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Regulacin de la actividad enzimtica, 1

Regulacin de la actividad enzimtica

v=

k+2e0 s

Km + s

Vmax s

Km + s

I. Sobre e0: Regulacin de la concentracin enzimtica


II. Sobre Km y k+2: Regulacin de la actividad intrnseca
de la enzima
1. Regulacin alostrica
2. Regulacin por modificacin covalente

Regulacin alostrica
Procesos a nivel celular; regulacin de ajuste fino
de la actividad enzimtica, a travs de efectos de
retroalimentacin (negativa o positiva)

Regulacin por modificacin covalente


Procesos a nivel supracelular (orgnico); regulacin
a gran escala de actividades enzimticas, a travs de
modificacin covalente de enzimas, provocadas por
seales (transduccin de seales)

Retroalimentacin negativa en vas metablicas, 1


Sntesis de Isoleucina
Thr

Treonina
desaminasa

-cetobutirato

Ile

El producto final de la ruta, Isoleucina, inhibe a la primera


enzima de la misma, Treonina desaminasa

Retroalimentacin negativa en vas metablicas


Sntesis de pirimidinas
ATP
+
Asp + CP

ATCasa

Carbamil aspartato

CTP

El producto final de la va, CTP (citidin trifosfato) inhibe a la


primera enzima de la ruta metablica, Aspartato transcarbamilasa
Al mismo tiempo, dicha enzima puede ser activada por ATP

Rutas metablicas controladas por retroalimentacin

Ruta
Glicolisis
Neoglucognesis
Bios. cs. Grasos
Bios. Colesterol
Bios. Purinas

Enzima

Inhibidor

Fosfofructokinasa
ATP
FBP fosfatasa
AMP
AcetilCoA carboxilasa
AcilCoA
HMGCoA reductasa
Colesterol
PRPP sintetasa
AMP,GMP,IMP

En el estudio de las enzimas controladas por realimentacin


negativa, se comprobaron una serie de regularidades en las mismas:
1. Primer paso de una ruta metablica o punto de ramificacin
2. Enzimas de naturaleza compleja: subunidades; la enzima puede
desensibilizarse a sus inhibidores por diversos mtodos.
3. Los inhibidores se comportan como competitivos (elevan el valor
de la Km aparente, pero sin embargo no son anlogos estructurales
del substrato
Estas ltimas caractersticas lleva al concepto de alosterismo:
Una accin sobre la actividad enzimtica que se desarrolla
fuera del Centro Activo (Jacob y Monod, 1960)

Centro
alostrico

Centro
activo

En ausencia de inhibidor,
el substrato se fija normalmente al centro activo

Inhibicin alostrica

Centro
alostrico

Centro
activo

Cuando el inhibidor ocupa


el centro alostrico, tiene
lugar un cambio conformacional
en el centro activo que impide la
fijacin del substrato

Otra caracterstica importante de las enzimas alostricas


es que presentan cinticas anmalas, normalmente
cinticas sigmoides:

v
La presencia de una
sigmoide implica
la existencia de
cooperatividad en la
fijacin del substrato
s

La cooperatividad (positiva) consiste en que la fijacin de una


molcula de substrato favorece la fijacin del siguiente, y as
hasta ocuparse toda la molcula

+
1

s s

+
2

s s
s

+
3

s s
s s

En trminos de Km veramos que Km1 > Km2 > Km3


Existe tambin cooperatividad negativa, cuando la fijacin de
una molcula de substrato dificulta la fijacin del siguiente.

El comportamiento cooperativo implica:

1. Que hay ms de un sitio de fijacin de substrato


por molcula de enzima (estr.cuaternaria)
2. Que hay interacciones entre los sitios de fijacin

Un sistema alostrico clsico es la Hemoglobina:

1. La fijacin de su substrato, O2, es de tipo sigmoide


2. La fijacin del substrato puede inhibirse por efectores
(H+, CO2, 2,3-BPG) que no actan sobre el Centro Activo (grupo hemo)
3. Las subunidades, por separado, presentan cintica
michaeliana en la fijacin de O2

Cinticas michaeliana y sigmoide:


Mioglobina y Hemoglobina
1.0

Y
Mioglobina

0.8

0.6

0.4

Hemoglobina
0.2

0.0
0

10

12

Efecto del pH sobre la saturacin de la hemoglobina


(Efecto Bohr)
100

pH 7.0

Saturacin de O2, %

80

pH 7.4
60

pH 6.6
40

20

0
0

20

40

60

PO2, mmHg

80

100

Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)


sobre la saturacin de la hemoglobina
100

Saturacin de O2, %

80

0
60

0.1 mM
1 mM

40

20

0
0

20

40

60

PO2, mmHg

80

100

Inhibidores y activadores
alostricos

1.0

(+ Activador)

0.8

V+
0.6

(sin efectores)

V0
0.4

(+ Inhibidor)
0.2

V-

0.0
0

10

12

Los efectores alostricos operan sobre el grado de


cooperatividad del sistema:
- Los inhibidores alostricos aumentan el grado de
cooperatividad
- Los activadores alostricos disminuyen el grado de
cooperatividad; a concentraciones elevadas de activador,
la cintica pasa a ser michaeliana, y deja de ser sigmoide.

Ecuacin de Hill
h

Ks
y
h
1 Ks
_

h > 1, cooperatividad positiva


h = 1, no hay cooperatividad
h < 1, cooperatividad negativa

Obsrvese que para h=1, esta ecuacin se reduce a una forma


normalizada de la ecuacin de Michaelis-Menten:

m x

k 2 x
s
K as
K m s

k 2 e 0
Km s 1 1
1 K as

s
Km

Modelo MWC

Forma R
s

s s

s s
s

s s
s s

i
i

i
Forma T

i
i

1
y
n
L 1
_

n 1

: Concentracin normalizada de substrato, s/Km


L: Constante alostrica: a mayor valor de L, mayor
grado de cooperatividad (positiva)
n: Nmero de sitios de fijacin de substrato