Tipos de

Microscopios

Historia del Microscopio

En las primeras dcadas del siglo XVII se
iniciaron experiencias con lentes (as llamadas
por tener forma de lentejas) a fin de lograr el
mayor aumento posible. Para ello se basaron en
otro instrumento con lentes que obtuvo gran
xito, el telescopio, usado por primera vez con
fines astronmicos por Galileo, en 1609. Antes
de esta fecha, los seres vivientes ms pequeos
conocidos eran insectos diminutos.
Naturalmente, se daba por sentado que no
exista organismo alguno ms pequeo.

Existan dos tipos de microscopios: el

sencillo y el compuesto; el sencillo no era
ms que una lente montada, el compuesto
estaba formado por una combinacin de
lentes y fue inventado por Zacharias Jansen
en Holanda.
Luego de la invencin de Jansen, en pocos
aos hubo un gran nmero de diseadores de
microscopios en Europa. El primer avance
tcnico del microscopio luego de Jansen fue
el paso de un sistema de 2 lentes a uno de
3, este sistema es la configuracin estndar
que se mantiene en los microscopios de hoy .

Los primeros en usar el microscopio,

incluso Malpighi, usaron sistemas de
lentes que producan aumentos
mucho mayores que los obtenidos
con una sola lente. Sin embargo,
empleaban lentes imperfectos, de
superficies irregulares y con fallas
internas. Si se intentaba lograr un
aumento apreciable, la visin de los
detalles se haca confusa

El microscopio fue perfeccionndose con gran

lentitud, uno de los defectos de los microscopios
primitivos era que sus lentes descomponan la luz
blanca en los colores que la constituyen. Los
objetos pequeos se vean rodeados de anillos de
color (aberracin cromtica) que impedan observar
con claridad los detalles. Pero alrededor de 1820
se perfeccionaron cuando Joseph Jackson Lister,
un ptico ingls, dise un microscopio acromtico
capaz de eliminar los anillos de color que limitaban
la claridad de la imagen. Lister descubri que los
glbulos rojos eran en realidad, discos bicncavos.
El microscopio acromtico constituy un gran
avance, iniciando una serie de perfeccionamientos
que dieron como resultado el moderno microscpio
ptico.

Desde 1660 hasta la actualidad el microscopio ptico

ha sido el pilar fundamental en el conocimiento de lo
invisible. Aunque su poder de resolucin aument a
travs del tiempo (con la mejora en la calidad de las
lentes) al igual que el poder de magnificacin, su
factor limitante fue la longitud de onda de la luz.
En 1930 el mundo submicroscpico se ampli con la
aparicin del microscopio electrnico cuya ventaja
principal con respecto al microscopio ptico es un
aumento de 1000 veces en la magnificacin del
material observado acompaado de una mayor
capacidad de resolucin generando una mejor
definicin y una ampliacin del mundo microscpico.
ADN, virus y pequeas organelas fueron observadas
por primera vez con este microscopio.

Microscopio
Estereoscpico

P
a
r
t
e
s

Utilidad
Los microscopios estereoscpicos

se utilizan en muchos campos,

como la salud, la investigacin
mdica, la biologa, los servicios
pblicos, la enseanza; tambin lo
utilizan
los
joyeros,
loscoleccionistas, los arquelogos
y en el trabajo policial.

El microscopio Estereoscpico
tipo lupa o microscopio de
Diseccin, binocular y
proporciona una visin
tridimensional y proporciona
aumentos ms bajos, por lo que
sirve para observar cuerpos
slidos y opacos como minerales,
vegetales etc.

Tipos de muestras
Generalmente se utiliza para observar
muestras relativamente grandes

Contraste de fases

Historia

1930 Labedeff : Disea primer microscopio de

contraste interferencial.
1932 Frits Zernike : Inventa microscopio de

contraste de fases.
1952 Nomarski : Inventa y patenta el sistema

de contraste Interferencial que lleva su nombre.

1953 Premio Nobel de Fsica otorgado a

Zernike.

P
a
r
t
e
s

Funcin

Se basa en las
modificaciones
de la trayectoria
de los rayos
de luz, los cuales
producen
contrastes notables
en la
preparacin.

Utilidad
Observacin de clulas y tejidos vivos.
En estudios de diversas disciplinas como por
ejemplo fisiologa, parasitologa, farmacologa
(procesos celulares, identificacin y
cuantificacin de microorganismos y parsitos
en fluidos y tejidos, efecto de medicamentos y
otras sustancias en las clulas y sus procesos
de motilidad, ciclosis, digestin, entre otros).
Estudio de alimentos y medicinas.
Anlisis de materiales industriales (metales,
cristales, fibras sintticas, plsticos, pigmentos,
emulsiones y suspensiones minerales).
Estudios geolgicos (minerales).

Comparacin
Micrografas de una neurona en

campo claro (izquierda) con detalles

casi invisibles y con iluminacin de
contraste de fases oscuro o positivo
(derecha) en el que los detalles son
ms evidentes en un fondo claro.

Micrografa de clulas epiteliales

en cultivo mediante la tcnica de
contraste de fases brillante o
negativo, en la cual los detalles y
bordes de las clulas aparecen
brillantes (debido a un halo de
difraccin) en un fondo oscuro

MICROSCOPIO CAMPO
OSCURO

La microscopa de campo
oscuro es una tcnica de
contraste donde solo la luz
difractada desde el
espcimen se usa para
formar la imagen. El
espcimen aparece brillante
contra un fondo oscuro.

Esta es ideal para revelar contornos,

bordes, fronteras y gradientes de
ndice de refraccin pero no brinda
mucha informacin sobre la
estructura interna. Los objetos ideales
incluyen clulas vivas sin tincin
(donde el campo oscuro brinda
informacin no visible con otras
tcnicas), aunque tambin se pueden
observar exitosamente clulas fijas
teidas.

Usos
*Diminutos organismos acuticos
*Parsitos
*Evolucin de las clulas
*Fluidos como:
Sangre
Orina
*Minerales, cristales.

Microscopio Fluorescente

Microscopio Flourescente
Este microscopio hace uso de la

fluorescencia, permite alcanzar altos

niveles de sensibilidad y resolucin
microscpica, permitiendo una apreciacin
diferente de la informacin que se puede
obtener de los especmenes y que
generalmente pasa desapercibida.
La fluorescencia es un fenmeno de
luminiscencia yEs la propiedad que tienen
ciertos elementos qumicos denominados
fluorforos o fluorocromos de emitir luz
visible cuando sobre ellos incide una
radiacin intensa, es decir, absorben una
luz de una longitud de onda determinada

Es necesario:

Fuente de luz: Se necesita una intensa

fuente de luz para excitar la fluorescencia en

el espectro especfico de cada fluorocromo.
La luz debe ser de una longitud de onda
corta. Se emplean lmparas de mercurio a
alta presin Tambin se utiliza luz
ultravioleta y rayos laser.
Objetivos:Deben tener gran capacidad
para transmitir la luz y proveer una imagen
de alta calidad. De igual manera deben
poseer una gran apertura numrica

Son los que permiten el

paso de luz de una determinada
longitud de onda, la del rango y
color necesario para excitar al
fluorocromo y bloquean las
longitudes no deseadas. Una vez
filtrada, la luz incide sobre el
espcimen por reflexin de un
espejo dicroico y es nuevamente
filtrada para poder ser observada .
Suelen ser de cuarzo ya que el vidrio
absorbe la radiacin ultra-violeta.

Filtros:

Tipos de filtros
*El de excitacin:Ubicada entre la fuente de luz y el

preparado. Permite el paso de ondas de luz con

longitud que caiga en el rango azul con el fin que el
preparado sea alcanzado exclusivamente por la luz
azul y produzca emisin de luz fluorescente.
*El de barrera:Ubicada antes del ocular para prevenir
daos retinianos que podran ser causados por rayos
ultravioleta que escapan el espejo dicrmico. Corta
completamente la luz de excitacin no deseada, es
decir selecciona la longitud de onda de emisin del
fluorocromo.
*Espejo Dicroico:Permite la separacin de la luz de
excitacin y la fluorescencia.
Posicionado en 45 respecto al eje ptico, la longitud
de onda ms corta es reflejada y la longitud de onda
ms larga lo atraviesa.

Tcnicas de Tincin Fluorescente

DAPI:tie el DNA de color azul brillante.

Permite enumerar microorganismos.

Desventaja:No discrimina entre clulas
vivas y muertas
Tincin de Viabilidad:permite
discriminar entre clulas vivas y muertas
Desventaja:solo apropiado para
cultivos puros, tintes se pueden pegar
a otras cosas que no son clulas en
muestras ambientales o complejas.

 Green Fluorescent Protein:Deteccin y rastreo de

organismos introducidos en ambientes naturales.

FLUORESCENCIA MULTIPLE

Es posible combinar, sobre una misma

muestra, dos o ms colorantes siempre
que emitan en diferente longitud de onda
y nuestro sistema sea capaz de excitar a
todos a la vez y discriminar los fotones
emitidos por ellos.

Microscopio
de luz uv

Microscopio
Ultravioleta

Microscopio de luz

ultravioleta 300 m.
Es absorbida por los
ac. Nucleicos.
Toma de

fotomicrografas.
Se utiliza en las

tcnicas de
fluorescencia.

CARACTERISTICAS

Excitacin de los
electrones de sustancias
presentes en las clulas
vivas o tejidos.
Se utilizan colorantes
especiales o
fluorocromos.

ESTRUCTUR
A

Microscopio Confocal

Microscopio Confocal
El microscopio confocal es un instrumento que
permite realizar cortes pticos finos a muestras
de tejidos ms o menos gruesos y realizar
reconstrucciones en tres dimensiones a partir de
cortes seriados. Fue inventado en el ao 1955 por
el cientfico estadounidense Marvin Minsky (116)
al estudiar neuronas. Su mecanismo, basado en el
microscopio de fluorescencia hace posible la
obtencin de imgenes de la arquitectura
tridimensional de clulas y tejidos

Los detalles de la ptica del microscopio

confocal son complejos y
complementado por mtodos
electrnicos y de computacin, este
instrumento permite enfocar nicamente
un plano determinado del espcimen,
eliminando la luz (fluorescencia)
procedente de las regiones que no estn
en el plano de enfoque

Ventajas
Uso de la fluorescencia (epi-fluorescencia).
Enfoca un solo plano del espcimen.
Elimina la informacin proveniente de

otros planos no enfocados del espcimen.

Obtencin de cortes pticos seriados a
partir de muestras con cierto grosor o cuyo
corte fino se dificulta.
Gracias a programas de computacin, se
combinan los cortes pticos seriados y a
partir de ellos se reconstruye en tres
dimensiones la estructura observada.

Configuracin
Los microscopios confocal modernos son instrumentos

altamente sofisticados y sus elementos principales son:

La fuente de luz:Generalmente emplea una fuente de luz
muy poderosa (laser o lmpara de arco). Se pueden utilizar
sistemas de rayos laser multi-frecuencia (en el rango
ultravioleta, luz visible e infra-roja) adaptados a los tipos de
marcadores fluorescentes empleados para el contraste de
los elementos celulares. Se han desarrollado dos tcnicas,
la de escaneo con un solo rayo (laser) y el escaneo con
mltiples rayos. La primera es la ms popular y emplea un
par de espejos controlados por computadora para escanear
el espcimen. La tcnica multi-rayos utiliza una lmpara de
arco y el escaneo se realiza gracias a un disco rotatorio
(disco de Nipkow) conformado por micro-lentes y microagujeros. Esta ltima tcnica de iluminacin disminuye el
dao a los especmenes e incrementa la deteccin .

Sistema ptico:El sistema ptico de los

microscopios est basado en los principios
fundamentales que se mantienen
inalterados, sin embargo estn
complementados con los avances en ptica
moderna y la tecnologa electrnica.
Filtros de interferencia:Incluyen
espejos dicromticos o dicroicos, barreras
con agujero de dimetro variable y diversos
filtros de excitacin (para seleccionar la
longitud de onda de excitacin del
fluorocromo).

Detectores:Son fotodetectores muy

sensibles a la fluorescencia emitida.
Para los microscopios con mltiples
rayos generalmente se usan cmaras
CCD (charge- coupled device).
Computadora: Configurada con los
requisitos suficientes de memoria y
procesador, tarjetas de video de alta
resolucin, complementadas con
software de captura, anlisis y
procesamiento de imgenes, as como
tambin de impresoras de muy alta
calidad

Aplicaciones
En comparacin a los otros tipos de
microscopios, el microscopio confocal
proporciona un mtodo altamente sofisticado
y mejorado para obtener imgenes.
En investigaciones en el campo de la biologa
celular y biomedicina es muy til para medir
procesos dinmicos, realizar videos para
capturar secuencias en muy corto tiempo en
clulas vivas y otras aplicaciones

*Procesos celulares: Para medir

actividades enzimticas, reacciones de
oxidacin, pH intracelular, fagocitosis,
apoptosis, comunicaciones
intercelulares. Electrofisiologa.
*Estudios de ADN y ARN.
*Morfologa de organoides
citoplasmticos.
*Ciruga y otros mtodos clnicos.
*Otras aplicaciones en el campo de la
fsica, la qumica y en tecnologa
alimentaria.

Microscopio Electrnico

El microscopio electrnico es un
dispositivo que utiliza un haz de
electrones dirigidos hacia una
muestra a analizar y produciendo
una imagen en una pantalla
sensible a los electrones. ste tipo
de microscopio permite realizar
aumentos de hasta 2.000.000x,
frente a los microscopios pticos
que producen aumentos de
2.000x, gracias a que la longitud
de onda de los electrones (0,5
Angstroms) es mucho menor que

El microscopio electrnico fue desarrollado por los

cientficos alemanes Ernst Ruska y Max Knoll, que
crearon un prototipo en 1931, basndose en las
teoras sobre la dualidad onda-corpsculo del fsico
francs Louis-Victor de Broglie. Ese mismo ao la
empresa alemana Siemens compra la patente , pero
hasta 1939 no se comercializa el primer ejemplar.

Existen varios tipos de microscopios

electrnicos, pero los ms usados son:
Microscopio Electrnico de Barrido (MEB)
Microscopio Electrnico de Transmisin (MET)

MEB
Un haz delgado de electrones, es producido en
la parte superior del microscopio por medio del
calentamiento de un filamento metlico . El
trayecto del haz de electrones es enseguida
modificado por un conjunto de bobinas
deflectoras que lo hacen recorrer la muestra
punto por punto y a lo largo de lneas paralelas
(barrido). Cuando los electrones primarios
golpean la muestra, son emitidos electrones
secundarios por el propio espcimen.

Preparacin de muestras
Limpieza
Relajacin
Fijacin
Deshidratacin
Montaje de muestra
Recubrimiento
Almacenamiento

MET
A diferencia del MEB , este no explora
superficies , por el contrario el haz de
electrones incidente atraviesa la
muestra o espcimen observado y la
sombra de detalles finos o ultraestructura es capturada en una pantalla
fosforescente con propiedades de
emisin de luz, ubicada en la parte
inferior de la columna.

Preparacin de muestras
Fijacin primaria
Lavado
Fijacin secundaria
Deshidratacin
Infiltracin con solventes

transicionales
Inclusin
Polimeracin de la resina

Aplicaciones
Geologa
Metalurgia
Control de Calidad
Medicina Forense
Biomedicina
Medicina
Autentificacin de

Obras Arte

Mosca tomada por

MEB

Mitocondria
tomada por
MET

ESPERMATOZOIDES

Desventajas
Elevados costos de los

equipos
Instalaciones especiales para
un buen funcionamiento
Costes de reactivos elevados
Equipos complejos y
facilmente descalibrables

Referencias
http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/capitulo

6_5.htm
http://campodocs.com/articulos-de-todos-los-temas/article_35364.html
http://morfoudec.blogspot.mx/2008/07/microscopa-de-fluorescencia.html
http://microbiologyonlineblog.blogspot.mx/2009/12/microbiology-online-focus-

on.html?m=1
http://www.microspectra.com/support/technical-support/uv-microscope-

applications/35-technical-support/122-uv-microscope-applications
http://www.vet.unicen.edu.ar/html/Departamentos/Samp/Microbiologia/Histori

a%20de%20la%20Microscopia.pdf
http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celula

r/melecbarrido.htm
melecbarrido
www.javeriana.edu.co
http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celula

r/programacell.htm