EXTRACCION DE ADN DE MOSQUITO CON

UN METODO SIN FENOL

lvaro Bentez De Len
Meggy Galvn Gallego
Xavier Gonzlez Berrio
Luis Hernndez Mogrovejo
Yurany Herrera Vanegas
Katerine Perez Suarez
Biologa Molecular

INTRODUCCION:
La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho

de que los iones salinos son atrados hacia las cargas negativas
del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la
clula. Se empieza por lisar (romper) las clulas mediante un
detergente o un buffer de lisis, vacindose su contenido
molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el
ADN. En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un surtido
de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras
sustancias en menor proporcin.

OBJETIVOS:
*Extraer ADN de mosquito
*Conocer las pautas para la extraccin de ADN
con un mtodo sin fenol

METODOLOGIA:
Se realizo la diseccin de las patas alas y la cabeza de un mosquito.
Luego se coloco la zona abdominal, las patas y las alas en un tubo
eppendorf
de
1.5
ml,
despus
se
adicionaron 50 ul de buffer de lisis para homogenizar, se macere
bien,
hasta
que
la
muestra
quedo
homognea.
Luego se procedi a incubar a 65C por 30 minutos, y se
agregaron 15 ul de acetato de potasio y se mezclo suavemente por
inversin, despus se incubo en hielo durante 1 hora en y se
centrifugo a 13000 r. p. m. por 15 minutos, a 4C.

Posteriormente se paso el SND a un tubo nuevo. Y se adiciono

100 ul de etanol absoluto, y se mezclo suavemente por
inversin, se dejo a temperatura ambiente de 5 a 6 minutos, y
se descarto el SND, se lavo el botn con 100ul de etanol frio al
70%.
Luego se centrifugo a 13000 r. p. m. por 5 minutos, a 4C y se
descarto el SND, se dejo secar el pellet 20 min y se
resuspendio en 150 ul
de
buffer TE por
10
minutos
y
luego
se
almaceno
a
-20C.

ANALISIS Y RESULTADOS:
Se realizo con un mtodo sin fenol, ya que para utilizar el
mtodo se requiere utilizar solventes orgnicos esto
significa un riesgo para la salud humana y el ambiente.
Se utilizo buffer de lisis, cuya funcin es romper
la membrana celular y nuclear, permitiendo por ende la
liberacin del ADN.

Posteriormente se le adiciono acetato de potasio (AcK) el cual

precipita las protenas, y su eficiencia aumenta al incubarlo en
hielo.
El AcK es una sal neutra; y se aade para
disminuir la solubilidad de las protenas por incremento de la
fuerza inica del solvente, lo que se conoce como precipitacin
por salado.
El etanol se encarga de precipitar el ADN, pues este, es
soluble en agua pero insoluble en etanol, lo
cual origina que en presencia de ste se aglutine o "se precipite".
Al aglutinarse, el ADN forma partculas macroscpicas y se hace
visible.

el ADN fue resuspendido en buffer TE, el cual es una solucin

amortiguadora del pH, para proteger el ADN.
Por ltimo se almaceno a -200C para su conservacin.

CONCLUSION:
A la hora de extraer ADN de mosquito se debe seguir protocolos; el que
se utilizo principalmente se rega por las etapas: rompimiento de
membranas, precipitacin y purificacin, se concluye que:
*La solucin de lisis rompe las membranas celular y nuclear
*El acetato de potasio es una sal neutra que precipita protenas.
*El ADN se precipita en alcohol pues es insoluble en este, y se torna
visible en la interfaz alcohol-H2O.
*El buffer TE es una solucin amortiguadora que rehidrata el ADN y lo
protege.

BLIBLIOGRAFIA:
*ACEVEDO

B. F.E.; NAVARRO E., L.; CONSTANTINO C.,

L.M.; GIL P., Z.; BENAVIDES M., P. Mtodo rpido y
econmico para la extraccin de ADN genmico en la broca
del caf y su uso en PCR. Cenicaf 58(2): 134-141. 2007.
*BISSET, J.A.; RODRGUEZ, M.; DE ARMAS, Y. 2005.

Comparacin de 2 poblaciones de mosquitos Aedes

aegypti de Santiago de Cuba con diferente conducta
de reposo. Revista Cubana de Medicina Tropical 57(2):
143-150.