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UFMT UNIVERSIDADE FEDERAL DO MATO GROSSO Campus

Sinop
Programa de Ps-Graduao
Mestrado em Agronomia
Avaliao e Qualidade de Sementes

TESTE BIOQUMICO
Teste de Condutividade
Eltrica
Teste de Tetrazlio

Mestranda: Elizabeth Nunes Gonzaga


Prof. Coimbra
Maio/2014

INTRODUO

Semente

Testes

Conceito de Teste Bioqumico

Teste de Condutividade Eltrica

Teste de Tetrazlio

O QUE UMA SEMENTE


Pela Legislao Brasileira (Lei n 10711, de 5
de agosto de 2003)
Semente como o material de reproduo
vegetal de qualquer gnero, espcie ou
cultivar, proveniente de reproduo sexuada
ou assexuada, que tenha finalidade
especfica de semeadura.

Fonte: http://www.ecoarflorestal.org.br/imagens/proj_sementes_01.jpg

Pela definio botnica: semente o vulo


desenvolvido aps a fecundao, que contm
embrio, reservas nutritivas e tegumento.

Longevidade
Vigor

Vigor em semente remonta as evidencias de que os


indivduos se desenvolvem em taxas diferentes, o que leva
naturalmente, a classificao em fortes, fracos, etc
(MOREIRA 1994).

Vigor tem sido definido com a utilizao de termos com


integridade, adaptabilidade, resistncia, mas nenhum deles
cientificamente respeitvel ; a semente, no o ambiente,
deve receber as maiores atenes nas definies de vigor
(Heydecker, 1972).

Vigor pode ser definido como o potencial para a germinao


rpida e uniforme e um crescimento rpido de plntula, em
condies normais de campo (Ching, 1973).

TIPOS DE TESTES

Testes Fsicos
Testes Fisiolgicos
Testes Bioqumicos
Testes de Resistncia

TESTES PADRONIZADOS PELA ISTA e AOSA

TESTE BIOQUMICO
Avaliar alteraes bioqumicas
associadas ao vigor das sementes.
Testes de respirao
Teste ADAG
Teste de tetrazlio
Teste de condutividade eltrica
Teste de lixiviao de potssio
Teste dos aldedos volteis
Teste dos cidos graxos livres

TESTE DE CONDUTIVIDADE
ELTRICA
um teste para observar a qualidade fisiolgica das sementes

A organizao do sistema de membranas em sementes pode


refletir o seu estdio de deteriorao e, consequentemente, a
qualidade fisiolgica.

Sementes de Sibipiruna
(Caesalpinea Peltophoroides ).
Trs sementes normais,
mostrando o eixo embrionrio e
cotildones e uma semente
deteriorada.

Fonte: http://www.portalsaofrancisco.com.br/alfa/semente/semente.php

A medio da condutividade eltrica por


meio da quantidade de eletrlitos liberados
pela semente na gua de embebio;
Tem sido aplicada, de modo mais freqente,
em uma amostra de sementes representativa
de uma populao (mtodo massal).

DESVANTAGEM
Os resultados expressam a condutividade mdia de um
grupo de sementes, onde poucas sementes mortas
podem afetar a condutividade de um lote com muitas
sementes de alta qualidade.
Para minimizar esse problema, recomenda-se escolher
as sementes, excluindo-se as sementes danificadas.

METODOLOGIA
Quatro repeties de 50 sementes puras
Pesadas e, posteriormente, colocadas em copos plsticos
contendo 75mL de gua deionizada (h trabalhos com 25ml e
50ml)
Manter em germinador regulado a temperatura de 25C, durante
24 horas
Aps o perodo de embebio a condutividade eltrica deve ser
medida.
O resultado obtido no condutivmetro dever ser dividido pelo
peso da amostra, para que o resultado final seja expresso em mS
cm-1 g-1.

Uma poro significativa dos eletrlitos liberados pelas


sementes, durante a embebio representada por vrios
ons inorgnicos, dentre estes destacam-se o Na, K, Ca e
Mg.

O potssio (K), porm, tem merecido especial ateno por


se tratar do principal on em termos de quantidade
lixiviada.

Sementes envelhecidas lixiviam maiores quantidades de


potssio e essas quantidades tm sido utilizadas como um
indicador da integridade do sistema de membranas
celulares.

TESTE DE TETRAZLIO

O teste de tetrazlio (Tz) rpido e grande importncia para


a avaliao da qualidade das sementes, porque, alm da
viabilidade, o mesmo pode informar sobre o vigor e ainda
identificar diversos problemas que afetam o desempenho das
sementes (Marcus Filho, 2005).

A metodologia do teste vem sendo aperfeioada


constantemente, de modo que existem manuais que indicam
a execuo para vrias espcies, tais como a soja, milho,
trigo, feijo, algodo e amendoim.

Baseia-se na atividade das enzimas desidrogenases, como a


desidrogenase do cido mlico que catalizam a reao de reduo do sal
de tetrazlio (2,3,5 trifenil cloreto de tetrazlio), nas clulas vivas.

Por exemplo: nas sementes de soja imersa na soluo de tetrazlio, esta


difundida atravs dos tecidos, ocorrendo nas clulas vivas a reao de
reduo que resulta na formao de um composto vermelho, no-difusvel,
conhecido por formazan.

Se o sal de tetrazlio reduzido, formando o composto vermelho, houve


atividade respiratria nas mitocndrias, significando que h viabilidade
celular e do tecido.

Os tecidos no viveis no reagem e, conseqentemente, no so


coloridos.

A formao de um vermelho carmim claro indica tecido vigoroso e um


vermelho mais intenso para o tecido em deteriorao.

O Tz identifica, em soja, deteriorao por


umidade, danos mecnicos e de percevejos. A
interpretao do teste exige que as sementes
sejam avaliadas individualmente, quando o
exame das partes vitais, a localizao e
intensidade da colorao indicaro a condio
da semente.

METODOLOGIA

Sal de tetrazlio a 0,075% (75 ml e soluo estoque (1,0%) + 925 ml de gua

100 sementes ( 2 repeties com 50 sementes cada)

Sementes mantidas umedecidas em papel toalha, por um perodo de 16 horas, na


temperatura de + 25 C

Aps o pr-acondicionamento, as sementes so colocadas em bquer ou copinhos


de plsticos, sendo totalmente submersas na soluo de tetrazlio (0,075%)

As sementes devem permanecer assim a uma temperatura de 35C a 40C por


aproximadamente 150 a 180 minutos.

A soluo de tetrazlio sensvel luz, por isso a operao deve ser realizada no
escuro.

Alcanada a colorao adequada as sementes devem ser lavadas em gua e


posteriormente avaliadas, sendo no mximo 12 horas o tempo de armazenamento
em refrigerador.

Muitos outros mtodos, para a


determinao rpida da qualidade das
sementes, vm sendo pesquisados,
porm vrios ainda no mostraram
resultados consistentes, outros
apresentam dificuldades na
padronizao, alguns se mostram
promissores, mas devem ser mais
avaliados antes de sua recomendao

Classes de Qualidade

A identificao feita por 8 classes de qualidade, as quais


foram descritas por (FRANA NETO ET AL.,1988).

Classes de 1 a 3 identificam sementes viveis e vigorosas,

Classes de 4 a 5 identificam sementes viveis, porm no


vigorosas,

Classes de 6 a 8 englobam sementes que no germinam

A somatria dos percentuais das classes 1 a 3 nos d o ndice


de vigor e a somatria dos valores das classes de 1 a 5 nos d a
viabilidade do lote de semente.

Classificao pelo Vigor

O nvel de vigor pode ser interpretado de acordo com a


seguinte classificao (FRANA NETO, 1989):

Vigor muito alto: superior a 80%

Vigor alto: entre 70 a 79%

Vigor mdio: entre 50 a 69%

Vigor baixo: entre 30 a 49%

Vigor muito baixo: inferior a 29%

Bhering et al. (1996)

VIABILIDADE DAS SEMENTES DE


BRAQUIRIA PELO TESTE DE
TETRAZLIO

Objetivando estimar a viabilidade de sementes de


braquiria (Brachiaria brizantha) pelo teste de tetrazlio,
foram estudadas as condies para a hidratao e a
colorao das sementes.

Para tanto, utilizando oito lotes de sementes, foram


variados os perodos e as temperaturas (2, 4, e 6 horas a
35C e 40C; 6 e 16 horas a 30C) de hidratao e os
perodos e as temperaturas (1, 2 e 4 horas a 35C, 40C e
45C; 6 horas a 30C) de colorao, em soluo 0,075% de
tetrazlio.

As sementes foram classificadas em viveis e no viveis.

Revista Brasileira de Sementes, vol. 28, n 2, p.147-151,

Os resultados do teste de tetrazlio (Tabela 1) indicaram que a hidratao


das sementes, dos oito lotes de braquiria, por seis horas temperatura de
30C (6h a 30C/2h a 40C) apresentou semelhana estatstica com os
resultados de germinao de todos os lotes.
Esse perodo de hidratao das sementes est de acordo com uma das
recomendaes das Regras para Anlise de Sementes (Brasil, 1992), embora
as regras no especifiquem a temperatura a ser utilizada.

Com relao colorao das sementes, os resultados


indicaram (Tabela 2) que o perodo de uma hora a 45C (6h a
30C/1h a 45C), independentemente do lote considerado,
apresentou semelhana estatstica com os resultados de
germinao para os oito lotes.

FIGURA 1. Teste de tetrazlio: sementes


viveis (A) e no viveis (B) de braquiria

Concluso
O teste de tetrazlio, eficiente para
estimar a viabilidade de sementes de
Brachiaria brizantha, pode ser
conduzido com a hidratao das
sementes por seis horas a 30C
(sementes com 25% de gua) e com a
colorao por duas horas a 40C.

OBRIGADO!!!