Espectrofotometria Uv Visible:

Aplicaciones en Qumica Analtica

Curso: Quimica Analtica II

2011
Profesor: Juan Carlos Sturm

Fotmetro o espectrofotmetro ?

emisor LED
525nm

Fotodiodo
detector

Microprocesador

Display
LCD

Muestra

No faltan componentes en este instrumento?

Fuentes de radiacion electromagnetica para

espectroscopia
Fuente

region

usos

Lamp. H2 D2
continua, 160-380 nm
absorcin molecular UV
L. Tungsteno,
continua 320 -2400 nm
absorcin molecular visible
L. Arco de Xe
continua 200 1000 nm
e. molecular fluorescente
Alambre de nicron continua 0,75 20 m
e. absorcin IR
L. Ctodo hueco
lneas Uv-Vis.
E Absorcin atmica
Laser
lnea , UV-Vis
Abs atmica , molecular, fluoresc.
L. vapor de Hg
lneas
fluorescencia molecular
diodo
lnea -vis
Abs. Molec vis.

Fuente
continua

Fuente
de
lineas

Transductores para espectroscopia optica

Detector
fototubo
Fotomultiplicador
Fotodiodo de Si
Fotoconductor
celda fotovoltaica
termocupla
Termistor

clase
foton
foton
foton
foton
foton
termico
termico

rango
200-1000 nm
110 1000nm
250 1100 nm
750 6000 nm
400- 5000 nm
0.8- 40 m
0.8- 40 m

seal
corriente
corriente
corriente
carga- resistencia
voltaje o corriente
voltaje
variacion resistencia

Monocromador
Filtros pticos
Prismas
Rejillas de difraccin

Ancho de
banda :

Caractersticas de la espectroscopia
molecular

Aplicacin en sistemas orgnicos e inorgnicos

Lmites de deteccin bajos ( 10-4 a 10-5 M)
Selectividad moderada a alta
Buena exactitud ( incertidumbres relativas < 2% )
Medicin y adquisicin de datos simple

Aplicaciones
Determinacin

de iones metlicos y complejos de

elementos de transicin ( Ni+2, Cu+2, Co+2, Cr2O7 -2 )

Complejos de transferencia de carga

ej: Fe(II 1,10 Fenantrolina , Fe(III) tiocianato
Compuestos orgnicos con enlaces conjugados,
heterociclos
Campos: industrial, clnico, forense, medio
ambiente

Espectros de absorcin molecular

Espectro de absorcin de cido acetil saliclico en HCl 0,05 M
2,5

a)

a) AAS = 25 mg/l
b) AAS = 12,5 mg/l

Absorbacia

2,0

1,5

1,0

b)

0,5

0,0
200

220

240

260

280

300

320

340

360

( nm )

La concentracin de la solucin no modifica la forma del espectro

Anlisis Cuantitativo, procedimiento:

Seleccin de la longitud de onda de medicin:
( si se desea la mas alta sensibilidad se elige una longitud de
onda correspondiente a un pico mximo)

Verificar cumplimiento de la ley de Beer

A=abC
-log T = a b C

existen variables que influyen en la absorbancia como: tipo

de disolvente, pH de la solucin , temperatura , sustancias
interferentes

Seleccin del rango de concentraciones para la medicin con

menor error

Ley de Beer - ideal : A = abC ,

Seal = constante * conc. de analito
Ambas ecuaciones
representan rectas
A vs C

Ley de Beer - real : A = abC + n

n= intercepto seal de fondo (blanco)
1,2

1,0

1,0

Absorbancia

1,2

Absorbancia

0,8

0,6

0,4

0,8
0,6
0,4

0,2

0,2

0,0

0,0
0

Concentracin

10

Pendiente = sensibilidad

rango lineal

intercepto
0

Concentracion

10

Otras tcnicas espectroscpicas sin intercambio de

energa

Nefelometra
Turbidimetra
Refractometra
Difraccion
Dispersin

scattering
refraccin
difraccin de rayos x
dispersin ptica rotatoria

Ver tambien : Modern Analytical Chemistry

D. Harvey , Mc Graw Hill , cap 10

Mtodos de cuantificacin
Curva de calibracin con estndares externos
Mtodo de adicin estndar:
- a volumen final constante
- a volumen variable

Curva de calibracin con estndares externos

Los estndares de calibracin deben aproximarse en lo
posible a la composicin general de las muestras

muestra

blanco

A0

A1

A2

A3

A4

A5

A6

Ax

Curva de calibracin
0,6

Absorbancia

0,010

0,100

0,200

0,300

0,405

10

0,500

12

0,590

muestra

0,340

0,5

Absorbancia (A)

Concentracion
mg/L

0,4

0,3

A = 0,0066 +0,0490*C

0,2

r = 0,9997
0,1

0,0
0

Cx = 6,80 mg/L

Concentracin ( mg/L)

10

12

Mtodo de adicin de estndar:

a volumen final constante y varias adiciones
Las dificultades de contar con un patron con una composicin general que se
asemeje a la de las muestras hace recomendable este mtodo. Requisito: se
cumple la ley de Beer

blanco
Ajuste 0

Vx

A TOTAL =

Ax

Vx

Vx

Vst1

Vst2

Vx
Vst3

Vst4

Ast

Cx Vx a b Cst Vst
AT a b

VT
VT

Vx

Graficar A vs Vst :
recta con pendiente e
intercepto

 Entonces:
Dividiendo

Despejando

A T = + Vst

Cx Vx
Vt
a b

Vt
a b Cst

Cst
Cx
Vx

Mtodo de adicin de estndar:

a volumen final variable y una adicin

Vx

Vx + Vst
A2

A1

A1 abCx

VxCx VstCst
A2 ab

Vx Vst

A1
abCx(Vx Vst )

A2 ab(VxCx VstCst )

A1 CxVx CxVst

A2 VxCx VstCst

A2CxVx A2CxVst A1VxCx A1VstCst

A2CxVx A2CxVst A1VxCx A1VstCst

factorizando

Cx( A2 A1 )Vx A2Vst A1VstCst

A1VstCst
Cx
( A2 A1 )Vx A2Vst

Ejercicio 1
Se desea determinar el manganeso en un acero. Se disolvi una muestra de acero
de 0,4895 g , el manganeso se oxid a MnO4- y la solucin se diluy a 100 ml en
un matraz aforado. La absorbancia a 525 nm en una celda de 1 cm fue 0,396 .
Una solucin de MnO4- de 3x 10-4 M presenta una absorbancia de 0,672

Ast = a b Cst
Ax = a b Cx
4M

0,672= a1 3x10-4
0,396 = 22401Cx

a = 2240
Cx = 1,77 x 10-

Otra forma de clculo:

Ast abCst

Ax abCx

0,672 3 10 4

0,396
Cx

Clculo del porcentaje de Mn en acero :

ver en versin internet
Ejercicio 2: Ver en versin internet
Curva de calibracion con patrones independientes
Interpolacion de una muestra tratada de la misma
forma que los patrones
Ejercicio 3 : Ver en versin internet
Clculo de concentracin mediante adicin estndar y
volumen constante

Ejercicio 4: Ver en version internet

Adicin de estndar con un punto e incremento de volumen

Calcular el porcentaje de Mn en el acero

En el matraz de 100 ml encontramos una concentracin 1,77 10
M de MnO4- .

-4

Calculemos los mg de Mn en 100ml

El PA Mn = 54,94;

1,7710-4 54,94 = 9,7 10-3 g/L Mn

9,7 mg/1000mL Mn

0,97 mg /100 ml Mn
Calculemos los mg de Mn por 100 g de muestra ( porcentaje)
En los 100ml se disolvieron 0,4895 g de acero y hay 0,97 mg
de Mn. Cuantos mg de Mn hay en 100g de acero ?)

0,97 mgMn
X

0,4895
100

X = 198,2 mg Mn / 100g muestra

% = 0,2 g Mn /100g muestra

X = 0,2 %

Cst = 1000 mg/L

0,7

Vx = 25 ml

0,6

1533

Cst
Cx
Vx

0,5

Absorbancia

02063

A = 0,2063 + 1,533 Vst

----------------A
0,2063
B
1,533
-----------------

0,4

0,3

R
--------------0,99982
---------------

0,2

0,00

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25

0,30

ml de estandar agregado

0.2063*1000 206.3
Cx

5.30
1.533* 25
38.32
Concentracin de la muestra = 5,30 mg/L; Ojo : no hay factor de dilucin
ya que tanto muestra como Patrones se sometieron a la misma dilucin.

Ejercicio 4
Una solucin cida de in cprico tiene una absorbancia de 0,062 a la
longitud de onda de mxima absorcin.
A 5,0 ml de esta solucin se le agreg 1,0 ml de solucin 0,01 M de in
cprico y se determin que la absorbancia fue de 0,102 a la misma
longitud de onda : Cual es la concentracin de la muestra ?
R: La muestra con un volumen de 5 ml fue enriquecida con patrn aumentando
el volumen a 6 ml ( adicin std. con un punto y con incremento de volumen)

A1 abCx
CxVx CstVst
A2 ab
Vx Vst
A1
Cx (Vx Vst )

A2 CxVx CstVst

0,062
Cx6

0,102 Cx5 0,011

0,612Cx 0,31Cx 0,00062
Cx 2,1x103 M
Tarea : verifique el
resultado usando la
formula deducida
anteriormente

Limitaciones de la ley de Beer

Solo es aplicable a soluciones diludas (<10-2M)
(Interacciones entre iones o molculas afectan la absorcin de
radiacin, variacin del ndice de refraccin)

Desviaciones qumicas debido a la asociacin o

disociacin del analito ( se forman productos con caractersticas
absorbentes distintas al analito. Ej : indicadores acido base)( desv.
positiva o negativa )

Desviaciones por radiacin policromtica y radiacin

parsita ( limitacines instrumentales ) (desviacion negativa )
Fluorescencia y Turbidez ( disminucin de absorbancia por
radiacin emitida o aumento de absorbancia por partculas en
suspensin )

Desviaciones qumicas
Cuando un analito se disocia , se asocia o reacciona con el disolvente
para dar un producto con espectro de absorcin diferente al del
analito se producen desviaciones de la ley de Beer.

HIn H In
Color 1

Ka = 1,34 x 10-5

Color 2

La siguiente tabla * muestra el desplazamiento del equilibrio motivado

por la dilucin ( solucion no tamponada)

HIn, M
2,00 x 10-5
4,00 x 10-5
8,00 x 10-5
12,00 x 10-5
16,00 x 10-5

[HIn]

[In-]

X 105

X 105

disociado

0.88
2.22
5.27
8.52
11.9

1.12
1.78
2.73
3.48
4.11

56 %
44.5%
43.1%
29 %
25.7 %

A 430
0.236
0.381
0.596
0.771
0.922

* Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 407-408

A570
0.073
0.175
0.401
0.640
0.887

Desviaciones quimicas

A medida que la concentracin

aumenta la disociacin es
menor dando una curvatura
positiva a 570 nm

Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 407-408

Desviaciones instrumentales por radiacin policromtica

En el espectro (grafico superior) la

absortividad del analito es casi
constante en la banda A.
En la grafica de la ley de Beer, al
usar la banda A hay una relacin
lineal.
En el espectro la banda B muestra
cambios notables de la absortividad
resultando en una marcada
desviacin de la ley de Beer

Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 409

Cuando la medicin de
absorbancia se efecta con
radiacin compuesta por
diversas longitudes de onda , la
absorbancia es una combinacin
dada por las absortividades
diferentes a cada longitud de
onda .

* Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 410

Desviacin aparente de la ley de Beer por diversas

cantidades de radiacin parsita ( o difusa)
Radiacin parsita o difusa:
Cualquier radiacin que llega
al detector pero que no
sigue la va ptica entre la
fuente y el detector

La radiacin parsita limita la

absorbancia mxima de
respuesta lineal ya que cuando
la absorbancia es alta la
potencia radiante que llega al
detector se vuelve pequea,
similar o menor al nivel de luz
parsita.

Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 411

Esquemas de bloque de un instrumento monohaz y doble haz

Espectrofotmetro de arreglo de diodos

Error Instrumental en funcin de la transmitancia

Conclusin: se eligir
preferentemente un rango de
concentraciones de trabajo tal
que la transmitancia se
mantenga en el rango 20%T
70%T (0,7A -0,15A)

Error instrumental
instrumentalen
enfuncin
funcinde
de lalatransmitancia
transmitancia
Error
Se ha visto que la incertidumbre en la medida
espectrofotomtrica de la concentracin vara en forma
no lineal con la magnitud de la transmitancia

x xt
error relativo
x 100 %
xt

C
x 100
C

El error relativo en la concentracin para una medida

espectrofotomtrica esta dada por la siguiente expresin :

C 0,434 T

C
T log T

OJO: formula
corregida!

T = error fotomtrico
(incertidumbre absoluta para la
transmitancia, resolucion del
instrumento )
Por ejemplo 0,005 = 0,5%T

Ejercicio
Calcular el error relativo en concentracin porcentual para
mediciones con absorbacias de ; 0,125 ; 0,434 y 0,900
suponiendo que existe una incertidumbre fotomtrica instrumental
de un 1 %
0,125 = 74,9 %T

0,434 = 36,8 %T
0,900 = 12,5%T

C
0,4343 0,01

0,046 = 4,6%
C
0,749 log 0,749

C
0,4343 0,01

C
0,368 log 0,368

= -0,027 ; = 2,7%

C
0,4343 0,01

= -0,038 ; = 3,8%
C
0,125 log 0,125

Determinacin de mezclas
Se basa en que, a una determinada longitud de onda la absorbancia
observada es igual a la suma de las absorbancias de cada
componente

2,0

AAS 25 ppm
CAF 10 ppm
Mezcla
1,5

2
A

1,0

0,5

0,0
200

220

240

260

/nm

280

300

320

ATOTAL 1 aAAS,1bCAAS + aCAF1bCCAF

ATOTAL 2= aAAS2bCAAS + aCAF2bCCAF

Resolver este sistema de ecuaciones simultneas para las

incgnitas CAAS y CCAF
Para que la exactitud y precisin de los resultados sean buenas es necesario
seleccionar ambas longitudes de onda de forma que aAAS < aCAF a una de las
longitudes de onda y lo inverso a la otra longitud de onda . La precisin
optima se logra cuando la diferencia de absortividades sea lo mas grande
posible . Se deben fijar las condiciones de pH para evitar la presencia de
especies en equilibrio variable.

Ejercicio
Se pueden determinar las concentraciones de una mezcla de Fe+3
y Cu +2 formando el complejo con hexacianorutenato (II) ,
Ru(CN)6-4, que forma un complejo de color azul- violceo con el
Fe+3 ( max = 550 nm) y un complejo gris plido con el Cobre
(max = 396 nm) Las absortividades molares de los complejos de
metal se resumen en la tabla siguiente:
e 550

e 396

Fe +3

9970

84

Cu+2

34

856

Cuando una muestra que contiene

Fe+3 y Cu+2 se analiza en una cubeta
de 1 cm de paso ptico la
absorbancia a 550 nm fue de 0,183 y
la absorbancia a 396 nm fue de
0,109. Cul es la concentracin molar
de Fe +3 y Cu+2 en la muestra ?

a 550 nm :

0,183 = 9970 CFe + 34 CCu

a 396 nm :

0,109 = 84 CFe + 856 CCu

Despejamos C Cu en la primera ecuacin

0,183 9970CFe
34
y sustituimos en la segunda
C Cu

0,183 9970CFe
0,109 84C Fe856

34

4,607 (251x105 )CFe

Despejando : CFe = 1,80 x 10 -5M

C Cu = 1,26 x 10-4 M
Ref: D:Harvey, Qumica Analtica Moderna , pag. 281

Otras aplicaciones
Determinacin de constantes de equilibrio
( p.ej. La constante de acidez de un indicador acidobase)

Caracterizacin de la estequiometra de un
complejo metal-ligando
( p. ej. ML; ML2, ML3 etc.)

. Titulaciones espectrofotomtricas
(usa graficas de absorbancia vs volumen de titulante,
formacin de un producto absorbente o decoloracin
de un reactivo titulante coloreado)

http://en.wikipedia.org/wiki/Beer%E2%80%93Lambert_law