INMUNOHISTOQU

MICA

Asencios Espinoza Jhon Wilder

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HISTORIA
Desarroll tcnicas de
inmunofluorescencia a principios del
1940.
En las ciudades extranjeras, los

Albert Hewett Coons

(June 28, 1912 September 30,
1978
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visitantes tienen muchas horas solos.

Se me ocurri que esta teora [de
hipersensibilidad inmunolgica como
la etiologa del ndulo de Aschoff
nunca haba sido probado, y de hecho
no puede ser probado sin la
demostracin de anticuerpo o
antgeno, preferiblemente ambos en
25
despus
NAKANE,
PIERCE
las aos
lesiones
locales.
consider
que
Y
AVRAMEUS,
revolucionaron
podra
ser ms fcil
encontrar ella
tcnica,
a la
antgenollegando
que el anticuerpo
INMUNOHISTOQUMICA como es
hoy.

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INMUNOHISTOQU
IMICA
La inmunohistoqumica es una

tcnica para la localizacin de

molculas en los tejidos
mediante el empleo de
anticuerpos.
Se basa en la gran especificidad
y alta afinidad que tienen los
anticuerpos para reconocer a
molculas y unirse a ellas.
Adems, la conjugacin o
combinacin de los anticuerpos
con enzimas o con sustancias
fluorescentes permite
detectar molculas presentes
en el tejido.
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IMPORTANCIA DE LA
INMUNOHISTOQUIMICA
Proporciona informaciones valiosas para la patologa,
diagnostico, evolucin y tratamiento de las diferentes
enfermedades.
Metodo inmunofluorescente
Localizacin de: virus, y antgenos bacterianos,
anticuerpos en sitio de su formacin en las clulas
plasmticas.
Enfermedades degenerativas: glicogenosis, lipoidosis y
amiloidosis
Neoplasias: clulas cancerosas, su evolucin y
comportamiento.
En el carcinoma metastsico
.-Tiene un gran nmero de fosfatasa cida.
Asencios
Espinozasu
Jhontratamiento
Wilder
4/29/15la
4 .-Al
iniciarse
mdico, si es efectivo,

ANTICUERPOS
.-Cuando se emplean sueros purificados; nos referimos a

anticuerpos policlonales.
.-Existe una tcnica que permite aislar y cultivar en el
laboratorio (in vitro) de forma individualizada a cada uno de
los clones de linfocitos B activados durante la respuesta
inmune. Cada uno de esos cultivos producir un solo tipo
de inmunoglobulina G que reconocer slo a uno de los
determinantes antignicos. A estos se les denomina
anticuerpos monoclonales ya que proceden de linfocitos
que producen inmunoglobulinas idntica.

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ANTICUERPOS POLICLONALES
Reaccionan con varios

eptopos de un
antgeno.
Conejo.
Cabra.
Cerdo.
Oveja.
Caballo.
Inyeccin de 10-200 g de Ag
Intradrmicamente o
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7 subcutneo
Intraperitoneal

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ANTICUERPO MONOCLONALES
Un clon de clulas

plasmticas.
Ratones.
Elevada
homogeneidad.
Sin Ac inespecficos.
Fcil
caracterizacin.
Sin variabilidad.
Especificidad: El eptopo del antgeno debe ser nico.

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DIFERENCIAS DE
ANTICUERPOS

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ANTICUERPO
MONOCLONAL
La investigacin biomdica, la identificacin y

aislamiento de protenas, activacin de enzimas y su

conocimiento de la estructura molecular y morfognesis.
Diagnstico: permite la deteccin de hormonas,
vitaminas, citocinas; la monitorizacin de drogas, la
deteccin de alrgenos, marcadores tumorales.
Biosensores: Los anticuerpos monoclonales acoplados a
transductores electrnicos pueden detectar tanto
molculas orgnicas como inorgnicas como la
contaminacin de metales pesados en alimentos y agua,
deteccin de gases txicos, etc
Tratamiento: son capaces de destruir clulas, incluidas las
tumorales, mediante distintos mecanismos.
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ANTICUERPO

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N
Las inmunoglobulinas, aunque se unan a la

molcula que queramos detectar, no son visibles

con el microscopio por lo que la tendremos que
conjugar (unirla) a otras molculas que nos den
una seal visible. Estas molculas que aportan
visibilidad a los anticuerpos suelen ser de dos
tipos: molculas fluorescentes y
enzimas.
Las primeras se pueden observar con el

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microscopio de fluorescencia mientras que las

segundas pueden convertir determinados sustratos
solubles en productos insolubles y coloreados. La
Asencios aparece
Espinoza Jhon all,
Wilder donde est la sustancia
seal
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fluorescente o la enzima, que es donde se ha unido

CONJUGACION
INMUNOHISTOQUIMICA

CROMFORA
( ANTICUERPO MARCADO CON

UNA ENZIMA)
PEROXIDASA Y LA FOSFATASA
ALCALINA
.-MICROSCOPIO OPTICO

INMUNOHISTOQUIMICA

INMUNOFLUORESCENTE
(ANTICUERPO MARCADO CON
UNA MOLCULA FLUORESCENTE)
.-FLUORESCENA Y RODAMINA
.-MICROSCOPIO PARA
FLUORESCENCIA
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MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
METODO DIRECTO
METODO INDIRECTO
METODO ABC
MTODO PAP
MTODO DE LSAB O LAB
MTODO DE CSA
MTODO DE POLMEROS
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MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
.-MTODO DIRECTO

.-EL MTODO INDIRECTO

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.-MTODO ABC

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MTODO DE LA
PEROXIDASA-ANTIPEROXIDASA
Este mtodo usa un anticuerpo primario,

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un anticuerpo secundario y un anticuerpo

producido en contra del conjugado con la
enzima peroxidasa (complejo PAP).
El anticuerpo secundario es producido en
una
especie
animal
diferente
del
anticuerpo primario, y del complejo
peroxidasa-antiperoxidasa;
El anticuerpo primario y el complejo
peroxidasa-antiperoxidasa provienen de la
misma especie animal. Consecuentemente,
el anticuerpo secundario acta como
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puente o anticuerpo eslabon.

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MTODO EL COMPLEJO
AVIDINA-BIOTINA
Esta

tcnica usa tres reactivos; un

anticuerpo primario, y un anticuerpo
secundario que esta qumicamente ligado a
la vitamina biotina, y un complejo de la
glicoprotena avidina que esta ligado a la
biotina y peroxidasa.
La avidina tiene la habilidad de ligarse con

cuatro molculas de biotina, en forma no

inmunolgica. Esta fuerte afinidad le da al
mtodo una excelente sensibilidad.
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GENERALES

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CASO CLINICO

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Linfoma Anaplsico
primario de piel CD30
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FACTORES DE
CALIDAD

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INMUNOFLUORESCENCIA
Consiste en conjugar colorantes fluorescentes
con anticuerpos, exponiendo despus este
conjugado a los anticuerpos o antgenos
correspondientes en cortes de tejidos, frotis
de microorganismos o de clulas, o cultivo
de tejidos en capa nica.
Cuando la reaccin es positiva y se expone a
la luz ultravioleta se producir fluorescencia
observable bajo el microscopio de
inmunofluorescencia.

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LA FLUORESCENCIA
Es una forma de luminiscencia entendindose sta ltima

como la emisin de la luz que se produce a partir de una

fuente de energa no trmica y bajo el efecto de una
excitacin.
La fluorescencia primaria o autofluorescencia es aquella
que presenta determinadas sustancias de forma espontnea
sin necesidad de ser modificadas; por ejemplo la lmina
elstica de las arterias muestra autofluorescencia en
determinadas condiciones).
En los tejidos que no poseen esta propiedad se puede
inducir
la
fluorescencia,
llamndola
fluorescencia
secundaria, esto se puede hacer mediante tincin
histoqumica con sustancias fluorescentes llamadas
fluorocromos; uniendo a anticuerpos dirigidos a antigenos
tisulares.
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FLUOROCROMOS.
Son

sustancias qumicas que tienen la

propiedad de absorber fotones de alta
energa procedente de la radiacin
ultravioleta o del espectro visible. Ello
provoca
una
redistribucin
de
los
electrones de las molculas fluorescentes,
puesta de manifiesto por la emisin de una
radiacin luminosa de longitud
de onda
Una ncleo de un
distinta aunque dentro dellinfocito
espectro
visible.
marcado
con

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diversos fluorocromos:
DAPI (azul, tie el ADN;
y secuencias
especficas de dos
pares de cromosomas,
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en verde y rojo (FISH).

MOS
Los

fluorocromos ms utilizados en las

tcnicas de inmunofluorescencia son:
Fluorescena: absorbe luz azul y emite
fluorescencia verde manzana.
Rodamina: absorbe luz verde y emite
fluorescencia roja anaranjada.

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FLUOROCROM
OS
Los fluorocromos pueden unirse de forma

covalente a los anticuerpos sin alterar la

capacidad de estos ltimos para unirse a
sus correspondientes antgenos, por ello las
fluorocromos
ligados
a
anticuerpos
especficos constituyen un medio til de
visualizar los lugares donde reproduce la
reaccin Antgeno Anticuerpo.

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VENTAJAS
DESVENTAJAS
Es una tcnica rpida

Baja sensibilidad

Es reproducible
son permanentes
Permite tinciones dobles

Las reacciones no

Es necesario
fotografiar las reacciones
Aplicable en la microscopia confocalpositivas Requiere microscopio
de fluorescencia
No se necesitan realizar cultivos
por personal muy

(caro)

Debe ser realizado

Se puede identificar microorganismos

Los resultados no son
especializado.
100% especficos especficos en un grupo mixto.
(como toda tcnica serolgica).

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A
R

I
C

S
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