CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR

Clase 3. Transcripcin

Lic. Luis Snchez

Tecnlogo Medico en Laboratorio Clnico

Transcripcin
Es la transferencia de la informacin
gentica del ADN por medio de la
sntesis de ARN usando la cadena de
ADN como molde.

Similaridad entre transcripcion y

replicacion.
Ambos procesos usan ADN como
molde (template).
Los enlaces fosfodiester son
formados en ambos casos.
Ambas direcciones de la sintesis son
de 5a 3.

Diferencias entre replicacion y

transcripcion
replicacin

transcripcin

template

Cadena doble

Cadena simple

Sustrato

dNTP

NTP

primer

Si

No

Enzima

DNA polimerasa

RNA polimerasa

producto

dsDNA

ssRNA

Par de
bases

A-T, G-C

A-U, T-A, G-C

Seccin 1

Template y enzimas

 El genoma total del ADN necesita ser

replicado, pero solo pequeas
porciones son transcritas en
respuesta a los requerimientos de
desarrollo, necesidades fisiologicas
y cambios ambientales.
Las regiones del ADN que pueden
ser transcritos en ARN son llamados
genes estructurales.

1.1 Molde (Template)

La cadena molde es la cadena de la
cual el ARN sera transcrito. Tambien
se denomina la cadena antisense.
La cadena codante es la cadena
cuyas secuencias de bases
especifica la secuencia de
aminoacidos de la proteina
codificada. Por eso es llamada la
cadena sense.

La unidad de transcripcin

sense

antisense

5'

GCAGTACATGTC

3' coding

3'

CGTCATGTACAG

5'

strand
template
strand

3'

RNA

TRANSCRIPCION

5'

GCAGUACAUGUC

Transcripcion asimetrica
Solamente la cadena template es
usada para la transcripcion, mas no la
secuencia codante.
Ambas cadenas pueden ser usadas
como template, pero siempre de 53
La direccin de la transcripcin en
diferentes cadenas es opuesta.
Esta caracteristica es referida como
transcripcin asimtrica.

5'

3'

3'

5'

Organizacin de la informacin
codante en el genoma del adenovirus.

1.2 ARN Polimerasa

La ARN polimerasa-dependiente de ADN Es
la enzima responsable de la sntesis del
ARN.
La RNA polimerasa procariota es una
proteina de mltiples subunidades de
~480kD.
Los sistema eucariotas tienen 3 tipos de
ARN polimerasa, cada uno de los cuales
es una proteina de muchas subunidades y
responsible para la transcripcion de
diferentes ARNs.

Holoenzima
La holoenzima de la ARN-pol en E.coli
consiste de 5 subunidades diferentes :
2 .

holoenzyme
core enzyme

RNA-pol of E. Coli
subunidad

MW

Funcin

36512

Determina el ADN a ser

transcrito

150618

Cataliza la polimerizacin

155613

Une y abre el ADN

template

70263

Reconoce el promotor
para el inicio de la sintesis

 Rifampicina, es una droga para el

tratamiento de la TBC, puede unirse
especificamente a la subunidad del
ARN-pol y inhibie la sintesis de ARN.
Las ARN-pol de otros sistemas
procariotas son similares a las de E.
coli en estructura y funcin.

ARN pol de Eucariotas

ARN-pol

II

III

productos

45S rRNA

hnRNA

5S rRNA
tRNA
snRNA

Sensibilidad
a la
Amanitina

No

Alta

Moderada

Amanitina es un inhibidor especifico de la ARN-pol

1.3 Reconocimiento de origenes

Cada region transcriptable es llamada

operon (Procariotas).
Un operon incluye muchos genes
estructurales y secuencias regulatorias
upstream (o regiones regulatorias).
El promotor es la secuencia de ADN con
la que la ARN-pol puede unirse. Es el
punto clave para el control de la
transcripcin.

Promotor

regulatory
sequences
5'
3'

promotor
RNA-pol

structural gene
3'
5'

Promotor procariota
3'

5'
3'

-50

-40

-30

-20

-35
region
TTGACA
AACTGT

-10

-10
region
TATAAT
ATATTA
(Pribnow box)

Secuencia Consenso

10

start

5'

Secuencia Consenso

Frecuencia en 45 muestras

38 36 29
37 37 28

40 25 30
41 29 44

 La regin -35 de la secuencia

TTGACA es el sitio de
reconocimiento y el sitio de union de
la ARN pol.
La region -10 de TATAAT es la regin
en la cual se forma un complejo
estable de ADN y ARN-pol.

Seccin 2
Proceso de transcripcin

Conceptos generales
Tres fases: Iniciacin, elongacin y
terminacin.
La ARN-pol procariota puede unirse
al ADN directamente en el proceso
de transcripcin.
La ARN-pol eucariota requiere cofactores para unirse al ADN template
en el proceso de transcripcin.

2.1 Transcripcin de procariotas

Fase de iniciacin: ARN-pol reconoce
el inicio de la transcripcin.
Fase de elongacin: La cadena de ARN
crece continuamente.
Fasse de terminacin: La ARN-pol para
la sintesis y el ARN nasciente es
separado del ADN template.

Transcription bubble

a. Iniciacin
La ARN-pol reconocen la regin
TTGACA, y avanzan hasta la region
TATAAT, luego abre la doble helice.
La region abierta (expuesta) es de
alrededor de 171 bp.

 El primer transcrito es siempre una

purina trifosfato. GTP es ms comn
que ATP.
La estructura pppGpN-OH permanece
en el ARN transcrito hasta que la
sintesis de ARN se haya completado.
Las tres moleculas forman un
Complejo de inicio de transcripcion.
Complex:
RNA-pol ( 2) - DNA - pppGpN- OH 3

 No se necesitan primers para la

sinteisis del ARN.
La subunidad se separa del ARNpol una vez que el primer enlace
fosfodiester es formado.
El nucleo de la enzima se mueve a lo
largo del ADN template para entrar a
la fase de elongacin.

b. Elongacin
La liberacin de la subunidad causa el
cambio conformacional del nucleo de la
enzima. El nucleo de la enzima de desliza
sobre el template del AND hacia la
direccin 3
NTPs libres son adicionados
secuencialemnte al extremo 3 -OH de la
cadena de ARN naciente.

 La ARN-pol, el segmento de ADN de

~40nt y el ARN naciente forman un
complejo llamdo la burbuja de
transcripcion.
El segmento 3 del ARN naciente
hibridiza con el ADN template y su
extremo 5 se extiende fuera de la
burbuja de transcripcin al mismo
modo que la sintesis progresa.

RNA-pol of E. Coli

RNA-pol of E. Coli

c. Terminacin

El ARN-pol se suelta del complejo de

transcripcion.
La terminacion puede ocurrir de
manera dependiente de or de
manera independiente de
-independent

Terminacion dependiente del factor

El factor , un hexamero, es una

ATPasa y una helicasa.

Terminacin independiente de
La seal de terminacion es una
secuencia de 30-40 nucleotidos en
el transcrito de ARN, consistiendo
de muchas GC seguidas por unas
series de U.
La especificidad de la secuencia de
este ARN transcrito naciente
formara una estructura particular de
stem-loop para terminar la
transcricion.

DNA

rplL protein

5TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGGCACCAGCCTTTTT... 3
5TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT... 3

RNA
UUUU...
UUUU...

Ruptura por stem-loop

La estructura stem-loop altera la
conformacion de la ARN-pol,
permitiendo pausar el movimiento de
la enzima.
Luego se desetabiliza la union DNARNA hybrid, y causa que el complejo
se disocie.
Entre todos los emparejamientos de
bases, el mas inestable es rU:dA.

Simultaneous
transcriptions and
translation

2.2 Transcripcion en Eucariotas

a. Iniciacion
La iniciacion de la transcripcion
necesita promotores y regiones
regulatorias upstream
Los elementos que actuan en cis son
secuencias especificas en el ADN
template que regulan la transcripcion
de uno o mas genes.

Cis-acting element
cis-acting element
GCGC

CAAT

TATA

structural gene
exon

intron exon

start
TATA box

enhancer
GC box

CAAT box

(Hogness box)

TATA box

Factores de transcripcin
La ARN-pol no se une directamente
al promotor.
RNA-pol II se asocia con 6 factores
de trasncripcion, TFII A - TFII H.
Los factores que actuan en trans
son proteinas que reconocen y se
unen direcamente o indirectamente a
los elementos actuantes en cis y
regulan su actividad.

Factores de transcripcion para Eucariotas

Complejo de preiniciacin (PIC)

TBP del TFII D se une a TATA
TFII A y TFII B se unen a TFII D
El complejo TFII F-RNA-pol se une a
TFII B
TFII F y TFII E abren la cadena
dsDNA (helicasa y ATPasa)
TFII H: terminacion del PIC

Pre-initiation complex (PIC)

RNA pol II
TF II F
TF II
A

TBP TAF

TATA

TF II
B

TF II E

TF II H

DNA

Phosphorylation of RNA-pol
TF II H es la que fosforila el CTD de la
ARN-pol (CTD es el dominio C-terminal
de la ARN-pol)
Solamente la enzima fosforilada (pRNA-pol ) puede moverse hacia la zona
downstream, comenzando asi la fase de
elongacin.
La mayoria de los TFs se separan del
PIC durante la fase de elongacin.

b. Elongacin
Es similar a las procariotas
La transcripcion y la traduccion no
se realizan simultaneamente.
Porque?
Porque estan
separadas por una
membrana nuclear.

nucleosome
RNA-Pol

moving
direction

RNA-Pol

RNA-Pol

c. Terminacin
La secuencia de terminacin es
AATAAA seguida por repeticiones de
GT.
La terminacin esta muy relacionada
con las modificaciones posttranscripcionales.

Section 3
Modificaciones post
transcripcionales
Eucariotas

 El ARN naciente, conocido tambien

como transcripto primario, necesita
se modificado para ser tRNAs,
rRNAs, and mRNAs funcionales.
Las modificaciones son criticas en
los sistemas eucariotas.

3.1 Modificacion del hnRNA

Los transcritos primarios de mARN
tambien son llamados ARN heteronuclear
(hnRNA).
hnRNA son mas grandes que el mRNA
maduro por muchas veces.
Las modificaciones incluyen

Encapamiento (Capping ) en el extremo 5

Cola poli A en el extremo3
Splicing del mRNA (fraccionamiento)
Edicion del ARN

a. Capping at the 5 - end

OH

OH

O
N
H2N

H2C O P

5'

HN

5'

O P O P O CH2
O

NH

NH2

N
O

CH3

Pi

O
O

P O
O

m7GpppGp----

OH
AAAAA-OH 3'

 El proceso de encapamiento ocurre

en el nucleo.
Esta estructura del ARNm sera
reconocida por la proteina de union al
cap requerida para la traduccin.
El encapamiento ocurre antes del
splicing.

b. Cola de Poly-A en el extremo 3

El proceso del encolamiento no
depende del template. no hay
secuencias de poliT en el template
Este proceso tambien ocurre previo
al splicing.
Este proceso toma lugar en el nucleo.

c. mRNA splicing
mRNA

DNA

Los mRNAs son muchos ms cortos que el

ADN template.

Resumen de las modificaciones

Cortando al gen
Los genes estructurales estan compuestos
de regiones codantes y no codantes que
estan separadas de forma alternada.

7 700 bp

A~G no-coding region 1~7 coding region

Intrones

Exones

 Tambien hay modificaciones de ARNt y del

ARNr.
Ademas existen moleculas de ARNr que
tienen actividad enzimatica
Ribozimas

tarea