DENISSE LETICIA RODRIGUEZ HERNANDEZ

MICROBIOLOGIA Y TAXONOMIA MICROBIANA

Medio Lowenstein Jensen Bas

Uso
Base utilizada para la preparacin de diferentes
medios destinados al aislamiento, cultivo y
diferenciacin de micobacterias, fundamentalmente
Mycobacterium tuberculosis.

Fundamento
Originalmente la frmula de Lowenstein de 1931
contena los indicadores rojo congo y verde de
malaquita. En 1932 Jensen modific el medio
eliminando el rojo congo e incrementando la
concentracin de verde de malaquita. Los nutrientes
de este medio basal, ms los aportados por el
agregado de la mezcla de huevos, constituyen un
rico soporte para el crecimiento de una gran
variedad de micobacterias excepto Mycobacterium
leprae.
El verde de malaquita inhibe el desarrollo de la flora
acompaante Gram positiva y de algunas bacterias
Gram negativas. Con el agregado de glicerina se
estimula
el
crecimiento
de
Mycobacterium
tuberculosis, aunque gran parte de Mycobacterium
bovis es inhibido. Si se adiciona cloruro de sodio al
5%, se pueden seleccionar micobacterias tolerantes
a la sal, como es el caso de Mycobacterium
smegmatis.

Instrucciones de preparacin
Suspender 37,3 g del polvo en 600 ml de agua
purificada y agregar 12 ml de glicerina. Calentar
agitando continuamente y hervir un minuto para
disolucin total. Distribuir en recipientes apropiados
y esterilizar en autoclave a 121C durante 15
minutos. Enfriar a 50C aproximadamente.
Mezclar aspticamente un litro de huevo ntegro,
evitando la formacin de burbujas de aire y agregar
al medio base ya esterilizado y a una temperatura
aproximada de 50 C. Mezclar el huevo y la base
hasta uniformar. Distribuir en tubos estriles y tapar
hermticamente. Colocar los mismos en posicin
inclinada y coagular a 85-90C durante 45 minutos.

Indicaciones sobre la recoleccin y el

tratamiento de las muestras
Siembra
Inocular aproximadamente 0,5 ml por tubo sobre la
superficie del medio de cultivo. Rotar los tubos para
lograr una distribucin homognea de la muestra.
Generalmente se siembran dos tubos de Lowenstein
Jensen y un tubo de Stonebrink Medio. Este ltimo
contiene piruvato de sodio y favorece el desarrollo
de cepas disgnicas como bacilos isoniazida
resistentes y sobre todo de Mycobacterium bovis
que es causal de algunos casos de enfermedades
humanas.

Realizar un estudio seriado con tres cultivos por

cada paciente para aumentar la posibilidad de aislar
al germen y en caso de tratarse de una
micobacteria
diferente
al
Mycobacterium
tuberculosis, el estudio seriado permite contar con
suficientes aislamientos para considerar a dicha
micobacteria como responsable de la enfermedad.
La muestra a analizar tiene que ser representativa,
de calidad y cantidad, es decir provenir de la
lesin a estudiar y en cantidad suficiente.
Esputo, hisopado larngeo, lavado gstrico, lavado
bronquial,
aspirado
bronquial,
lquido
cefalorraqudeo, lquido peritoneal, pericardio,
lquido sinovial, pus, orina

Incubacin
En aerobiosis, a 35-37C.

Interpretacin de los resultados

Observar los cultivos dos veces por semana y

registrar el tiempo de aparicin de las colonias.
Si no se observa desarrollo, incubar hasta 8
semanas.
Importante: incubar los tubos con las tapas flojas,
inclinados 5 aproximadamente en bandeja
adaptada con varilla de vidrio y extremos ajustados
con tubos de goma. Esta posicin evita que el
inculo contacte con la parte superior del tubo.
Controlar a las 72 horas los tubos sembrados. Si el
inculo ha sido absorbido, ajustar las tapas y
agrupar los tubos con igual identificacin.
Si an estn hmedos, incubar hasta que se sequen
y luego ajustar las tapas.

Cultivo
Negativo

Cultivo
Positivo

Observar las caractersticas morfolgicas y la

presencia o ausencia
de pigmento en las colonias. Tener en cuenta el
tiempo que
ha transcurrido desde la inoculacin hasta la
observacin de crecimiento.
Los cultivos positivos generalmente se observan
entre los 13 y 28 das de incubacin, dependiendo
del contenido de bacilos en las muestras
sembradas,
mientras
que
el
3%
de
las
micobacterias suele crecer a los 40 das de
incubacin.
La aparicin de colonias color crema, rugosas o
cremosas, amarillentas, es indicio de cultivo
positivo, el cual ser confirmado realizando la
coloracin de Ziehl-Neelsen a un extendido del
mismo, para determinar la presencia de bacilos
cido-alcohol resistentes (BAAR).
De la misma manera se proceder para los cultivos
contaminados y cultivos negativos (cuando no se
observen colonias).
La intensidad de positividad se informar segn las
siguientes caractersticas:
Colonias confluentes: positivo (xxx)
Colonias separadas: positivo (xx)
De 20 a 100 colonias: positivo (x)
Menos de 20 colonias: positivo. Informar el recuento
obtenido
No se observan colonias: negativo

Bibliografa
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