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EN ENZIMAS LIBRES E
INMOVILIZADAS
M. Sc. Guillermo Linares Lujn
Reacciones Catalticas
Catalizador: Sustancia que afecta la
velocidad de reaccin sin alterar el
equilibrio y sin experimentar ningn cambio
Enzimas
Complejos Enzimticos
rganos de Clulas
Clulas Enteras (viables y no viables)
Reacciones Homogneas
Cuando la Temperatura y todas las
Concentraciones del sistema son uniformes.
Fermentaciones industriales
Reacciones Enzimticas en recipientes
mezclados.
c C + d D
Sustancias qumicas
coeficientes estequiometricos
C D
K
A e B
c
e
d
e
b
e
Concentraciones de
Equilibrio
G cG dG G bG
o
rx
o
C
o
D
o
A
o
B
Por lo tanto:
La termodinamica de equilibrio tiene una
aplicacin limitada a las Reacciones
enzimticas y Celulares.
b. Cintica de la Reaccin
1. Rendimiento de la Reaccin:
Cantidad de producto formado o acumulado
por cantidad de reactante suministrado o
consumido
C 6 H12O 6 6O 2 6CO 2 6H 2 O
C 6 H12O 6 2C 2 H 5OH 2CO 2
masa o moles de
Re n dim iento Teorico
producto formado
masa o moles de
reac tan te consumido
masa o moles de
producto presente
masa o moles de
reac tan te consumido
2. Velocidad de la Reaccin.
A + bB cC + dD
Velocidad de cambio de masa del sistema:
dM __ __
M
i Mo R G R C
dt caudal msico
Velocidad msica
Para el Compuesto A :
__
dM A __
M Ai M Ao R AC
dt
dM A
RA
dt
__
__
M Ai M Ao 0
RA : Velocidad de
reaccin con respecto a A
Por analoga
dM B
RB
dt
dM C
RC
dt
Velocidad de produccin
Pr oductividad
dM D
RD
dt
s
s
dt
- Velocidad Volumtrica:
R A 1 dM A
rA
V
V dt
dC A kg
rA
3
m .s
dt
- Velocidad Especfica:
1 dM A
1 dM A
rA
rA
X dt
E dt
kg
kg
1
rA :
kg cel . s
kg enz . s
Cinetica de la Reaccin
Relacin existente entre la velocidad de
reaccin y las condiciones que afectan
dicha velocidad como son: la concentracin
de reactantes y la temperatura.
Se describen por expresiones cinticas.
aA + bB cC +dD
La reaccin es de orden a con respecto al
componente A y de orden b con respecto al
componente B.
El orden global de la reaccin es (a+b)
rA k.C .C
a
A
b
B
k A.e
Ea
RT
Donde:
k : constante de velocidad
A: Constante de Arrhenius, factor de frecuencia o
factor preexponencial.
Ea: Energa de Activacin
R: Constante de los gases ideales
T: Temperatura Absoluta
Calculo de la velocidad de
Reaccin
Tiempo
(minutos)
0
1
2
3
4
5
6
8
10
Concentracin de
oxigeno (CA, ppm)
8.00
7.55
7.22
6.96
6.76
6.61
6.49
6.33
6.25
dC A
rA
dt
Pendiente de una curva
suavizada dibujada a
travs de los datos
8.00
7.55
7.22
6.96
6.76
6.61
6.49
6.33
6.25
CA
-0.45
-0.33
-0.26
-0.20
-0.15
-0.12
-0.16
-0.08
1
1
1
1
1
1
2
2
CA/ t dCA/ dt
-0.45
-0.33
-0.26
-0.20
-0.15
-0.12
-0.08
-0.04
-0.59
-0.38
-0.29
-0.23
-0.18
-0.14
-0.11
-0.06
-0.02
Inconveniente:
Dificultad de
aplicacin si los datos
presentan dispersin
2. Mtodo de la pendiente en el
punto medio
Tiempo Concentracin
(min)
de oxigeno
(CA, ppm)
0
1
2
3
4
5
6
8
10
8.00
7.55
7.22
6.96
6.76
6.61
6.49
6.33
6.25
1
1
1
1
1
1
1
2
2
A t
C A t dCA/ dt
--0.78
-0.59
-0.46
-0.35
-0.27
-0.28
-0.24
--
--0.39
-0.30
-0.23
-0.18
-0.14
-0.09
-0.06
--
DATOS EXPERIMENTALES
C A
t
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
t
2
rA = K0 (kmol/m3.s)
rA: Es la velocidad volumtrica con respecto a A
K0: Constante de velocidad de orden cero.
Esta velocidad depende de la cantidad de
catalizador presente
k0 = k0.e
k0 = k0.X
dC A
rA
dC A rA .dt
dt
CA
CA 0
dC A k 0 .dt
0
C A C A 0 k 0 .t
C A C A 0 k 0 .t
rA k1.C A
dC A
rA
dC A rA .dt
dt
dC A k1.C A .dt
t
dC A
CA 0 C A 0 k1.dt
CA
Vmax .C A
rA
k m CA
rA: Velocidad volumetrica de reaccin
CA: Concentracin de Reactante A
Vmax: Velocidad Mxima a una concentracin infinita de A
km: Constante de Michaelis Menten para el reactivo A
Vmax .S
V
Km S
Para una reaccin enzimtica:
E S ES E P
K 1 ; K1
Vmax = K2. a
K2
max
es un coeficiente de velocidad de
primer orden para la reaccin.
Representacin de Michaelis
Menten
Generalmente pobre
.
V Vmax S Vmax
Utiliza un proceso de linealizacin que distorsiona
el error experimental en V, por que los errores se
ven aumentados a concentraciones bajas de sustrato
Suposiciones del modelo
de Minimos Cuadrados
1/V
300
200
100
0
0
0.02
0.04
0.06
1/S
0.08
0.1
.
V Vmax S Vmax
Por:
Vmax
V
km
Se ordena y se obtiene:
V Vmax V
S
km km
Distorsiona los errores existentes en los datos originales
V/S
0.00025
y = -0.0464x + 0.0005
2
R = 0.9108
0.0002
0.00015
0.0001
0.00005
0
0.00000
0.00200
0.00400
0.00600
V
0.00800
0.01000
Representacin de Langmuir
Multipicando la ecuacin:
1
km 1
1
.
V Vmax S Vmax
Por S
S
km
S
V Vmax Vmax
y = 87.782x + 2034.9
R2 = 0.9706
6000
S/V
5000
4000
S
49
36.8
24.5
12.3
3000
2000
1000
S/V
6107
5571
4254
2961
0
0
10
20
30
40
50
60
Cintica de Desactivacin
Enzimtica
Factores que afectan la estabilidad:
Temperatura, pH, fuerza inica, fuerzas
mecnicas, sustancias extraas, detergentes,
metales pesados.
Contribuyen a la disminucin de la enzima
activa.
ea ei
de a
rd k d .e a
dt
e a e a 0 . exp( k d .t )
Donde:
eao: es la concentracin de enzima activa en un tiempo 0
Como Vmax depende de la cantidad de enzima, conforme
disminuye la ea disminuye Vmax.
Vmax k 2 e a Vmax k 2 e a 0 .e
k d .t
Vmax Vmax 0 .e
k d .t
ea 0
th e a
2
k d .t
Si : e a e a 0 .e
ea 0
k d . th
e a 0 .e
2
1
ln k d .th
2
ln 2 k d .th
ln 2
th
kd
La velocidad de desactivacin enzimtica depende fuertemente
de la temperatura.
k d A.e
Ed
RT
DATOS EXPERIMENTALES
Reacciones Heterogneas
Se producen en importantes gradientes de
concentracin y Temperatura.
Reactante deben ser transportados al lugar de la
reaccin. Transferencia de Masa.
Para Biocatalizadores Slidos debe conocerse la
concentracin de sustrato existente en cada punto
del interior del slido a fin de calcular la velocidad
local de conversin.
Esto no puede medirse, pero si puede calcularse por
la teora de Difusin Reaccin.
Inmovilizacin:
. Polmeros de gel: poroso, relativamente
blandos.
- Slidos porosos: Cermica, vidrio poroso, etc.
Se les conoce como PORTADORES.
Ventajas de Biocatalizadores inmovilizados
- Operacin en Continuo.
- Utiliza el mismo material catalitico.
- Mayor Estabilidad.
- Mayor vida media.
Velocidades de Reaccin
Verdadera y Observada
Velocidad Verdadera o Intrinseca: Velocidad local que
depende de la posicin.
- Sigue los principios de Rx homogneas
- Dificiles de medir.
Velocidad Observada: Velocidad global de reaccin
para el catalizador entero.
- Veloc. Enz. Inm. < Veloc. Enz. Libre
- Las ecuaciones cinticas incluyen parmetros
de transferencia de masa.
Limitaciones Difusionales
Antes de que tenga lugar la reaccin, el sustrato
debe difundirse hasta la enzima inmovilizada.
En una catalisis heterognea llevada a cabo
mediante enzimas inmovilizadas la velocidad de
reaccin esta determinada por: pH, Temperatura y
Sustrato; Ademas de Velocidad de transporte de
protones, sustrato, calor a travs de la matriz de
soporte a las celulas o enzimas inmovilizadas.
Principales factores:
Efectos conformacionales.
Efectos Estricos
Efectos microambientales
Determinacin de las
Limitaciones Difusionales
Las limitaciones difusionales pueden
dividirse en internas y externas, y estn
cuantificadas por una serie nmeros
Adimensionales que nos dan una idea sobre
cual de ellas es la limitante en el proceso.
Re .Sc
J D D . ds D e
e
dr
Donde
Re=Numero de Reynolds;
Sc=Numero de Schmitd
Numero de Reynolds
Relacin de las fuerzas de Inercia o
cinticas y las fuerzas viscosas de la
corriente fluida.
( N.di)di.
Re
d p . L .v p
Re
L
Reynolds de paleta, en
tanque agitado
Reynolds para lecho
fluidizado.
Sc
DS .
Ds: Difusividad molecular del componente A en el
lquido
Limitaciones Difusionales
Externas
Se deben a que la velocidad de difusin del
sustrato esta restringida por la delgada
pelcula del fluido mal mezclado que rodea
cada partcula del soporte. (capa de NernstPlank)
Estos efectos se observan en las velocidades
de reaccin y pueden determinarse por
varios mtodos
KL
1
k *m
km
a m *
Vmax Vmax
Sx 4r
3
am
Vx 4 r 3 r
3
2
Sh 4.6(Re .Sc)
0.33
dp
Sh
DS
KL
DS K L .
Donde:
DS:Difusividad del sustrato en el lquido.
Limitaciones Difusionales
Internas
Son debidas al pequeo tamao
(tortuosidad) de los poros del soporte,
impidiendo el flujo del fluido dentro de los
poros de las partculas en condiciones de
operacin normal, produciendose una
reduccin del coeficiente de difusin con
respecto al obtenido en solucin libre:
D S
De
Factor de Efectividad ()
Es la relacin entre la velocidad de reaccin
observada u aparente de la celula
inmovilizada y la velocidad de una cantidad
equivalente de celula libre.
En general es menor que la unidad.
*
max
D e .r
Bi
D s .
r V
3 k *m .De
Km
C AS
2
Criterios de Weisz
Si < 0.3; 1 y las limitaciones debidas
a la transferencia interna de materia son
despreciables.
Si > 3; es sustancialmente < 1 y las
limitaciones debidas a la transferencia
interna de materia son importante.
En el intervalo intermedio: 0.3< < 3 es
necesario realizar un analisis mas detallado.
Clculo de la Difusividad
Efectiva De , Mtodo de Crank
D e q 2n t
6(1 ) exp
r
C Lo
Cl
1
2 2
1
9 9 q n
n 1
Donde:
CL: concentracin de sacarosa en la superficie de la
partcula en funcin del tiempo
CLo: concentracin inicial de sacarosa en la solucin
qn: es la raz positiva diferente de cero de la ecuacin
trascendental
r: radio de la perla o pellet
n: nmero de partculas esfricas
V: volumen de la solucin
: relacin de volumen de solucin y volumen de esferas
biocatalticas
3q n
tan q n
3 q 2n
V
4 3
r
3
Determinacion de De
Para celulas inmovilizadas en perlas de
alginato:
V= 100 ml
n = 1000 perlas
dp = 3.3 mm
qn
3
3
tan q n
2
qn
D e q 12 t
exp
D e q 22 t
exp
2
D e q 2n t
exp
2
C Lo
CL
1 61
. . ..
2 2
2 2
2 2
1
9
q
9
q
9
qn
1
2
CL
C Lo
1 61
1
D e q12 t
exp
2
r
9 9 2 q12
Y logaritmando:
2
q1
AB
ln( C L A) ln
De 2 t
r
C
GRACIAS