UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN

BAUTISTA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA
HUMANA

Gentica
Microbiana e
Ingeniera gentica
DOCENTE DE MESA: GARDINI
T U E S TA W I L F R E D O E R W I N
CURSO: MICROBIOLOGA MDICA
CICLO: IV CICLO
TURNO: MA

ALUMNOS:
LARA GUTIERREZ, Itzel
Mishell
MENDIETA GARAY, Carolina
PIMENTEL GONZALEZ, Luis
Angel
RAMOS HIDALGO, Nataly
RENTERIA MARMOL, Luis

TEMA 1:
ORGANIZACIN DE LOS GENES, ADN PROCARIOTE

INTRODUCCION
El cromosoma bacteriano, es equivalente a una molcula
de ADN bicatenario, circular y cerrada, que debe estar
organizada de manera que permita la expresin de toda
su informacin.

ADN
BACTERIA
NO

Estructura del
CROMOSOMA BACTERIANO
La primera visualizacin del
nucleoide bacteriano teido
revel una estructura muy
condensada
de
los
cromosomas.

El grado de compactamiento del

cromosoma bacteriano se aprecia al
comparar la longitud extendida de la
molcula de ADN doble y la dimensin
de la clula, ejemplo, el cromosoma de
la E.coli tiene 1400um de longitud y
est contenido en una clula en forma
de bastn de 1x2um.

En la clula bacteriana
hay una sola molcula
de ADN que forma el
cromosoma, esta
molcula tiene un peso
molecular de 3x109 y es
un crculo cerrado.
La estructura
molecular de este
cromosoma fue
determinado por
Watson y Crick.
Se compone de una
doble hlice, formada a
su vez por dos cadenas
complementarias de
polinucletidos unidos
por uniones de

SUPERESTRUCTURA DEL
ADN SUPERHELICOIDAL
Los cromosomas bacterianos y plsmidos funcionan
como molculas circulares, esta circularidad le da la
funcin biolgica de todas las molculas de ADN, pues
ayuda a establecer una sper estructura esencial en el
ADN, denominada superenrrollada o superhelicoidal.
Puede suceder de 2 maneras:

La molcula helicoidal
doble puede enrollarse
alrededor de una
estructura cilndrica para
formar una espiral

ADN doble circular puede

enrollarse en una
estructura entretejida.

En la clula bacteriana el
superentollamiento ocurre por un
giro superhelicoidal orientado hacia
la derecha.
En organismos eucariticos, el
carcter superhelicoidal del ADN es
mantenido por los nucleosomas,
mientras que en las bacterias
dependen de enzimas, las
topoisomerasas, controlan la
densidad superhelicoidal de las
molculas de ADN alternado el
nmero de uniones. Sin embargo,
las bacterias contienen una
topoisomerasa, conocida como ADN
girasa, que es capaz de reducir el
nmero de uniones y en
consecuencia cataliza la formacin
de superhelices negativas.

Existen 2 tipos de
isomerasas, la tipo I
producen roturas en
cadenas nicas mientras
que la de tipo II
producen rotura en las
dos cadenas.

La ADN girasa es necesaria

para la viabilidad de las
bacterias, los antibiticos
que inhiben la actividad de
esta enzima impiden su
crecimiento. La ADN girasa
de E.coli es oligomrica y
est compuesta por dos
subunidades alfa y dos
subunidades beta.

CICLO CELULAR Y LA
DUPLICACION CROMOSOMICA
Las clulas como E. coli, sintetizan ADN
durante todo el ciclo de divisin. Esto significa
que otras funciones del cromosoma como la
transcripcin y recombinacin gentica, deben
ser ajustadas por un proceso de duplicacin.
En la duplicacin se demostr que los
cromosomas hijos son rplicas de la molcula
de ADN madre, es decir compuestos por una
cadena madre completa y una cadena
sintetizada de novo de ADN, ocurren en forma
bidireccional.
El cromosoma bacteriano y los plsmidos son
un replicn consideradas como las unidades
de duplicacin definidas por un origen y una
terminacin.

Duplicacin del
cromosoma bacteriano
La duplicacin cromosmica puede separarse en tres fases: iniciacin,
elongacin y terminacin.

La pieza central de la duplicacin es el ADN polimerasa, la

protena de duplicacin mas estudiada. Las bacterias contienen
tres tipos de polimerasas conocidas como polimerasas I, II y III.

Las polimerasas I y III

estn directamente
involucradas en el
proceso de duplicacin

Para la polimerasas II
no se descrito ningn
papel definido en la
duplicacin.

Regulacin de la duplicacin
cromosmica
La regulacin fisiolgicamente significativa de la velocidad de la duplicacin cromosmica
en las bacterias es equivalente a la modulacin de la frecuencia con la cual se inicia este
proceso.
Probablemente la regulacin de la duplicacin cromosmica este relacionada con aquellas
protenas que se sabe que estn mecnicamente involucradas en el proceso de iniciacin.
Algunas de estas protenas han sido verificadas estudiando la iniciacin in vitro en
plsmidos en los cuales se ha introducido el origen de la duplicacin de la regin oriC del
cromosoma de E.coli, entre estas protenas estn el producto del gen dnaA, ARN
polimerasa, ADN girasa y protena dnaB y dnaC.

TRANSCRIPCION
La transcripcin es el mediante el
cual se transfiere la informacin
contenida en la secuencia del ADN
hacia la secuencia de protena
utilizando diversos ARN como
intermediarios. Durante la
transcripcin gentica, las
secuencias de ADN son copiadas a
ARN mediante una enzima llamada
ARN polimerasa que sintetiza un ARN
mensajero que mantiene la
informacin de la secuencia del ADN.
De esta manera, la transcripcin del
ADN tambin podra llamarse
sntesis del ARN mensajero.

PROCESO DE DECODIFICACIN
PRIMARIA
En la sntesis de protenas se usan
los tres tipos de ARN codificado en
el ADN de las bacterias. El ARN
ribosmico (ARNr), ARN de
transferencia (ARNt) estn
involucrados en la sntesis de
protenas decodificadas en el ARN
mensajero (ARNm).
Una gran porcin del cromosoma
est dedicada a la codificacin de
una variedad igualmente amplia
de molculas de ARNm u mucho
menos para ARNr y ARNt. A pesar
de esto el ARNr y el ARNt abarcar
respectivamente el 85% y el 5%
del ARN celular total.

TRADUCCION
En la traduccin, el ARN mensajero se decodifica para producir un
polipptido especfico de acuerdo con las reglas especificadas por el
cdigo gentico. Es el proceso que convierte una secuencia de ARNm en
una cadena de aminocidos para formar una protena.

Iniciacin, es la
orientacin del
aminoacil-ARNt en
forma tal que el
cdigo de tripletes
del ARNm sea ledo
en el marco
apropiado.

Elongacin, una vez

que se ha formado el
complejo de
iniciacin, el
crecimiento de la
cadena polipetdica
ocurre por el
agregado repetitivo
de aminocidos.

Terminacin, este
proceso da como
resultado la
detencin del
crecimiento de la
cadena polipeptdica
as como la
liberacin del ARNt
desde el extremo
carboxilo de la
cadena polipeptidica.

TEMA 2:
TRANSFERENCIA
DEL MATERIAL
GENTICO EN
BACTERIAS

REPRODUCCIN
BACTERIANA
El mecanismo de reproduccin
habitual en bacterias es la
biparticin.
Mediante
este
mecanismo se obtienen dos
clulas hijas, con idntica
informacin en el ADN circular,
entre s y respecto a la clula
madre,
y
de
contenido
citoplsmico celular similar. Las
clulas hijas son clones de la
progenitora. Por este sistema
de reproduccin se puede
originar una colonia de clulas
con
material
idntico;
sin
embargo, esto no ocurre debido
al alto ndice de mutaciones
que se producen en las
bacterias.

La biparticin se produce
cuando
la
clula
ha
aumentado su tamao y
ha duplicado su ADN. El
ADN bacteriano se une a
un
mesosoma,
que
separa el citoplasma en
dos y reparte cada copia
del ADN duplicado a cada
lado. Al final del proceso
el mesosoma se ha unido
al resto de la membrana
plasmtica y se han
formado dos clulas hijas
genticamente iguales.

Reproduccin parasexual
En ocasiones, la clula bacteriana tiene la oportunidad de
intercambiar informacin gentica por procesos de
recombinacin. Estos procesos son la transformacin, la
transduccin y la conjugacin. En estos procesos no
hay formacin de ningn tipo de gametos, por lo que no
es reproduccin sexual.

Transformacin

Fragmentos de ADN que pertenecan a clulas lisadas

(rotas) se introducen en clulas normales. El ADN
fragmentado recombina con el ADN de la clula
receptora, provocando cambios en la informacin
gentica de sta.

Transduccin
Cuando una clula es atacada por un virus bacterifago,
la bacteria genera nuevas copias del ADN vrico. En la
fase de ensamblaje se pueden introducir fragmentos de
ADN bacteriano en la cpsida del virus. Los nuevos virus
ensamblados infectarn nuevas clulas. Mediante este
mecanismo, una clula podr recibir ADN de otra bacteria
e incorporar nueva informacin.

Los bacterifagos son virus

que
parasitan
bacterias.
Tienen
una
estructura
compleja formada por una
cabeza, que contiene el
material gentico, y una cola
que consta de unas fibras
con las que se anclan a la
superficie
bacteriana.
El
material
gentico
del
bacterifago pasa desde la
cabeza, a travs de la cola,
hasta el interior de la
bacteria.

El material gentico del virus se integra dentro del material

gentico bacteriano y se replica. De esta manera el virus se
reproduce y forma nuevos bacterifagos que acaban
provocando que la bacteria se destruya y estalle.

Conjugacin
Este proceso se lleva a
cabo si la clula presenta el
plsmido F, que contiene
la
informacin
gentica
para formar pili, puentes
que
sirven
de
unin
citoplsmica
entre
dos
bacterias. La clula que
presenta el plsmido se
denomina F+; la clula que
no lo contiene se llama F-.
La bacteria F+ (donadora
de informacin) se une a
una bacteria F- (receptora)
mediante uno de sus pili.

A travs de l introduce
una hebra del plsmido F,
de forma que la bacteria
F- se convierte en bacteria
F+.En
ocasiones
el
plsmido se introduce en
el
anillo
del
ADN
bacteriano. Entonces, la
bacteria
donadora
se
denomina
Hfr
(High
frequency
of
recombination). De esta
forma la bacteria Hfr
puede donar a otras
clulas cualquier gen de
su ADN.

ASOCIACION UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

IV CICLO MA
SEMINARIO: GENTICA

MICROBIANA E INGENIERA
GENTICA
TEMA 3: Mutacin bacteriana y consecuencias

Es importante que el ADN se replique de forma

precisa para que las bacterias sobrevivan, pero
se producen errores y alteraciones accidentales
del ADN. A pesar de la existencia de sistemas de
reparacin del ADN, se producen mutaciones y
alteraciones.

I.- MUTACIN:
DEFINICIN
Una mutacin se define como cualquier modificacin de la
secuencia de bases del ADN.

III.- MUTACIONES BACTERIANAS:

CARACTERSTICAS

MUTACIN
PUNTUAL:
SUSTITUCIN
ADICIN
PRDIDA O
DELECIN

IV.- CAUSAS:
En la naturaleza se produce un gran nmero de mutaciones de forma
espontnea; sin embarga las mutaciones pueden tambin ser
consecuencias de:

Ejm
:

CLASES:

V.- MUTACIONES: TIPOS

MUTACIN NO
LETAL:
CONSECUENCIAS

TEMA 4:
EXPRESIN GNICA
EN PROCARIOTAS

Expresin Gnica en los

Procariotas
La expresin gnica en bacterias se dar segn las
circunstancias en las que se encuentre.
Es de vital importancia un mecanismo de regulacin de la
expresin gnica, de manera que los genes se expresen
cuando sea necesario.
La regulacin dela sntesis de protenas se lleva a cabo en
3 niveles:
Replicacin
Transcripcin
Traduccin

Sistemas Constitutivos
y Adaptativos
a) Sistema Constitutivo:

Son un conjunto de genes, tienen la capacidad de

mantener de manera constante el metabolismo
bsico celular, se denominan genes
constitutivos o genes que guardan la casa.
b) Sistema Adaptativo

Son genes con la facultad de expresarse en

determinadas situaciones y durante un tiempo
concreto; se denominan genes adaptativos o
regulados.

Sistemas Inducibles y
represibles
a) Sistema Inducible
Es cuando el sustrato en donde actuar la enzima provoca la
sntesis de la misma, llevando como nombre Inductor.
En estos sistemas corresponden a procesos catablicos o
degradacin.

b) Sistema Represible
Es cuando el producto de la sntesis enzimtica impide la
produccin de la enzima, llevando el nombre de corepresor.
Estos sistemas corresponden a procesos de anabolismo o
sntesis.

Elementos de control

Elementos que intervienen en la

regulacin de la expresin gnica en
bacterias. Elementos del Opern.

Molculas difusibles

Genes Estructurales

Gen regulador

Promotor
Operador
Protenas
reguladoras
Efectores
Inductores
Codifican
para
polipptidos
Codifica para
protena
reguladora

OPERON LACTOSA

OPERON LACTOSA
(control negativo)

OPERON LACTOSA
(control positivo)
En los sistemas de control negativo existe una protena que
impide la transcripcin de los genes estructurales, en los
sistemas de control positivo existe una protena activadora que
estimula la transcripcin de los genes. En principio existen cuatro
tipos de sistemas posibles de regulacin de la expresin gnica:
Tipo 1: Inducible, control negativo (opern lactosa y opern
galactosa)
Tipo 2: Inducible, control positivo (opern arabinosa y opern
maltosa)
Tipo 3: Represible, control negativo (opern triptfano y opern
histidina)
Tipo 4: Represible, control positivo (no se han descrito)

OPERON LACTOSA (control

positivo)

EL OPERN
TRIPTFANO

EL OPERN TRIPTFANO (OPERN TRP)

Es un sistema de tipo represible, ya que el aminocido triptfano impide la
expresin de los genes necesarios para su propia sntesis cuando hay
niveles elevados de triptfano.

Elemento
s del
Opern
Triptfan
o

En ausencia de triptfano, o cuando

hay
muy
poco,
la
protena
reguladora no es capaz de unirse al
operador y se transcriben los genes
del opern triptfano.
En presencia de triptfano, el
triptfano se une a la protena
reguladora, de manera que ahora si
puede unirse a la regin operadora y
no
se
transcriben
los
genes
estructurales del opern triptfano.

POR LO TANTO, la diferencia esencial entre el opern lac (inducible) y el opern

trp (represible), es que en este ltimo el represor del triptfano solamente es
capaz de unirse al operador cuando previamente est unido al trp.
Existe otro mecanismo de regulacin que esregulacin por atenuacin.
La regin atenuadora acta como una regin terminadora de la transcripcin en
presencia de triptfano, mientras que en ausencia de triptfano el atenuador se
desactiva y todas las molculas de ARNm se completan.
La secuencia
atenuadora se
encuentra en
la regin lder

Secuencia de
bases de la regin
atenuadora y
comienzo de la
secuencia del gen
trpE

TEMA 5:
INGENIERA
GENTICA
BACTERIANA Y SU
APLICACIN EN
LA MEDICINA

Laingeniera genticaes latecnolgicadel control y transferencia

deADNde un organismo a otro, lo que posibilita la correccin de los
defectos genticos y la creacin de nuevas cepas (microorganismos),
variedades(plantas)yrazas(animales)paraunaobtencinmseficientede
susproductos.
1973:genesdeunaespeciese
introducenenorganismosdeotra
especieyfuncionancorrectamente.
1978:seclonaelgendelainsulina
humana.
1996:secompletalasecuenciadel
genomadeunorganismoeucaritico,
lalevaduracervecera"Saccharomyces
cerevisiae".
1997: Clonacindelprimermamfero,
unaovejallamada"Dolly".

Estastcnicasfundamentalmenteson:
LA TECNOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE:Consisteenaislarymanipularun
fragmentodeADNdeunorganismopara"recombinarlo"coneldeotroorganismo.
GeneralmentesetrataelADNconunaendonucleasaderestriccinqueoriginaen
estecasouncorteescalonadoenlasdoshebrasdoblesdeADN.Losextremos
escalonadosdeambashebrasdeADNsoncomplementarios,unacondicinque
tienenquetenersisequierenunir.LosdosADNsascortadossemezclan,se
calientanysenfransuavemente.Susextremoscohesivosseaparearndando
lugaraunnuevoADNrecombinado,conunionesnocovalentes.Lasuniones
covalentesseformanaadiendoADNligasayunafuenteenergticaparaformarlos
enlaces.
ElADNrecombinadoseinsertaenunADNvectorqueactecomovehculopara
introducirloenunaclulahospedadoraqueloreplique,losvectoreso
transportadoresmsutilizadossonlosplsmidosyelADNdelfagolambda.

SECUENCIACIN DE ADN

:esunconjuntodemtodosytcnicas
bioqumicascuyafinalidadesladeterminacindelordende
losnucletidos(A,C,GyT)enunoligonucleotidodeADN.LasecuenciadeADN
constituyelainformacingenticaheredabledelncleocelular,losplsmidos,
lamitocondriaycloroplastos(Enplantas)queformanlabasedelosprogramas
dedesarrollodelosseresvivos.Aspues,determinarlasecuenciadeADNes
tilenelestudiodelainvestigacinbsicadelosprocesosbiolgicos
fundamentales,ascomoencamposaplicados,comolainvestigacinforense.
EldesarrollodelasecuenciacindelADNhaaceleradosignificativamentela
investigacinylosdescubrimientosenbiologa.Lastcnicasactualespermiten
realizarestasecuenciacinagranvelocidad,locualhasidodegranimportancia
paraproyectosdesecuenciacinagranescalacomoelProyectoGenoma
Humano.Otrosproyectosrelacionados,enocasionesfrutodelacolaboracinde
cientficosaescalamundial,hanestablecidolasecuenciacompletadeADNde
muchosgenomasdeanimales,plantasymicroorganismos.

Tcnica de la PCR:Tambinexistenmtodosparaamplificarunadeterminada
secuenciaofragmentodeADN.Lamsconocidaeslatcnicadela reaccin en
cadena de la polimerasa (PCR).Asseconsiguemultiplicarundeterminadofragmento
deADNmillonesdevecesparapodertenerunacantidadsuficienteparaestudiarlo.Sin
estatcnicaseranimposibleslosestudiosdeADNparaelreconocimientodela
paternidadoencasodedelito,pueslacantidaddeADNpresenteenlasclulasestan
pequea,delordendepicogramos,quesenecesitaraunagrancantidaddematerial
celularparatenerunacantidadapreciabledeADN.

Lareaccinesunprocesocclico:
LamolculadeADNquevaacopiarsesecalientaparaquesedesnaturaliceyse
separelasdoshebras.
CadaunadelashebrasescopiadaporlaADN-polimerasa.
Lascadenasrecinformadassonseparadasdenuevoporelcalorycomienzaotro
nuevociclodecopias.Estosciclosserepitenhastaqueseobtieneelnmerodecopias
deseado.

USOS EN LA MEDICINA
Procedimientos de clonado y expresin de
genes:

Produccin de protenas que son usadas

en
el
tratamiento
de
algunas
enfermedades humanas (por ejemplo la
diabetes), al producir hormonas humanas
como la insulina, la hormona de
crecimiento o el interfern, en bacterias
recombinantes obteniendo cantidades
suficientes como para su aislamiento y
usoteraputico.
Antibiticos naturales para el tratamiento
de las infecciones bacterianas y la
aplicacin de la ingeniera gentica en su
creacin.

Eldesarrollodelavacuna contra
la hepatitis B representa el
primer xito de las vacunas
recombinantes.
Producidaenunalevaduraqueha
sido transformada previamente
con un vector recombinante que
contiene el gen del antgeno de
superficiedelvirus.

Produccin de mutaciones especficas en los genes encargados de la codificacin de

protenasconefectoantibiticooproducirmolculasdeantibiticoshbridos,logradospor
tcnicasdeADNrecombinante.
Aplicacin de la biologa molecular a la medicina, en la produccin de vacunas
recombinantes.

Expresinenbacteriasdegenespropiosdepatgenoscontralosquesedeseavacunar,
porejemplovirus,parsitosuotrasbacterias.
Consisteenelclonadodegenesquecodificanparaantgenosdesuperficiedelvirusodel
parsito contra el que se desea vacunar. Estos antgenos sern expresados en la cepa
recombinante y purificados a partir del cultivo de la misma cepa, usndose luego como
inmungenos.

OJO. Estos mtodos pueden usarse tambin para la produccin de vacunasvivas que
son administradas con virus o bacterias vivas que han sido manipuladas genticamente
paraperdersuvirulencia,)peroquemantienenintactassuspropiedadesinmunognicas.

Biotecnologaaplicadaaldiagnsticoclnico
Produccin de antgenos en bacterias:
Para realizar pruebas diagnsticas que detecten anticuerpos especficos
contra antgenos microbianos en el suero de pacientes. Interesa clonar en
una bacteria de rpido crecimiento como E. coli, el gen que codifica para un
antgeno determinado del microorganismo contra el cual se desea detectar
la respuesta inmune desarrollada por el paciente.
Asi se producir el antgeno proteico en cantidad suficiente como para
capturar los anticuerpos.
Tecnica para la prueba diagnstica: enzimoinmunoensayo
inmunofluorescencia, aglutinacin de partculas de ltex u otras.

(ELISA),

ELISA: para la deteccin de anticuerpos dirigidos contra el antgeno del core

del virus de hepatitis B, habindose este antgeno clonado y expresado en
E. coli.

GRACIAS