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Colegio Nacional E. M. D.

Asuncin Escalada

Anlisis Microbiolgico del


Agua
Integrantes:

Sara Crdenas
Ftima Caete
Cristian Domnguez
Vanina Pertile
Braulio Vantrate
Bachillerato
Tcnico

en Qumica Industrial

Anlisis Microbiolgico del Agua


Se puede definir el anlisis microbiolgico como el
conjunto de operaciones encaminadas a
determinar los microorganismos presentes en una
muestra problema de AGUA.

El inters se centra en los microorganismos


patgenos, que son los
ENFERMEDAD
AGENTE
diferentes tipos de
ORIGEN BACATERIANO
tifoideas y
Salmonella typhi,
bacterias, virus, protozoos Fiebres
paratifoideas
Salmonella
Paratyphi A y B
y otros organismos, que
transmiten enfermedades Disentera bacilar Shigella
clera

Vibrio cholerae

Gastroenteritis
agudas y diarreas

Escherichia coli.
Campylobacter
Yersiniae
nterocolitica
Salmonella sp
Shigellas

Normalmente estos microbios llegan al agua en las


heces y otros restos orgnicos que producen las
personas infectadas

TOMA DE MUESTRAS PARA ANLISIS


MICROBIOLGICOS
Las muestras que se tomarn para el anlisis
deben
ser
representativas
para
poder
determinar as su calidad microbiolgica.
Su anlisis debe comenzar antes de que hayan
transcurrido 6 horas desde el momento de la
toma de muestras.

En circunstancias excepcionales, las


muestras pueden conservarse a una
temperatura de 4C durante un periodo
mximo de 24 hs antes de su anlisis.
Para su recogida debe utilizarse frascos
estriles y debe recolectarse cantidades
comprendidas entre 500 y 1000 ml.

Cuando se estime probable que el agua a analizar


contenga trazas de cloro, cloramina u ozono, ser
necesario neutralizar su efecto bactericida en el
momento del muestreo.
Se aadir una cantidad suficiente de tiosulfato sdico.
Para un volumen de 250 ml son suficientes 0,2 ml de
una solucin acuosa al 3% de tiosulfato sdico

Mtodos de anlisis:
1. Bacterias coliformes y
Escherichiacoli(E. coli):
2. Enterococos
3. Clostridium perfringens (incluidas las
esporas)
Otros tests complementarios:
Salmonelas
Estafilococos patgenos
Bacterifagos fecales
Enterovirus
Protozoos
Animlculos (gusanos-larvas),
Invertebrados bntico

CARACTERSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS: ENTEROCOCOS
FECALES
Los enterococos pueden considerarse como indicadores
de contaminacin fecal.
Algunos enterococos presentes en las aguas pueden
proceder de otros hbitats.
Se pueden detectar y cuantificar las especies:
Enterococcus faecalis, E. faecium,
E. duransy E. hirae. Como enterococos
intestinales se consideran aquellos
microorganismos capaces de reducir
el cloruro de trifeniltetrazolio(TTC) y
de hidrolizar la esculina.

Clostridium perfringens (incluidas esporas)


Los bacterias incluidas en el gnero Clostridium tienen
morfologa bacilar, son Gram positivas, anaerobias estrictas y
capaces de formar esporas.
La especie C. perfringens estn normalmente presente en
heces. Sus esporas son resistentes al calor, a los procesos
de desinfeccin y a los tratamientos de depuracin habituales
de las aguas (cloracin), por lo que su supervivencia en agua
es mayor.
La diferenciacin de C. perfringens de otras especies de
Clostridium, se basa en su capacidad de fermentar la
sacarosa con produccin de cido, en su incapacidad de
fermentar la celobiosa y en la produccin de fosfatasa cida.

Son organismos que slo pueden desarrollarse en


presencia de oxgeno atmosfrico, del que precisa
para la respiracin. La atmsfera puede ser area
o subacutica, ya que existe aire disuelto dentro de
las masas de agua (los peces son organismos
aerobios que respiran aire disuelto). La atmsfera
area contiene, al menos, 20 veces ms oxgeno
que la acutica, lo que condiciona
el diseo de los rganos respiratorios de
los animales de vida area o acutica.

BACTERIAS COLIFORMES
Los
coliformes
reagrupan
ciertas
especies
bacterianas
pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, de morfologa
bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa
negativa, no esporuladas y que fermentan la lactosa con produccin
de cido a 37Cen 24-48 horas
Del grupo coliformes forman parte
varios gneros:
Escherichia, Enterobacter, Klebsiella,
Citrobacter.
-Escherichia
coli
produce
dolor
abdominal, diarrea, nauseas, vmitos y
fiebre.
-Klebsiella
produce
enfermedades
respiratorias.
-Citrobacter produce alteraciones a
nivel del colon y a nivel intestinal

Anlisis Microbiolgico

DETERMINACIN
INSTRUMENTAL:

COLIFORMES FECALES
Mtodo de filtracin de membrana.
FUNDAMENTO: Las bacterias coliformes de origen fecal son
aquellas comprendidas en el grupo anterior (coliformes
totales), que adems son capaces de fermentar la lactosa,
con produccin de cido y de gas a 44C, en un tiempo
mximo de 24h.2.

MTODO: El mtodo consiste en la determinacin del n de


coliformes mediante filtracin de volmenes determinados del
agua a analizar por filtros de membrana e incubacin sobre
medio de lactosa enriquecido(agar de lactosa TTC con
heptadecilsulfato de sodio) y una temperatura de 44,5C(+/0,2C).3.
TOMA DE MUESTRA Y ALMACENAMIENTO: Se utiliza la
muestra de agua tomada para el anlisis de coliformes totales
que se encontraba guardada en frigorfico a 4C

4. PROCEDIMIENTO:

Colocar un filtro de membrana estril


sobre el soporte de filtracin.
Adaptar el embudo y conectar el
matraz a una bomba elctrica de vaco.
Filtrar 100 ml de muestra si se trata de
agua potable, y 0,1 y 1 ml si se trata de
aguas no potables, previamente
homogeneizadas. Lavar con unos 30 ml
de agua destilada.
Retirar el embudo. Mediante las pinzas
esterilizadas, transferir la membrana
filtrante sobre el medio de cultivo
contenido en una placa de Petri, de
modo que la superficie de filtracin
quede hacia arriba. Cerrar e invertir la
placa e incubar a 44C(+/-1C) durante
24h ( +/-2h ).

5. LECTURA E INTERPRETACION:
La lectura de los resultados requiere el examen de las
colonias aparecidas sobre la membrana y el examen de
los halos en la capa de agar subyacente a la membrana.

La fermentacin de la lactosa provoca la formacin de un


halo amarillo.

Se considera coliformes aquellas colonias que presentan


halo
amarillo,
halo
amarillo
con
centro
naranja(Escherichia y Citrobacter).
halo amarillo con centro rojo ladrillo(Klebsiella y
Enterobacter).
La densidad se estima como el total de coliformes totales
por 100ml, utilizando aquellos filtros de membrana que
tengan 20-80 colonias de coliformes y no ms de 200.

Anlisis Microbiolgico

DETERMINACIN
NO
INSTRUMENTAL:

Determinacin de vibrios choleroe


en aguas
El gnero de Vibrio se encuentra dentro de la
familia vibrionaceae junto con tres gneros ms,
Aeromonas, Photobacterium y Plesiomonas.
Las cepas de Vibrio chelerae que reaccionan con
el antisuero somtico 01, se denominan V.
cholerae 01, las restantes o variedades se
denominan no 01, siendo las primeras las
causantes de la enfermedad del clera.

Procedimiento:
Enriquecimiento directo
Una vez llegada a la muestra al laboratorio,
se coloca el volumen de muestreo (500ml)
en un recipiente conteniendo el mismo
volumen de agua peptonada alcalina (APA)
a PH 0.6 de borde concentracin. Incubar a
37C durante 6 a 8 hs.

Filtracin por membrana


La filtracin se realiza como esta descripta en la
diferencia 2.1 pero colocando un per filtro estril
sobre la membrana ara las muestras muy turbias.
Una vez filtradas se colocan todas las membranas
y los pre filtros de la muestra en un
recipiente con 100 ml de
APA (peptonada alcalina)
simple concentracin.
Incubar 6 a 8 hs a 37C.

Hisopo de Moore
Colocar el hisopo en frasco de boca ancha
con APA simple concentracin e incubar a
37C a 6 por 8 hs.
Aislamiento de Vibrio cholerae
Independientemente del mtodo de
procedimiento empleado, posteriormente a
la incubacin en APA, sembrar un ansado
de la pelcula superficial del agua
peptonada alcalina en placas de Petri con
medio TCBS, e incubar por 24hs a 37C.

Seleccionar colonias sospechosas es decir,


colonias amarillas (porque fermenta la
sacarosa), placas ligeramente convexas de
2mm de dimetro con centro opaco y
bordes translucidos.
No
todas
las
colonias
amarillas
desarrolladas en este medio son de V.
cholerae.
Replicar
las
colonias
seleccionadas
(aproximadamente
un
nmero de 8 a 10). En placas con medio
TSA e incubar a 24hs a 37C.

Conclusin:
Para detectar la presencia de estos microorganismos como
Bacterias coliformes y Escherichiacoli(E. coli), Enterococos,
Clostridium perfringens se deben realizar anlisis
microbiolgicos correspondientes para demostrarlos
microorganismos presentes en una muestra problema de
AGUA.
El agua que contenga pocos patgenos por litros puede
estar lo suficientemente contaminada para causar algunas
enfermedades.