Cintica e

regulao
enzimtica
IST FML
2 Semestre
2007/2008

Trabalho realizado
por:
Miguel Amador
n58484
Joana Nunes n58497
Joo Marques n58513

Cintica Enzimtica
Estrutura
Enzimtica

Constituio em
Aminocidos
influencia
m

Mecanismos de Aco
Enzimtica
So difceis de definir
quantitativamente
Pelo
que

necessrio

Determinar constantes da reaco

catalisada

Cintica Enzimtica
Cintica
Enzimtica
Estudo da velocidade de uma reaco qumica que ocorre na
presena de um enzima

Permite elucidar sobre:

Os pormenores do mecanismo cataltico das enzimas
O papel das enzimas no metabolismo
Controle da actividade
Mecanismos de inibio

Velocidade vs.
Concentrao
A concentrao de substrato influencia a velocidade de
uma reaco

Estudo da relao entre a concentrao e a

velocidade:
. No inicio da reaco a quantidade de substrato
constante, j que a quantidade de substrato muito maior
do que a de enzima.
.Determina-se a velocidade inicial de reaco, V o ,para uma
determinada [S].
.Obtm-se valores para vrias concentraes de substrato,
mantendo constante a concentrao de enzima.
Assim podemos traar os valores num grfico, em que
exprimimos Vo como funo de [S]

Velocidade vs.
Concentrao

Dados:
Para [S] baixas, Vo aumenta quase linearmente
Para [S] maiores, Vo aumenta mais gradualmente
Para [S] mais elevadas, atinge-se uma velocidade mxima, V mx.

Equao de MichaelisMenten

Comportamento explicado pela formao do complexo

enzima-substrato ES
1. O enzima liga-se ao substrato reversivelmente formando
o complexo ES
Reaco
rpida

2. O complexo ES dissocia-se em enzima livre e produto

da reaco
Reaco
mais
lenta

.A reaco 2, mais lenta, limita a velocidade global da

reaco.
.A velocidade proporcional concentrao do
complexo
ES.
.A cada momento
o enzima existe na forma livre e no
complexo ES.
.A velocidade mxima (Vmx) da reaco ocorre quando todos os
enzimas esto associadas a molculas de substrato.

Deduo da Equao MichaelisMenten

A curva que representa a relao entre [S] e Vo tem forma
idntica para a maior parte dos enzimas. Esta curva pode ser
descrita algebricamente pela equao de Michaelis-Menten.
A equao de Michaelis-Menten

Hiptese: o passo limitante da velocidade das reaces enzimticas

a desassociao do complexo ES

Deduo da Equao MichaelisMenten

Presuposto: no h transformao de produto em substrato
Reaces de formao e desassociao do complexo ES:

Vo pode ser considerado como a velocidade com que ocorre a

quebra da ligao ES
No fcil determinar [ES]!
[ET] - concentrao total da
enzima
A concentrao de enzima livre , assim, [ET]-[ES]

Deduo da Equao MichaelisMenten

.Passo 1
Velocidade de formao de ES
Velocidade de degradao de ES
.Passo 2
[ES] constante, ou seja, a velocidade de degradao e formao de
ES so iguais.

.Passo 3

Deduo da Equao MichaelisMenten

.Passo 4
Obtemos Vo,
substituindo [ES]

A velocidade mxima quando [ES]=[ET]!

Equao de MichaelisMenten

Anlise da Equao MichaelisMenten

A equao de Michaelis-Menten, que nos d a relao
quantitativa entre a velocidade inicial V0, a velocidade mxima
Vmx e a quantidade inicial de substrato [S], todas relacionadas
pela constante de Michaelis Km
Km unidades de
concentrao
No caso de V0 ser exactamente metade de
Vmax:

Km corresponde concentrao de substrato para a qual V 0 metade da

velocidade mxima

Anlise da Equao MichaelisMenten

A equao de Michaelis-Menten muito til para determinar os valores
de Km e Vmx das reaces.

Os enzimas que exibem uma dependncia hiperblica de V0 em funo de [S]

diz-se que seguem a cintica de Michaelis-Menten.

Enzimas cujo mecanismo obedea s duas reaces anteriores podemos dizer

que o valor de Km est relacionado com a afinidade do enzima para o
substrato, e logo diferente de substrato para substrato e de enzima para
enzima.
O Vmx a velocidade mxima que a reaco pode alcanar, na situao
virtual em que todos os enzimas se encontram ligados ao substrato.

Equao de LineweaverBurk
Podemos transformar a equao de Michaelis-Menten,
invertendo-a:

Esta forma da equao de Michaelis-Menten chama-se equao de

Lineweaver-Burk

Equao de LineweaverBurk
Grfico de 1/[V ] em funo
0

de 1/[S]
Obtm-se uma
funo linear!

.Esta recta tem um declive Km/Vmx

.A interseco da recta no eixo 1/V0 corresponde ao valor 1/Vmx
.A interseco com o eixo 1/[S] corresponde a -1/Km
Permite uma determinao de Vmx
precisa!

Inibio enzimtica

Reversvel
Competitiva
Anti-Competitiva
Mista

Irreversvel

Inibio Reversvel
Competitiva

H competio pelo centro activo do enzi

A inibio pode ser contrariada adicionan

mais substracto ao meio

O Km aumenta e o Vmax no se altera

O inibidor estruturalmente semelhante

substracto

Inibio Reversvel
Competitiva

Inibio Reversvel
Competitiva

Inibio Reversvel
Competitiva

Inibio Reversvel AntiCompetitiva

O inibidor liga-se a um local especfico do

enzima (que no o centro activo)

O inibidor liga-se apenas ao complexo ES

formando o complexo ESI

O Km diminui e o Vmax diminui

Inibio Reversvel AntiCompetitiva

Inibio Reversvel AntiCompetitiva

Inibio Reversvel AntiCompetitiva

Inibio Reversvel Mista

O inibidor liga-se a um local especfico do

enzima (que no o centro activo)

O inibidor liga-se tanto ao enzima livre

como ao complexo ES

Vmax diminui

Km pode aumentar, diminuir ou manter-s

Inibio Reversvel Mista

Inibio Reversvel Mista

Inibio Reversvel Mista

Inibio Reversvel

Quando = , a Inibio Mista tem o nome de

Inibio No Competitiva

Inibio Irreversvel

O inibidor combina-se permanentemente

enzima de uma das seguintes formas:

Ligao covalente

Destruio de um grupo funcional essencial ao

funcionamento do enzima

Ligao no covalente particularmente estvel

Hexocinase

A hexocinase fosforila a glucose para glucose-6-

Reaco ocorre com consumo de ATP juntament

com um io Mg2+

O Km para a glucose 0.1mM, e a concentrao

glucose na clula 4mM
A hexocinase regulada alostericamente pelo
produto da sua prpria reaco

Hexocinase
A hexocinase uma enzima do tipo indutivo

Hexocinase

Fosforilao impede a sada de glucose da clu

Hexocinase
Reaco catalisada pela hexocinase

Hexocinase
No fgado tambm existe uma hexocinase, mas
menor afinidade para com a glucose
Esta s est activa quando a concentrao de
glucose no sangue muito elevada

Quando a concentrao de glucose no sangue

o fgado no compete com outros tecidos

No fgado, a glucose convertida em glicognio

Hexocinase

A fosforilao da glucose reversve

A converso da glucose-6-fosfato em
glucose ocorre no fgado durante a
gluconeognese.

Enzimas Reguladores

Enzimas que aumentam ou

diminuem a sua actividade em
reaco a determinados factores.
Fazem normalmente parte de
sequncias metablicas.
Permitem regular a actividade de toda
a sequncia metablica e possibilitam
clula ajustar-se s suas
necessidades energticas e
biomolculares.

Tipos de Moduladores
Mecanismos que regulam a actividade
enzimtica:
Variao da concentrao de
substrato
Variao de pH e temperatura
Inibio enzimtica

Modulao alostrica
Modulao
covalente

Modulao alostrica
Ocorre em enzimas que possuem um local de
modulao alostrico
Heterotropismo
(o modulador
diferente do
substrato)

Homotropismo
(o modulador
igual ao
substrato)

Modulador
alostrico
Negativo
Positivo
(inibe o
(activam o
enzima)
enzima)
A ligao entre o modulador e o enzima no-covalente e o local de
modulao especifico para cada modulador, no caso dos enzimas
heterotrpicos

Modulao alostrica

Modificaes
conformacionais na
estrutura espacial do
enzima

Indu
z:

Modifica a afinidade do
enzima para com os
seus substratos

Modulao alostrica

Um modelo muito comum

de regulao alostrica
a inibio por
retroalimentao, onde o
prprio produto da
reaco actua como
modulador da enzima que
a catalisa.

Cintica

No seguem a
cintica de MichaelisMenten
Comportamento
sigmide
[S] para a qual
V0=Vmx/2 no
corresponde ao Km

O comportamento sigmide explicado pela interaco entre as

subunidades das protenas, j que mudanas estruturais numa
subunidade so transferidas para as adjacentes, atravs de
interaces no covalentes entre elas.

Cintica
Enzimas homotrpicas pequenas variaes na
concentrao do modulador podem provocar grande
variaes na actividade do enzima.

Enzimas heterotrpicas dificil generalizar a

forma como se comportam . Apresentam uma
grande variabilidade no comportamento.

Cintica

Modulao covalente
Grupos adicionados ou retirados do enzima
atravs de modificaes covalentes
Fosforilao
Adenilao
Urinilao
ADPribosilao
Metilao

Fosforilao
Ligao de um grupo Fosforil a determinados resduos
de aminocidos
catalisada por quinases
um processo reversvel
Fosfatase remove os grupos fosforil
adicionados

Fosforilao
O grupo
fosforil:
Influencia a
polaridade
dos aminocidos

Permite o
estabelecimento
de pontes
hidrogeninicas

Importantes para a
estrutura e conformao
da molcula

Adenilao
adicionado um grupo Adenil
tirosina

Uridilao
adicionado um grupo uridil
tirosina

ADP-Ribosilao
acresentada uma ADP-Ribose, com incidncia nos
resduos Arginina, Glutamina, Cistena e Histidina
alterada (diftamida-a)

Metilao
adicionado um grupo metil em resduos de
glutamato

Zimognios
A regulao enzimtica pode passar ainda pela
existncia de um precursor, sem capacidade
cataltica, que, no caso das proteases, so
chamados zimognios.

Zimog
nio

Clivagem
proteoltica

Enzima
activa