Mtodos Instrumentais de Anlise

2o Ano Bioqumica e Biotecnologia

(2o semestre 2014/15)

Maria Teresa S. R. Gomes

Programa
1. Introduo
1.1 O que faz o qumico analtico.
1.2 O processo analtico
1.3 Mtodos analticos
1.4 Escolha do mtodo analtico: definio do problema analtico,
1.5 Algarismos significativos
1.6 Erros nos resultados experimentais
1.7 Intervalo de confiana
1.8 Rejeio de valores anmalos
1.9 Mtodos absolutos e mtodos relativos
1.10 Calibrao: curva de calibrao, mtodo de adio de padro, mtodo do padro interno
1.11 Propagao de incertezas.
1.12 critrios numricos para seleccionar o mtodo analtico

Bibliografia

*1. Skoog, D. A.; Holler, F. J.; Nieman, T. A. Principles of Instrumental Analysis, Harcourt Brace
College Publishers: USA. 1998, cap.1
*2. Christian G. D. Analytical Chemistry, Johm Wiley & Sons: NY. 1994, cap.1, cap.2.
3. Miller, J. C.; Miller, J. N. Statistics for analytical chemistry, Ellis Horwood: Chichester. 1992.
Cap.5.
4. EURACHEM/CITAC Guide 4: Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement Third Edition
Editors S L R Ellison (LGC, UK) A Williams (UK), 2012

1.1 O que faz um Qumico Analtico

ar
Controlo
de
qualidade

gua

sad
e

comi
da

1.1 O que faz um qumico Analtico

O que ?
Onde?
Quanto?
Qual o arranjo, estrutura ou forma?

Presena de plvora nas

mos do assassino

Qual o teor de glucose

no sangue?

1.2 O processo Analtico

O que tem dentro?

1.2 O processo Analtico

1. Definio do problema
2. Selecionar o mtodo
2. Obteno de uma amostra representativa
3. Preparao da amostra para a anlise
4. Proceder s separaes qumicas necessrias
5. Fazer as medies
6.Fazer os clculos e apresentar o resultado

1.3 Mtodos Analticos

Clssicos
(qumica molhada)
Mtodos Analticos
Instrumentais
Prima o boto
mgico

1.3 Mtodos Analticos

Instrumentais

Clssicos
separao dos componentes por
precipitao,
extraco
ou
destilao, seguida de tratamento
com reagentes para identificao
dos produtos por meio das suas
cores, pontos de ebulio ou de
fuso,
solubilidade,
odores,
propriedades pticas...

possvel
separao
cromatogrfica, seguida
da
medio
da
condutividade,
potenciais de elctrodo,
absoro ou emisso de
luz, fluorescncia, razo
massa/carga...

Mtodos Instrumentais vs. Mtodos clssicos

ou

1.3 Mtodos Analticos

Mtodos Quantitativos

Clssicos

Instrumentais

gravimetria

espectroscopias

titulometria

potenciometria,
coulometria, amperometria
O que escolher?

microbalana de cristais
piezoelctricos
espectrometria de massa
mtodos radioqumicos

custo

facilidade

rapidez

sensibilidade
selectividade

preciso
exactido

1.3 Mtodos Analticos

1.4 Escolha do mtodo analtico

1. Definio do problema
Qual a exactido exigida?
Qual a quantidade de amostra
disponvel?
Qual a gama de concentraes do
analito?
Quais os componentes da amostra
que podero interferir?
Quais as propriedades fsicas e
qumicas da matriz?
Quantas amostras vo ser
analisadas?

sensibilidade
selectividade

Custo da instrumentao,
desenvolvimento do mtodo e
calibrao
Custo do operador / amostra

1.5 Como apresentar o resultado?

O chumbo txico. S bebo esta gua se me garantir
que a concentrao zero.
No posso.

Mas posso beber ou no?

A concentrao 15,7 0,3 g / L

E ento?

1.5 Algarismos significativos

Todos os algarismos certos + um incerto
230 Km

200 Km

232 Km

232,3 Km

2,05mL
2,050mL
2,0mL 2mL
Algarismos significativos: todos os
algarismos de um nmero a partir do
primeiro algarismo da esquerda que seja
diferente de zero

No.

9,2067 cm
0,92067 dm

92,067 mm
0,092067 m

1.5 Algarismos significativos

Adies e subtraes

Nmero de casas decimais

igual ao do termo que tiver
menos casas decimais

3,4+0,02+1,31=4,7
Multiplicaes e divises

Nmero de algarismos
significativos igual ao do
termo que tiver menos
algarismos significativos

24 0,452 / 100,0 = 0,11

12,68 841 / 132,6 0,5247 = 546,6

1.5 Algarismos significativos

Se o factor que tem menos algarismos significativos comear por
um algarismo superior a 5 conta-se esse algarismo como se fossem
dois
8,4 3,612 = 30,3
logaritmos

S indica a localizao do ponto

decimal. No significativo

log 2,00 10-3 = -2,699

pH=-log 2,0 10-3 = -(-3 + 0,30) = 2,70
Apesar de apenas conhecermos a concentrao com 2 dgitos o
pH tem 3

1.5 Algarismos significativos

Arredondamentos
Se o dgito que se segue ao
ltimo algarismo significativo
menor do que 5
Se o dgito que se segue ao
ltimo algarismo significativo
maior do que 5
Se o dgito que se segue ao
ltimo algarismo

9,43 = 9,4

9,47 = 9,5

8,65 = 8,6
8,75 = 8,8
8,55 = 8,6
ltimo par

1.5 Algarismos significativos

Arredondamentos
Exemplos concretos onde podem surgir dvidas:
Arredondar s dcimas:
6,6500 = 6,6

6,6501 = 6,7

Todos os dgitos a seguir ao 5

so zero. O ltimo dgito
arredonda para par

501>5 O ltimo algarismo

arredondado para cima

1.6 Erros nos dados experimentais

Analista 1
Analista 2
Analista 3

-2,0 -1,5 -1,0

-0,5

0,5

Analista 4

Erros indeterminados
ou aleatrios
Erros determinados
ou sistemticos

1,.0

Erro absoluto %

Erros grosseiros, ocorrem ocasionalmente e originam valores anmalos

(outliers)

1.6.1 Erros sistemticos

Erros nos instrumentos
Pipetas e bales volumtricos descalibrados

Erros no mtodo

Reaces lentas ou incompletas

Instabilidade dos reagentes
Reaces paralelas interferentes
contaminaes

Pequeno excesso:
erro constante

Anlise de brancos, material de referncia, mtodo independente,

variar o tamanho da amostra

1.6.1 Erros sistemticos

Erros associados s pessoas

J est azul
Gastei 16,04 mL (parece ... est muito alto)
melhor escrever 16,05, at porque deve
ser isto que d

conscincia de limitaes fsicas; cuidado e disciplina

1.6.2 Erros grosseiros

Desleixo
Preguia
Inpcia

No usar folhas soltas no laboratrio

No passar a limpo

Manter registos pormenorizados

No confiar na memria

1.6.3 Erros aleatrios

Flutuaes aleatrias volta da mdia

1.7 Intervalo de confiana

1) s uma boa aproximao de

Nvel de confiana
%

Para uma nica medio

Para N rplicas

50

0,67

68

1,00

80

1,29

90

1,64

95

1,96

96

2,00

99

2,58

99,7

3,00

99,9

3,29

1.7 Intervalo de confiana

2) desconhecido

Exemplo
Um qumico obteve os seguintes resultados, para o contedo em lcool de uma
amostra:
%C2H5OH = 0,084 0,089 e 0,079
Calcule o limite de confiana para a mdia a 95%, assumindo que:
a) No existe nenhum conhecimento adicional acerca da preciso do mtodo.

b) Com base em experincias anteriores , sabe-se que:

s =0,005% C2H5OH

Mais do que um conjunto de dados

Obtidos em dias diferentes
Obtidos com amostras diferentes, com ligeiras variaes na composio
Presumindo que o erro indeterminado o mesmo
para cada conjunto, poder-se-o combinar os dados
dos diferentes conjuntos
Desvio padro pesado (pooled)

1.8 Rejeio de valores anmalos (outliers)

reter resultados anmalos e afectar significativamente a mdia
Perigos
rejeitar resultados que pertencem ao conjunto e distorcer os dados

Testes de rejeio

Bom senso

Manter um registo laboratorial detalhado

Os testes estatsticos assumen que a distribuio da populao normal ou gaussiana

no se pode provar para pequenas amostras

xq

1.8 Rejeio de valores anmalos (outliers)

Q crtico

Teste Q

Qexp

xq

xn
w

No de observaes

96%

99%

0,98

0,99

0,85

0,93

0,73

0,82

0,64

0,74

0,59

0,68

0,54

0,63

xq xn
w

resultado suspeito
resultado mais prximo
intervalo

Rejeitar se Qexp > Qcrit

Confiana

Recomendaes para o tratamento de valores anmalos

1.Reexaminar cuidadosamente os dados para verificar se o valor pode ter sido afectado por um erro
grosseiro
2. Estimar a preciso que razovel esperar, se possvel, e certificar-se de que o resultado
verdadeiramente questionvel
3. Repetir a anlise se tiver tempo e amostras disponveis
4. Aplicar o teste Q
5. Se o teste estatstico indicar que o valor deve ser retido, considerar apresentar a mediana em vez
da mdia.
No caso de possuir apenas trs medies (vulgar nos trabalhos prticos das disciplinas
laboratoriais) a mediana d provavelmente uma melhor estimativa do valor verdadeiro do que a
mdia aps rejeio do resultado e a mediana no afectada pelo resultado anmalo.

1.9 Mtodos absolutos e mtodos relativos

Absolutos

Clculo da quantidade de analito, utilizando constantes

fundamentais que se conhecem com rigor.
Exemplo: anlise gravimtrica, onde se pesa um
derivado insolvel do analito, cuja composio bem
conhecida e se efectuam os clculos recorrendo s
massas atmicas
Exigem comparao com solues de concentrao
conhecida.

Relativos

Exemplo: anlise volumtrica, onde o analito reage

com uma estequiometria conhecida com um reagente
numa soluo de concentrao conhecida.
A maioria dos mtodos instrumentais exige callibrao

1.10 Calibrao
Sinal Instrumental

Sinal Instrumental no eixo dos yy

Concentrao no eixo dos xx

concentrao

Presume-se que todos os erros esto nos

valores de y e que as concentraes esto
isentas de erro

segundo pressuposto: os erros nas respostas instrumentais so independentes da

concentrao do analito

y=bx+a
Melhor recta de regresso de y em x

mtodo dos mnimos quadrados

minimiza o quadrado dos desvios, em y, dos pontos recta

1.10 Calibrao
Quo bem se ajustam os pontos a uma linha recta?

Clculo da concentrao
y0

Recta de calibrao y=bx+a

x0
Clculo do erro (estimativa) na concentrao

Melhora-se a preciso medindo

vrias vezes y0 (aumentando m)

O intervalo de confiana
pode ser melhorado
aumentando n

Na prtica, o resultados mais preciso obtm-se

quando o sinal est perto do centride da recta,
quando y0 se aproxima de y

1.10.1 Mtodo da adio de padro

Amostra complexa (efeito de matriz)

Adio de padro de
Eu(III) a gua da piscina e
gua da torneira

1.10.1 Mtodo da adio de padro

Volume total constante
Volume de amostra
Vx
Volume dos bales VT

padro
Cs
0

V2

V3

V4

V5

V6
Concentrao do analito proveniente
da amostra, em cada balo

C1 0

C2

CsV2
CV
C3 s 3
VT
VT

C4

C sV4
VT

C5

C sV5
VT

C6

C sV6
VT

Concentrao do
adicionado em cada
balo

1.10.1 Mtodo da adio de padro

y

Volume de amostra Vx
Volume dos bales VT

a/b
Concentrao do analito proveniente
da amostra, em cada balo

C1 C2 C3 C4 C5 C6
Concentrao do
adicionado em cada
balo

1.10.2 Mtodo do padro interno

padro interno:

deve produzir um sinal semelhante ao do analito em muitos

aspectos, mas suficientemente diferente para que o instrumento os distinga.
Deve ser adicionado em igual quantidade amostra, padres e branco, ou ser um
constituinte principal das amostras e padres, por forma a que a sua concentrao seja to
grande que se possa supor que no varia em todos os casos.
Pode compensar erros aleatrios e sistemticos. especialmente til em anlises onde a
quantidade de amostra ou a resposta do instrumento varia entre anlises, por razes
difceis de controlar.

analito

Ax
As
F
X S

padro interno

factor de resposta

1.11 Propagao de incertezas

Suponha que para dispensar 20 mL utiliza uma pipeta de 20 mL classe A (10.00 mL
0.02 mL). Calibrou essa pipeta no laboratrio fazendo 10 medies e obteve:
Number
1
2
3
4
5

Volume (mL)
10.002
9.993
9.984
9.996
9.989

Number
6
7
8
9
10

Volume (mL)
9.983
9.991
9.990
9.988
9.999

mdia 9.992 mL e desvio padro 0.006 mL.

Este volume 9.992 mL uma melhor estimativa do volume esperado que o dado
pelo fabricante e a calibrao permitiu-nos reduzir a incerteza de (0.02 mL) para
(0.006 ml).

1.11 Propagao de incertezas

Suponha que para dispensar 20 mL faz duas medies com uma pipeta de 20 mL classe
A. Se o volume e incerteza no volume da pipeta para uma nica medio for
(9.9220.006) mL, qual o volume e incerteza quando se usa duas vezes?
Se somarmos os volumes e as incertezas:
(9.992 mL + 9.992 mL) (0.006 mL + 0.006 mL) = (19.984 0.012) mL
fcil perceber que estamos a sobreestimar a incerteza, uma vez que estamos a assumir
que a incerta a maior possvel e que as duas tm o mesmo sentido. Outro extremo ser
supor que uma positiva e a outra negativa:
(9.992 mL + 9.992 mL) (0.006 mL - 0.006 mL) = (19.984 0.000) mL
O que constituir uma subestimativa da incerteza.
Como fazer?

1.11 Propagao de incertezas

Adio e subtraco
a bcd
sa2 sb2 sc2 sd2
sa sb2 sc2 sd2

Multiplicao e diviso
a bc / d
( sa2 ) rel ( sb2 ) rel ( sc2 ) rel ( sd2 ) rel
( sa ) rel ( sb2 ) rel ( sc2 ) rel ( sd2 ) rel

1.11 Propagao de incertezas

Voltemos ao problema anterior:
Suponha que para dispensar 20 mL faz duas medies com uma pipeta de 20 mL classe
A. Se o volume e incerteza no volume da pipeta para uma nica medio for
(9.9220.006) mL, qual o volume e incerteza quando se usa duas vezes?
1.

Usando os dados do fabricante: 10,00 mL 0,02 mL:

V = 10,00 mL + 10,00 mL = 20.00 mL

U R (0,02) 2 (0,02) 2 0,028mL

2. Usando os dados da calibrao da pipeta:
V = 9,992 mL + 9,992 mL = 19,984 mL

U R (0,006) 2 (0,006) 2 0,0085mL

Arredondando os valores, viria 20,00 mL 0,03 mL usando os valores dados da tolerncia
do material e 19,98 0,01 mL usando os dados da calibrao da pipeta.

1.11 Propagao de incertezas

Antes do clculo da incerteza combinada, todas as contribuies devem ser expressas
como desvios padro
1.Quando em presena de um intervalo de confiana (a a p%) divide-se o valor de a pelo
valor correspondente da distribuio normal

Exemplo: uma especificao declara que a leitura de uma balana est dentro
do intervalo 0,2 mg com 95% de confiana
Ento s=0,2/1,96=0,1
2. Se os limites a forem dados sem intervalo de confiana e houver motivos para pensar
que os valores extremos so provveis, em geral apropriado assumir uma distribuio
Retangular com um desvio padro a/3

Exemplo: um balo volumtrico de 10 mL certificado numa faixa de 0,2 ml.

Ento s=0,2/3=0,12 mL

1.11 Propagao de incertezas

3. Se os limites a forem dados sem intervalo de confiana e houver motivos para pensar
que os valores extremos so improvveis, em geral apropriado assumir uma distribuio
triangular com um desvio padro a/6

Exemplo: um balo volumtrico de 10 mL certificado numa faixa de 0,2 ml, mas

as verificaes internas de rotina mostraram que valores extremos so raros. Ento
s=0,2/6=0,08 mL

1.11 Clculo do intervalo de confiana

Esta fase corresponde, conforme equao abaixo, a multiplicar a incerteza padro combinada
pelo fator de abrangncia k, escolhido a fim de obter uma incerteza expandida.
A incerteza expandida fornece um intervalo que abrange uma grande frao da distribuio
de valores que podem razoavelmente ser atribudos ao resultado.
U = k.uc
U = incerteza expandida; k = factor de abrangncia; uc = incerteza combinada
Apresentao do resultado: R = q U
Para quase todos os fins se recomenda k=2 (95%)
Ateno que este valor pode ser insuficiente quando a incerteza combinada se baseia em
observaes estatsticas com num nmero pequeno de graus de liberdade (menos de seis).
Quando a incerteza combinada for dominada por uma nica contribuio com menos que
seis graus de liberdade, recomenda-se que k seja o valor de t-student para uma distribuio
bimodal para o nmero de graus de liberdade associado a essa contribuio e para o nvel de
confiana exigido (em geral 95%).
Por falta de tempo no iremos aprofundar este problema do clculo dos graus de liberdade.
Fica o alerta para o futuro.

1.11 Clculo do intervalo de confiana

Exerccio: O valor de magnsio da amostra diluda, obtido por emisso atmica foi calculado
por si. Chegou concluso que era 20,4 ppm com um s=0.125 (5 padres). Ora a amostra
original tinha sido diluda pipetando 5,00 mL com uma pipeta que o fabricante diz ter uma
tolerncia de 0,02 mL para um balo de 50,00 mL onde se l que exibe 0,06 mL.
Calcule a concentrao de magnsio na amostra original, no se esquecendo de indicar o
intervalo de confiana.
Nota: No caso das incertezas associadas aos Volumes medidos, vamos considerar apenas a
componente de incerteza associada s suas tolerncias, pois o Laboratrio trabalha num
ambiente climatizado, cuja oscilao/variao da temperatura em torno da de referncia
(normalmente de 20C) inferior ou igual a 3 C, verificando-se uma diferena entre a
temperatura ambiente e a temperatura de referncia das tolerncia (marcada nos materiais
volumtricos e normalmente de 20C) que no ultrapassa os 3C. Alm disso, no foi
considerada a Variabilidade associada a um conjunto de medies de volumes (n), pelo facto
desta componente de incerteza ser includa no grupo de componentes de preciso

1.11 Clculo do intervalo de confiana (Resoluo do exerccio)

Clculo da concentrao da amostra

C=20,4x50/5=204 ppm

1. Incertezas padro associadas aos volumes

Como a tolerncia do balo de 50 mL de 0,06 mL a incerteza padro que lhe est
associada, admitindo uma distribuio rectangular ser dada por : 0,06/3=0, 104mL
Como a tolerncia da pipeta de 5 mL de 0,02 mL a incerteza padro que lhe est
associada, admitindo uma distribuio rectangular ser dada por : 0,02/3=0, 035mL

2. Propagao das incertezas

( sa ) rel ( sb2 ) rel ( sc2 ) rel ( sd2 ) rel
0,104 2 0,035 2 0,1252
s 204

2
2
2
50
5
20,4
204 4,3264 10 6 4,9 10 5 3,7546 10 5 1,94

1.11 Clculo do intervalo de confiana (Resoluo do exerccio)

3. Intervalo de confiana
2 1,94 3,89
(204 4)ppm

1.12 Critrios numricos para seleccionar o mtodo analtico

Preciso
y

x
x

desvio padro absoluto

x

x xx
x xxxx x

Concentrao x
erros aleatrios

desvio padro relativo

desvio padro da mdia
Coeficiente de variao
Varincia

Exactido
xt

xi x
i 1

s
n 1
RSD

sm
CV

s
n

100%

s2

Proximidade ao valor real

erros sistemticos

preciso

Sensibilidade

declive da curva de calibrao

y mc yb

Sensibilidade analtica

IUPAC

depende da
concentrao

Limite de deteco: concentrao do analito que d origem a um sinal igual ao sinal do

branco yb mais trs vezes o desvio padro

y yb 3sb
Limite de quantificao

y yb 10 sb

Fizeram-se uma srie de medies de absorvncia de um branco durante uma anlise

espectrofotomtrica para determinar a pureza de comprimidos de aspirina. As leituras
foram: 0,002 0,000 0,008 0,006 e 0,003. Sabendo que uma soluo padro de aspirina de
1ppm d origem a uma leitura de absorvncia de 0,051, qual o limite de deteco?
x (0,002 0,000 0,008 0,006 0,003) / 5 0,004
N

(x x)
i 1

N 1

(0,002 0,004) 2 (0,000 0,004) 2 (0,008 0,004) 2 (0,006 0,004) 2 (0,003 0,004) 2

4,110 9
s
0,0032
4

LD=conc do analito que d um sinal 3 0,0032 0,0096 acima do branco

Padro 1 ppm

sinal relativo 0,051 0,004 0,047

LD 0,0096 1 / 0,047 0,2 ppm

A que corresponderia um sinal de

0,0096 0,004 0,014

A definio de Limite de Deteco arbitrria, e torna-se necessrio

defini-lo sempre que o mesmo apresentado

Nota: no mtodo dos mnimos quadrados cada ponto,

incluindo o branco, tem uma variao na direco dos
ys
que segue uma distribuio normal
substituir sb por syx

Em presena de uma regresso linear sb pode ser substitudo por

sy/x e e yb por a (ordenada na origem)

Gama dinmica: desde a a concentrao mais baixa que se pode

quantificar (limite de quantificao LOQ) at concentrao para a qual
a curva de de calibrao se afasta da linearidade (LOL)

LOL

LOQ

Teste selectivo ou reaco selectiva: pode ocorrer com outras substncias,

mas exibe um grau de preferncia pela substncia de interesse

Teste especfico ou reaco especfica: ocorre apenas com a substncia de

interesse

A
analito

y m A C A m B C B mC C C y b

interferentes

Coeficiente de selectividade de A em relaco a B

k A, B

mB

mA

y m A (C A k A, B C B k A,C CC ) yb

1.11 Validao do mtodo

padro interno:

deve produzir um sinal semelhante ao do analito em muitos

aspectos, mas suficientemente diferente para que o instrumento os distinga.
Deve ser adicionado em igual quantidade amostra, padres e branco, ou ser um
constituinte principal das amostras e padres, por forma a que a sua concentrao seja to
grande que se possa supor que no varia em todos os casos.
Pode compensar erros aleatrios e sistemticos. especialmente til em anlises onde a
quantidade de amostra ou a resposta do instrumento varia entre anlises, por razes
difceis de controlar.

analito

Ax
As
F
X S

padro interno

factor de resposta