Ncleo

Noviembre-2014
Biologa Celular y Molecular
CSAR JER APAZA

TEMAS
Ncleo.
Nucleolo. Estructura y funcin.
Ciclo celular.

Ncleo
Organela limitada por la
envoltura nuclear.
Se encuentra en todas las
clulas eucariotas.
Aprox 10% vol celular.
Alberga casi todo el
material gentico de la
clula.
Contiene:
cidos nuclicos (DNA y
RNA)
protenas nucleares
(histonas y no histonas)

Centro de control.

Componentes estructurales

Ncleo
Funciones:
Lugar de
duplicacin del
DNA.
Lugar de control
gentico de las
actividades
celulares.
Lugar donde se
inicia el ensamblaje
de los ribosomas a
partir de RNA y
protenas
especficas.

Apoptosis

Replicacin
y reparacin

Transcripcin
Empalme

Envoltura
nuclear,
membrana externa
se continua con RE

Lamina nuclear es una malla de

protena filamentosa que reviste
cara nuclear de membrana interna

Complejo de poro
nuclear, penetra
envoltura nuclear en
puntos de fusin de
m interna y m
externa

Composicin:

Organizacin del ncleo celular (mamfero)

Envoltura nuclear
Lmina nuclear
Matriz nuclear
Cromosomas
Cuerpos subnucleares:
Nucleolo

Composicin:

Organizacin del ncleo celular (mamfero)

Envoltura nuclear
Lmina nuclear
Matriz nuclear
Cromosomas
Cuerpos subnucleares:
Nucleolo
Cuerpos de Cajal (CB) y
gemas
Dominios PIKA y PTF
Cuerpos PML
Manchas de empalme
(splicing speckles)
Manchas paralelas
(paraspeckles) o espacios
intercromatina
Lanctt

C et al. "Dynamic genome architecture in the nuclear

space:regulation of gene expression in three dimensions". Nature
Reviews Genetics (2007) :8; 2. 104-115 .

Envoltura nuclear
Membrana externa
nuclear
Membrana interna
nuclear
Espacio intermembrana
(10-50nm)
Poros nucleares
-100nm dimetro total
-9nm dimetro del canal
-3 000 a 4 000 poros
-Complejo de poro nuclear
(NPC)
8

Estructura del complejo de poro nuclear (NCP)

Complejo molecular de
simetra octogonal.
30 veces ms grande
que ribosoma.
Funcin: portero del
ncleo
media intercambio de
molculas entre
nucleoplasma y
citoplasma.

Filamentos
citoplsmic
os
Anillo
citoplsmic
o
Andamio
Canal
central

-Iones y metabolitos
pequeos difunden a
travs del NCP.
-Molculas con masa
>40kDa requieren
transporte activo
(carioferinas).

Anillo
nuclear

Canastilla
nuclear

Intercambio de molculas a travs del complejo de poro

nuclear

10

Intercambio de molculas a travs del complejo de poro

nuclear
Importacin de
Exportacin de
protenas:
protenas, tRNAs y
protenas cargo
subunidades
contienen secuencia
ribosomales:
especfica de aa seal
de localizacin nuclear
(NLS).
intervienen:

Ran (GDPGTP)
Factor de transporte nuclear
2 (NTF2)
Importina (se une a prot
cargo)
Importina (interacta con
nucleoporinas-FG)

contienen secuencia
especfica de aa
seal de exportacin
nuclear (NES).
Contienen NLS si ha de
retornar al ncleo.
Intervienen:
Ran (GDPGTP)
Factor de transporte
nuclear 2 (NTF2)
Exportina 1
Exportina-t (exporta
tRNAs)
11

IMPORTACIN A TRAVES DEL PORO

NUCLEAR
4
3
5
9

8
6

12

EXPORTACIN A TRAVES DEL PORO

NUCLEAR
7

4
5
3
13

Estructura del complejo de poro nuclear (NCP)

Funciones:
Media el intercambio de
molculas entre el
nucleoplasma y el
citoplasma.
Participa en la regulacin de
la arquitectura del genoma.
Participa en la regulacin de
la expresin gnica.

Raices M & D'Angelo M. Nuclear pore complex composition: a new regulator of tissue-specific and developmental
functions.
14
Nature Reviews Molecular Cell Biology 13, 687-699 (November 2012)

Heterocromatina
perifrica es excluida
desde el NCP
En mamferos, la
nucleoporina TPR se
requiere para el
establecimiento de las
zonas de exclusin de
heterocromatina
asociadas al poro nuclear
(+TPR).

15

NCP especializado en
transporte nuclear y
organizacin del
genoma

16

Lamina nuclear
Malla protica delgada (2050nm).
Cubre cara nuclear de MIN.
Se relaciona con protenas
integrales especficas de
MIN y con cromatina.
Indispensable en
mantenimiento de
integridad estructural de
envoltura nuclear.
Principales componentes:
-Lamina nuclear tipo A
-Lamina nuclear tipo B
17

Lamina nuclear:
Laminopatas
Enfermedades
humanas
asociadas con defectos en
protenas de envoltura nuclear.
-Distrofia muscular de EmeryDreifuss
-Cardiomiopata dilatada
-Lipodistrofia parcial familiar
-Distrofia muscular cinturaextremidades
-Charcot-Marie-Tooth tipo 2
-Displasia mandibulo-acral
-Progeria

Mutacin ms comn en gen

de lamina tipo A
(normalmente,mayora de cells
adultas la expresan).

18

Organizacin de la envoltura nuclear

Protenas de la
membrana interna
nuclear:
- Polipptidos
asociados a lamina
1 y 2 (LAP1 y LAP2).
- LBR
- Sun1
- Sun2
Protenas reguladoras
de genes:
- HP1
- BAF
Protenas de la
membrana externa
nuclear:
- Nesprin
ONM: membrana externa nuclear, INM: membrana interna nuclear , NCP:
complejo de poro nuclear, ER: retculo endoplasmico.

Stewart C et al. Blurring the boundary: the nuclear envelope extends its reach. Science (2007);
19
318:1408-1412.

Complejo LINC (unin de nucleoesqueleto con

citoesqueleto)
Integra componentes
nucleares, incluyendo
dominios de
cromatina, con
estructuras de la
superficie celular y
extracelulares (en
clulas de
vertebrados).
Formado por:
Protena nesprina
(m externa nuclear).

Protenas SUN

(m

interna nuclear).
Stewart C et al. Blurring the boundary: the nuclear envelope extends its reach. Science (2007);
318:1408-1412.
20

Nucleolo
rea dedicada a la
produccin de
ribosomas.
Se forma alrededor
de repeticiones de
DNA ribosomal
(rDNA), que codifica
RNA ribosomal.
NO est rodeado por
membrana.

21

Produccin de subunidades
ribosomales
1

1. Transcripcin de rRNA precursor

2. Empaquetamiento con protenas
ribosmicas citoplasmticas

3. Formacin de subunidades 40S y

60S

4. Salida de subunidades a travs

de poros nucleares

5. Ensamblaje ribosoma maduro

22

Cromatina, cromosoma
Cromatina: complejo fibroso formado por DNA y
protenas. (interfase)
Cromosoma: cromatina altamente condensada.
(divisin celular)

Cromatina
condensada
cerca de
envoltura
nuclear, se fija a
lamina nuclear

Cromatina difusa

23

Cromatina

Complejo fibroso
formado por DNA y
protenas.

24

Territorio de los
cromosomas
humanos en el
ncleo celular en
interfase

25

Cromatina
Eucromatina:
-DNA menos compacto
-porcin ms activa del genoma (genes
frecuentemente expresados).

Heterocromatina:
-DNA ms compacto.
-contiene DNA infrecuentemente transcrito.
-Tipos:
-Constitutiva: en estado condensado en toda clula y
en todo momento (DNA silencioso).

-Facultativa: cromatina especficamente inactivada

durante ciertas fases de la vida del organismo
(cromosoma X inactivo).
26

Cromosoma eucaritico
Cromosoma eucaritico = molcula nica DNA
ms protenas asociadas.
DNA extendido de un cromosoma = 3-4cm.
Cada clula diploide tiene 46 cromosomas (2m de
DNA aprox.)
Cuerpo humano tiene 25 000 millones de
kilmetros de DNA.

27

Fibra de cromatina ,
constiituida por DNA
y protenas

Cromosoma
humano

Cromosoma: cromatina
condensada, estructura
visible durante divisin
celular.

Centrmero, regin
de visible
estrechamiento

28

Clasificacin de los
cromosomas por la
localizacin del
centrmero:
Metacntrico:
centrmero central.
Submetacntrico:
centrmero cerca del
centro.
Acrocntrico:
centrmero cerca al
extremo.
Telocntrico:
centrmero al final de
las cromtides.
29

 En cromosomas no metacntricos:
Brazo corto es denominado brazo p (petit).
Brazo largo es denominado brazo q
30

El centrmero ocupa
posiciones caractersticas en
los cromosomas homlogos

Cariotipo humano: 23 pares de

cromosomas (incluyendo cromosomas
sexuales.

31

Estructura del cromosoma

Conjunto de DNA y protenas (cromatina = hebras
teidas):
DNA (cargada negativamente).
Protenas histnicas y no histnicas.

32

Estructura del cromosoma

Histonas:
Slo en eucariotas
Ricas en aminocidos bsicos (lisina y arginina)
cargadas positivamente.
Se sintetizan en la fase S del ciclo celular.

33

Histonas:
Responsables del
plegamiento y
empaquetamiento
del DNA
(nucleosoma).
Intervienen en
regulacin de
genes.
Tipos:
H1 (30 millones de
molculas)
H2A (60 millones de
molculas)
H2B

H3

H4

34

35

 Nucleosoma:
146-150 pares de bases (bp) de DNA
alrededor de octmero de histonas.
Primer nivel de compactacin del
genoma en eucariotas.
DNA unido a nucleosoma es menos
accesible a factores reguladores que
DNA libre de nucleosoma. (Skipper M. Eucariotic
genomes in complete control. Nat Rev Mol Cell Bio 2006 (7):709.

36

50 pares de bases

150 pares de bases

H2A

H2B

H3

H4 H4

H3

H2B

H1

H2A

Octmero de histona

H1
H1
H1

octmero
octmero
(80 pares
de base
por vuelta)

octmero
octmero
37

Ensamblaje de nucleosomas

N1
H4
H3
H3
H4

Paso 1

H3 H4

H4 H3

DNA
nucleoplasm

Paso 2
X

ina

H2A H2B

H2A H2B

H3 H4

X
DNA

H4 H3
RNA
H1

Paso 3
X

H2A H2B

H3 H4 H4 H3

H2B H2A

DNA

38

Estructura del cromosoma

Protenas asociadas al DNA no histnicas:
N1
Nucleoplasmina
Protena x
Protenas de esqueleto o armazn protico

armazn
protico
no histnico
39

Armazn protico no histnico

40

Solenoide

2do nivel de empaquetamiento

1er nivel de empaquetamiento

41

42

Empaquetamien
to

HISTONA H1 SE UNE A REGIONES

ESPECFICAS DEL NUCLEOSOMA

EMPAQUETAMIENTO DEL
NUCLEOSOMA ES MEDIADO
POR LA HISTONA H1

COLAS DE HISTONAS:
extremos NH y el extremo COOH (slo H2A)
2

intervienen en formacin de solenoide

43

Empaquetamiento del DNA en cromosoma mittico

Molcula de DNA se une a

histonas formando gran
nmero de nucleosomas.
Nucleosomas forman
cuentas en la cuerda de
DNA.
Grupos de nucleosomas se
enrollan en vueltas cada
vez ms grandes hasta
fibras de comatina
supercondensada y
superenrollada
Las vueltas se unen para
formar lazos.
Los lazos se enrollan mucho
ms, formando un
cromosoma

44

CICLO CELULAR

45

Ciclo celular
Secuencia regular y repetitiva
de crecimiento y divisin
celular.
Fases:
Interfase: proceso preparatorio

G1
S
G2
G0

Divisin celular:
Mitosis: divisin del ncleo.
Citocinesis:
divisin
citoplasma.

del
46

47

Interfase

Durante la interfase:
Duplica su DNA.
Sintetiza histonas y otras protenas asoc a DNA.
Produce reserva adecuada de organelas para 2
clulas hijas.
Ensambla estructuras necesarias para divisin
celular.
48

Interfase
G1:
Actividad
bioqumica intensa.
Clula aumenta de
tamao.
Aumento de
protenas, lpidos y
organelas.
Centrosomas
inician separacin y
duplicacin
49

Interfase
G1:
Duracin variable, depende
del tipo de clula.
Algunas clulas ingresan a:
G0:
quiescente ?
Ausencia de seales para
mitosis
Represin activa de genes
necesarios para mitosis.
Re-ingreso depende de
seales internas y
externas.

50

Interfase
S:
Replicacin de
DNA.
Sntesis de
histonas y otras
protenas
asociadas a DNA.

51

Interfase
G2:
Preparativos finales
para divisin celular.
Inicia condensacin
de cromosomas
recin duplicados.
Duplicacin completa
de centrosomas.
Inicio de ensamblaje
de huso mittico

52

Ciclo celular de
clula eucariota

Divisin nuclear
(cariocinesis) ocurre en
mitosis.
Divisin de citoplasma
(citocinesis) ocurre al final de la
fase M.

Clulas que no se dividen

usualmente quedan
retenidas en fase G1

DNA es replicado durante la fase S

(entre fases G1 y G2)

53

54

Regulacin del ciclo celular

55

Regulacin del ciclo celular

Influyen en crecimiento y divisin celular:
Falta de nutrientes.
Cambios en T y pH.
Contacto con clulas vecinas (inhibicin dependiente de la
densidad).

Hormonas
Factores de crecimiento
Interaccin clula-clula
Interaccin clula matriz extracelular.

La clula decide si va a dividirse o no.

56

Regulacin del ciclo celular

Puntos de control del ciclo celular:
Punto de restriccin (punto R)
Punto de control en fase S
Punto de control en la fase G2
Punto de control en la fase M

57

Regulacin del ciclo celular

Puntos de control del ciclo celular
Punto de restriccin (punto R):
En fase G1 tarda
A veces antes de punto R, pasan de G1 a G0
Pasado el punto R la clula est obligada a
seguir el resto de las fases del ciclo y dividirse.

58

Regulacin del ciclo celular

Puntos de control del ciclo celular
Punto de control en la fase S:
Asegura que duplicacin slo ocurra una vez
por ciclo.
Evala dao de DNA
fragmentos de Okasaki.

presencia

59

de

Regulacin del ciclo celular

Puntos de control del ciclo celular
Punto de control en la fase G2:
Clula evala si est lista para entrar en
mitosis.
Mecanismo de seguridad, slo entra en
mitosis si ha duplicado correctamente su
material gentico.
Evala dao de DNA.
60

Regulacin del ciclo celular

Puntos de control del ciclo celular
Punto de control en la fase M:
Durante metafase.
detecta fallas en unin de fibras del huso al
cinetocoro.

61

Regulacin del ciclo celular

Sistema de control de ciclo celular:
Ciclinas
Kinasas dependientes de ciclina (Cdk)
Complejo promotor de la
anafase/ciclosoma (APC/C)

62

63

Pone en marcha el mecanismo de la mitosis

Factor promotor de la fase M
ciclina
mittic
a

Control del
ciclo
celular

G2
Cdk

G1
S
ciclina D
P
La quinasa empieza a actuar

Pone en marcha el mecanismo de replicacin del DNA

64

Regulacin del ciclo celular

Kinasas dependientes de ciclina (Cdk):
Activan otras protenas por fosforilacin.
Se encuentran en niveles casi constantes
durante el ciclo celular.
En clulas eucariotas en todo el ciclo celular.
Tipos:
Cdk de G1 (Cdk4, Cdk6)
Cdk de Fase S (Cdk2)
Cdk de Fase M (Cdk1)
65

Regulacin del ciclo celular

Ciclinas:
Protenas activadoras que se unen a
quinasas y regulan su actividad.
Nivel vara a lo largo del ciclo celular.
Tipos:
Ciclinas de G1 (ciclina D)
Ciclinas de fase S (ciclinas E y A)
Ciclinas mitticas (ciclinas B y A).

66

Regulacin del ciclo celular

Ciclinas:
Ciclina mittica:
Se acumula gradualmente en fase G2.
Se une a quinasa formando el complejo Cdkciclina (FPM).
Fosforila protenas especficas e induce
cambios estructurales que inducen mitosis:
Condensacin de cromosomas (fosforilacin H1).
Desensamblado de la envoltura nuclear.
Organizacin de los microtbulos en el huso mittico.
67

Regulacin del ciclo celular

Complejo promotor de anafase/ciclosoma
(APC/C):
En ncleo de clulas en interfase y en todo el
citoplasma durante divisin celular.
Degrada germinina (protena que protege DNA recin
sintetizado de re-replicacin).

Sin APC/C las clulas:

no podran separar sus cromtidas hermanas en anafase.
no podran salir de la mitosis y dividirse en dos clulas
hijas.
No podran iniciar los pasos necesarios para la replicacin
del DNA en la fase S.
68

Ciclinas y kinasas
dependientes de
ciclinas (CDK)

69

Segregacin de cromosomas durante la mitosis

70

Ciclinas y kinasas dependientes de ciclina

en el ciclo celular

Cdk1 inicia
mitosis

Seales mitognicas
estimulan sntesis
de ciclina D
Supresores tumorales
pueden bloquear
actividad de ciclina D

Ciclina D, ciclina
E, Cdk4 y Cdk2
fosforilan RB,
inactivndola

Cdk2 estimula
replicacin de DNA

Punto R debe ser pasado

para que contine el ciclo
celular
71

Regulacin del ciclo celular en neurona post mittica

Protenas que
activan ciclo celular.
Protenas que
inhiben ciclo celular.
72

73