Tcnica para

bsqueda de
clulas LE

materiales:
Tubos de macro-hematocrito
Laminas Portaobjetos
Frasquito con 4-8 perlas de vidrio y 1 gota
de heparina
Jeringa con aguja gruesa, de 15 cm de
largo
Embudo

Introduccin
El Lupus Eritematoso Sistmico es una enfermedad autoinmune
que afecta a muchos tejidos y rganos como articulaciones, piel,
sistema nervioso, rin, corazn, pulmn, sangre, hgado, bazo y
ojos. Las clulas LE son polimorfonucleares que fagocitaron
restos nucleares alterado, proveniente de la destruccin del
ncleo de otros leucocitos, por el llamado Factor LE (factor
nuclear). Este es Ig G-anti ADN que se fija a la superficie del
ncleo y determina alteraciones en la cromatina; y entonces al ser
recubierto por anticuerpos, es fagocitado por los neutrfilos. El
objetivo es hallar neutrfilos que tengan adherido a su superficie
restos nucleares, o bien que los restos estn en su interior.
Existen 2 mtodos (entre otros)

A) Mtodo sin Coagulo

1- Sacar sangre al paciente, y colocar en frasquito con las perlas
que posean 1 gota de heparina.
2- Dejarlo rotar en el agitador por 30 minutos, o bien agitar
vigorosamente por 5 a 10 minutos para generar la lisis de
leucocitos.
3- Llevar la muestra a estufa de 37 C entre 1 a 4 horas, para
darle tiempo a los leucocitos enteros a fagocitar los restos de
los lisados y que decanten los glbulos del plasma.
4- Con la jeringa de aguja larga aspirar la capa de leucocitos, en
lainterface plasma-glbulos rojos y descargar dentro de 2 a
4tubos de macrohematocrito.
5- Centrifugar a muy baja velocidad (500-1000 rpm), por
5minutos.
6- Aspirar nuevamente con la jeringa la capa de leucocitos de los
tubos, y descargar en los portas, y realizar los extendido con
extensor.7- Colorear por el mtodo de May Grunwald - Giemsa y
ver con objetivo de inmersin.

B) Mtodo con cogulo:

1- Se sacan unos 5 a 10 ml de sangre y se la deja coagular
durante2 horas a 37 C.
2- Centrifugar a 3500 rpm por 10 minutos.
3- Eliminar el suero y depositar el coagulo sobre varias capas de
gasa, y stas sobre un embudo.
4- Aplastar el coagulo con una varilla y recoger el producto en un
tubo de ensayo.
5- Pasar el liquido obtenido a un tubo de macrohematocrito con
la jeringa con aguja larga, y centrifugar 15 minutos a 2000 rpm.
6- Usando la misma jeringa, eliminar primero el suero, y luego
tomar la capa de leucocitos y depositar en portas para hacer
extendidos.
7- Colorear por el mtodo de May Grunwald - Giemsa y ver con
objetivo de inmersin.

Observacin e interpretacin:
Buscar los campos bien coloreados y con las clulas bien separadas,
evitando la observacin de clulas "pegoteadas" por efecto de la lisis y la
extensin. La prueba es positiva cuando se hallan leucocitos que
fagocitaron restos nucleares de los lisados, o bien los tenga adheridos
en su superficie, que se notara por la diferencia de color entre el resto
nuclear y el ncleo de leucocito entero, y se informara "Se observan
clulas LE
El "Fenmeno de Roseta" se debe a la adhesin de 2 o mas neutrfilos a
un resto nuclear. Es raro de observar, y se debe diferenciar de las clulas
"pegoteadas" propias de extendido. La presencia de leucocitos
vacuolados no indica necesariamente la presencia de clulas LE, ya que
fagocitaron cualquier resto celular. La prueba no es totalmente
especifica, debido a que enfermedades autoinmunes tambin generan
clulas LE, y no tiene gran sensibilidad, ya que es negativa en 30% de
pacientes con lupus. Esto se explica por el tratamiento con corticoides
en estos enfermos que inhibe la formacin de este fenmeno, por lo
actualmente no tiene valor diagnostico y es necesario realizar otras
pruebas,

tal como la bsqueda de anticuerpos, que son mas sensibles y

especificas. Algunos laboratorios sugieren que se confirme la
presencia de anticuerpos antinucleares (FAN/ANA) antes de
buscar e informar las celulas LE, ya que es una tcnica con alto
error. Adems no es especifica para Lupus, y esta cayendo en
desuso. Sin embargo, para diagnosticar LES, es uno de los 10-15
parmetros a considerar para confirmar la enfermedad.

Imagenes de Celulas LE: