo
contrario, como en Allen et al. (2006), la abundancia de suma
podra ser engaosa.
En Ormsby et al. (2007) nos enfrentamos con el reto que
algunas intersecciones tenan slo 01 MA hifa, mientras que
en otros eran muy abundantes. Definimos categoras
adicionales (en este caso de baja, media y alta abundancia
de hifas) para describir esta variacin (Cuadro 1, Ryan et al.
(2003) han demostrado que la MA hifas intercelulares tambin
puede participar en la transferencia de nutrientes minerales.
Discusin
Hasta la fecha, para las muestras recolectadas de sitios de
campo, la tincin con lactofuchsin visto con epifluorescencia
ofrece una combinacin conveniente de relativa sencillez de la
preparacin y la calidad de imagen.
La eleccin de imgenes de fluorescencia confocal vs widefield
depende de la necesidad, y, naturalmente, de la disponibilidad
de los equipos.
La ptica de epifluorescencia Confocal son a menudo superiores
para la documentacin, mientras que la ptica de campo amplio
es ms eficiente para la cuantificacin.
Hemos encontrado que la cuantificacin endomicorricica
utilizando el mtodo de MQM es reproducible, as como flexible.
MQM es muy adecuado para races de las plantas cosechadas a
partir de lugares naturales donde los hongos endomicorricicos no
estn necesariamente bien descritos. Por otra parte, MQM puede
cuantificar la contribucin relativa de las diferentes interacciones
endomicorricicas, que intrnsecamente debe estar relacionado
con su importancia para la fisiologa de la planta.