LA CROMATOGRAFA DE GASES Y SUS

APLICACIONES
22 DE OCTUBRE DE 2007
INTRODUCCIN A LA CROMATOGRAFA DE GASES
Introduccin a la cromatografa.
Definicin
Principios bsicos
Cromatografa de Gases
Campo de aplicacin
Partes de un cromatgrafo de gases

INTRODUCCIN A LA CROMATOGRAFA
Definicin
Principios bsicos
Flujo de fase mvil

Definicin
Tcnica que permite
separar los componentes
de una muestra debido a
su diferente afinidad
entre dos fases
inmiscibles entre s, una
estacionaria (liquida o
slida) y otra mvil (gas
o lquida)

to

A B
t1

A
t2

La muestra se introduce en la fase mvil y es

transportada a lo largo de la columna que
contiene una fase estacionaria distribuida.
Las especies de la muestra experimentan
interacciones repetidas (repartos) entre la fase
mvil y la fase estacionaria.
Cuando ambas fases se han escogido de forma
adecuada, los componentes de la muestra se
separan gradualmente en bandas en la fase
mvil.
Los componentes abandonan la columna en
orden creciente de interaccin con la fase
estacionaria.
La amplia gama de seleccin de materiales
para la fase mvil y la estacionaria permite

Clasificacin de los mtodos

cromatogrficos
Cromatograf
a
Cromatografa de
gases

Cromatografa de
lquidos

Gas
Lquido

Gas
Slido

Lquido
Lquido

Lquido
Slido

Intercambi
o inico

GLC

GSC

LLC

LSC

IEC

Exclusin
EC

Casos particulares:
Intercambio Inico: Los componentes inicos de la muestra se
separan por el intercambio selectivo con contraiones de la fase
estacionaria
Exclusin: La fase estacionaria proporciona una clasificacin de

Comportamiento cromatogrfico de los

compuestos
El comportamiento cromatogrfico de un componente de una
muestra puede describirse de diversas formas:
VR Volumen de retencin

Volmen de fase mvil necesario para transportar la banda de

un componente desde el punto de inyeccin, a travs de la
columna, hasta el detector (en el mximo de pico del
componente)
tR tiempo de retencin

Tiempo necesario para que el componente, una vez inyectado

pase a travs de la columna y alcance el detector (en el
mximo de pico del componente)
k razn de reparto

Es una medida del tiempo que el componente est en la fase

estacionaria en relacin con el tiempo que est en la fase
mvil

Flujo de fase mvil

Seal

to

to

A B

t1

t1

t2

t2
A

tB

tB
A

tA

tA
tiempo

Seal
to

k razn de reparto
tR tM
VR - VM
k=
=
tM
VM
Donde tM es el tiempo de retencin de
un compuesto que no interaccionara con
la fase estacionaria y tR es el tiempo de
tB
retencin del compuesto de inters. Lo
mismo se puede expresar en relacin con
Los volmenes de retencin.
tA
tiempo

El objetivo de la cromatografa es doble:

Separar los distintos componentes de la
muestra
Identificar los componentes previamente
separados
Separar los distintos componentes de la
muestra
Selectividad y eficiencia

Buena selectividad
Eficiencia baja

Baja selectividad
Buena eficiencia

Buena selectividad
Buena eficiencia

Identificar los componentes previamente

separados
Seleccin de detectores adecuados que permitan el anlisis
cualitativo.

La seleccin de un detector est relacionada con la naturaleza de las

sustancias a determinar.
Los componentes de una muestra se identifican por su tiempo de
retencin
Se pueden emplear tcnicas que aporten una mayor informacin sobre la
naturaleza de los componentes: Acoplamiento con Espectrometra de
Masas

Anlisis Cuantitativos basados generalmente en la integracin

del rea bajo los picos.

Calibracin con patrones o estndares: Si se realizan determinaciones

cromatogrficas de muestras de concentracin conocida de alguno de sus
componentes, se puede realizar una recta de calibrado y posteriormente
el anlisis e integracin de una muestra de concentracin desconocida
del citado componente permitir la cuantifcacin del mismo.
Estndar interno: Permite que varen las condiciones de operacin entre
muestra y muestra.

Cromatografa de Gases
Es la tcnica a elegir para la separacin de compuestos
orgnicos e inorgnicos trmicamente estables y voltiles
Un cromatgrafo de gases consiste en el acoplamiento de
varios mdulos bsicos ensamblados para:
Proporcionar un flujo constante de gas portador
Permitir la introduccin de vapores de la muestra en la
corriente de gas que fluye
Contener la longitud apropiada de fase estacionaria
Mantener la columna a la temperatura apropiada (o la
secuencia del programa de temperatura)
Detectar los componentes de la muestra a medida que
eluyen de la columna
Proveer una seal legible proporcional en magnitud a la
cantidad de cada coomponente

Cromatografa de Gases

Cromatografa de Gases

Cromatografa de Gases

Sistema de inyeccin
El modo estndar es la
inyeccin directa, la
muestra es inyectada con
una jeringa a travs de un
septum de goma a un
alineador de vidrio donde
es vaporizada y
transportada por el gas al
interior de la columna.
El bloque de inyeccin, se
mantiene a una
temperatura tal que
permita convertir
prcticamente de forma
instantnea la muestra
lquida en un tapn de
vapor.
Existen jeringas especiales

Sistema de inyeccin
El modo de separacin ms
extendido en la actualidad
se basa en el empleo de
columnas capilares. Estas
columnas requieren muy
pequeos volmenes de
muestra.
Esto se logra empleando un
inyector que incorpora un
divisor de flujo (split).
Normalmente se introduce
en la columna un 1%
Cuando las sustancias a
separar se encuentran a
muy bajas concentraciones
se realiza inyeccin sin
divisor (splitless)

Sistema de inyeccin
Para el anlisis de
compuestos orgnicos
voltiles en muestras
slidas y lquidas, se han
desarrollado algunas
tcnicas auxiliares:
Espacio de cabeza (Head
space)
Purga y trampa (Purge and
trap)

Espacio de cabeza (Head space)

Se analiza la fase de vapor
en equilibrio
termodinmico con la
muestra en un sistema
cerrado.
Para ello se procura un
equilibrio estable,
mediante el control de la
temperatura del vial que
contiene la muestra.
T

equilibrio

Posteriormente, se arrastra
la fase vapor alAinterior
del
Gas portador
la columna
cromatgrafo.

Purga y trampa (Purge and trap)

Es aplicable solo a muestras lquidas.
Consiste en la continua renovacin
del gas en equilibrio con la muestra,
con lo que se consigue el
desplazamiento dinmico de los
compuestos voltiles de la muestra
lquida a la fase gaseosa.
Los vapores se arrastran a una
trampa donde quedan retenidos y se
van concentrando.
1) Gas portador
trampa

Finalizado el proceso se calienta la

trampa
y se arrastran los vapores al
2)
Gas portador
A la columna
trampa
interior del cromatgrafo.

T baja

T alta

Columnas cromatogrficas

Columnas capilares
Empacadas

Columnas

Columnas cromatogrficas empacadas

Se construyen con tubo de acero
inoxidable, niquel o vidrio.
Los dimetros interiores van de
1,6 a 9 mm.
La longitud suele ser inferior a
los 3 m.
Se rellenan de un material
adsorbente adecuado a las
sustancias que se quiere
separar.

Columnas cromatogrficas capilares

Se construyen con slice fundida.
Los dimetros interiores suelen ser de 200-250
m.
La longitud suele ser superior a los 20 m.
HayEmpacadas
dos tipos:con partculas slidas ocupando el total
del dimetro de la columna (micro-empacadas)
Tubulares abiertas, con trayectoria para el flujo
abierta y sin restriccin por el centro de la columna

Ejemplos de fases estacionarias en cromatografa

de gases

Separaciones por punto de ebullicin de

compuestos en un intervalo amplio de pesos
moleculares:
Escualano
Polidimetilsiloxano

Para hidrocarburos insaturados y otros

compuestos
polidifenildimetilsiloxano
policarboranometilcianoetilsilicn

Para compuestos nitrogenados

Horno

Las columnas cromatogrficas se enrollan, se sujetan

en un soporte y se introducen en el interior de un horno
El horno debe poderse calentar y enfriar rpidamente
La temperatura se debe poder programar para poder
trabajar en rgimen de gradiente
Muchas aplicaciones y mtodos cromatogrficos
requieren comenzar a temperaturas por debajo de la
ambiental

Horno

T1

T 2 > T1

CaractersticasSistemas
ideales de deteccin
un detector para
Cromatografa de Gases:
Sensibilidad alta y estable; tpicamente 10-8 g soluto/s
Bajo nivel de ruido
Respuesta lineal en un amplio rango dinmico
Tiempo de respuesta corto
Buena respuesta para toda clase de compuestos
orgnicos
Insensibilidad a las variaciones del flujo y la
temperatura
Estabilidad y robustez
Simplicidad en su operacin
Identificacin de compuestos positiva
Tcnica no destructiva
Pequeo volumen en prevencin del mezclado de
componentes

Sistemas de deteccin
Detector de ionizacin de llama (FID)

Este detector aade hidrgeno al

eluyente de la columna.
La mezcla pasa a travs del
conducto de un mechero, donde
mezcla con aire externo y luego
arde.
Cuando entra en la llama materia
ionizable del eluyente de la colum
Se quema y la corriente aumenta
notablemente.
Este detector es ideal para comp
oxidables.
No responde a los compuestos de
carbono totalmente oxidados, com
carbonilos o carboxilos y grupos

Sistemas de deteccin
Detector de conductividad trmica (TCD)

Utiliza un filamento caliente

colocado en el flujo de gas
emergente.
La cantidad de calor por
conduccin que pierde el
filamento hacia las paredes del
detector depende de la
conductividad trmica de la
fase gaseosa.
Es til para determinar la
presencia incluso de pequeas
cantidades de materiales
orgnicos que producen una
reduccin relativamente
grande en la conductividad

Sistemas de deteccin
Detector de captura de electrones (ECD)

El eluyente pasa entre dos

electrodos.
Uno de los electrodos tiene en
su superficie un radioistopo
que emite electrones de alta
energa conforme decae.
Los electrones bombardean el
gas portador (N2) formndose
un plasma que contiene iones
positivos, radicales y
electrones trmicos.
Se aplica una diferencia de
potencial de modo que se
recolectan los electrones
generados.
Los compuestos que absorben
electrones reaccionan con los
electrnes trmicos

Sistemas de deteccin
Los eluyentes son ionizados y
Detector de espectroscopa de masas (MS) fragmentados.
Los iones resultantes se
dirigen a travs de un
cuadrupolo y se ordenan en
funcin de su masa.
Ese detector permite obtener
el espectro de masas del
compuesto que ha eluido.
Podemos por tanto conocer,
adems del tiempo de
retencin el espectro de masas
del compuesto y contrastarlo
con bibliotecas de espectros.
Se trata por tanto de un
detector universal para la
mayora de los compuestos
conocidos.

Cromatografa Inica

Polaridad
Basndose en la polaridad de la fase
estacionaria y la fase mvil, se distinguen los
siguientes mtodos de cromatografa lquida:
Polaridad de la
fase estacionaria
Cromatografa en
fase normal

inico

Cromatografa en
fase reversa
polar

Cromatografa de pares inicos

Cromatografa inica

no polar

no polar

polar

inico

Polaridad de la
fase mvil

El intercambio inico como

mecanismo de separacin
La gran mayora de las separaciones por cromatografa
inica ocurren por intercambio inico sobre fases
estacionarias con grupos funcionales cargados. Los
correspondientes contraiones del eluyente se localizan en
la vecindad de los grupos funcionales y se intercambian
con iones del analito de la misma carga en la fase mvil.
Para cada ion el proceso de intercambio se caracteriza por
un equilibrio de intercambio inico correspondiente, que
determina la distribucin del analito (M + A-) entre la fase
mvil y la fase estacionaria:

A E

A E

KA

f.e.

f.m.

f.m.
f.e.

E f.e. A f.m. E f.m. A f.e.

A- es el ion del analito
E- es el ion del eluyente (contraion)

El intercambio inico como

mecanismo de separacin
El grupo ms importante de intercambiadores inicos son los
basados en resinas sintticas hechas de un copolmero de
estireno y divinilbenceno.
Los intercambiadores catinicos se obtienen por posterior
sulfonacin de esta resina de estireno-divinilbenceno. Los
intercambiadores aninicos por posterior clorometilacin seguida
de aminacin.

Intercambiador catinico

Intercambiador aninico

Cromatografa inica
Tambin llamada cromatografa de intercambio inico,
determina iones inorgnicos y orgnicos, normalmente por
conductividad.
Se utilizan dos tipos de tcnicas en la prctica:
Supresin qumica, en la que la conductividad de fondo se
suprime tanto qumica como electrnicamente. Normalmente
utilizada en aniones.
Supresin electrnica, en la que se emplean eluyentes con
sales de cidos orgnicos en baja concentracin sobre
intercambiadores de iones de muy baja capacidad para
alcanzar una conductividad de fondo relativamente baja, que
puede ser suprimida directamente por medios electrnicos.

Supresin qumica
Se basa en el uso de sales de cidos dbilmente disociables (NaHCO 3, por
ejemplo) como eluyentes. Estos eluyentes se pueden eliminar en gran
medida mediante una reaccin post-columna de acuerdo con el siguiente
proceso

El cido carbnico formado como resultado del intercambio catinico se

disocia muy dbilmente, por lo que aporta poca conductividad.
Por otro lado, los iones de la muestra sufren la reaccin correspondiente. Por
ejemplo, para el cloruro

El proceso de supresin convierte el NaCl al correspondiente cido fuerte, el

cual tiene una mayor conductividad que la sal original. Cuanto menor fuerza
tenga el cido producido, el incremento en sensibilidad debido a la
supresin qumica ser menor.

Supresin qumica

Eluyente - bomba

Inyeccin de
muestras

Separacin

Supresin

Deteccin

Sin supresin qumica

Eluyente: cido ftlico

Anione
s

Con supresin qumica

Eluyente: HCO3-/CO3-

Cationes sin supresin

qumica

Eluyente - bomba

Inyeccin de
muestras

Separacin

Supresin

Deteccin

Deteccin por conductividad

La conductividad es una medida de la capacidad que tienen las
disoluciones de electrolitos para transportar la corriente por
migracin inica en un campo elctrico aplicado entre dos
electrodos.
La conductividad () es directamente proporcional a la
concentracin para disoluciones diluidas, siguiendo la relacin

c(eq)
1000

Donde
es la conductividad equivalente en Scm 2mol-1
c(eq) es la concentracin equivalente en eq/l o normalidad

Eluyente - bomba

Inyeccin de
muestras

Separacin

Derivatizacin

Deteccin

Deteccin
UV/VIS
Directa: Se usa en la determinacin de iones que absorben
fuertemente en el rango UV (nitrito, nitrato y aniones
orgnicos, p.e.) en presencia de altas concentraciones de
iones inorgnicos (cloruro, fosfato y sulfato, p.e.) que tienen
escasa o nula absorcin UV.
Indirecta: Se utiliza con eluyentes de alta absorcin UV
(ftalato, p.e.). De este modo, los iones con menor actividad UV
que el eluyente darn picos negativos y los iones con mayor
actividad UV que el eluyente darn picos positivos.
Con reaccin post-columna: Usada en la deteccin de metales
de transicin (Fe, Ni, Cu, Mn y Zn, p.e.)

Eluyente - bomba

Inyeccin de
muestras

Separacin

Deteccin

Deteccin electroqumica
Se utiliza ocasionalmente. Requiere que los iones a determinar sean
susceptibles de oxidarse o reducirse. Entre ellos hay muchos
compuestos orgnicos (azcares y aminas, p.e.), metales de
transicin y aniones como nitrito, nitrato, haluros, sulfuro, cianuro,
sulfito y sulfato.
Hay cuatro tcnicas diferentes :
Amperometra: Medida de la corriente a potencial constante
Culombimetra: Medida de la corriente a potencial constante con
100% de conversin del analito
Voltametra: Medida de la corriente frente al potencial en un rango
definido de potencial
Amperometra de pulsos: Medida de la corriente a pulsos de
potencial constante

Estado, cantidad y preparacin de

muestras
Los lquidos que sean acuosos o miscibles en el agua se
pueden analizar directamente. Los lquidos, slidos y gases
inmiscibles en agua deben ser extrados o disueltos en
disolucin acuosa antes del anlisis.
El volumen tpico a analizar es de 5 a 200 l, aunque se
puede partir de volmenes tan grandes como 100 ml,
utilizando tcnicas de preconcentracin cromatogrficas
cuando se requiera una mayor sensibilidad.
Dilucin y filtracin son los procedimientos ms comunes
de preparacin de muestras. Se requiere extraccin para
muestras no acuosas o preconcentracin para muestras
diluidas. La necesidad de derivatizacin precolumna es
rara.

Tcnicas complementarias
Absorcin atmica, emisin atmica y plasma
de acoplamiento inductivo. Se usan para
determinar la cantidad total de un metal en vez
de una cierta forma inica.