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Objetivos
Importncia
Deteo
Deteo de
de antignios
antignios virais
virais e
e
Tcnicas de
mtodos
mtodos baseados
baseados em
em tcnicas
tcnicas
diagnstico mais
de
de PCR
PCR
usadas atualmente
A qualidade da amostra importante pois influencia a
sensibilidade da tcnica e consequentemente a deteo dos
vrus.
obteno
desagradvel
para
paciente,
equipamentos especializados;
Operador qualificado para a colheita da amostra;
difcil de obter em pacientes em ambulatrio
requer
4
estudos
indicam
que
com
um
swab
nasofarngeo
se
Flocked-nasopharyngeal swab
Zaragatoas
(NPFS) modificadas com objetivo de aumentar o n de clulas
epiteliais colhidas e consequentemente proporcionar um melhor
diagnstico.
Proporcionam amostras clnicas melhores quando comparados com
zaragatoas convencionais.
Ainda no h comparaes em relao ao aspirado nasofarngeo
hospitalizadas
com
infeces
agudas
do
trato
Amostras
Amostras foram
foram
mantidas
mantidas refrigeradas
refrigeradas ee
transportadas
transportadas para
para oo
laboratrio
laboratrio 3h
3h aps
aps
colheita.
colheita.
Diviso
Diviso de
de cada
cada amostra
amostra
em
em duas
duas alquotas
alquotas que
que
foram
foram processadas
processadas da
da
mesma
mesma forma
forma
Uma
Uma alquota
alquota usada
usada no
no
ensaio
ensaio IFD
IFD ee outra
outra
alquota
alquota usada
usada no
no RTRTPCR.
PCR.
utilizado:
IMAGEN
Respiratory
10
11
Controlo
negativo
(clulas
no
infetadas)
Reagente de Screening:
12
Imagem retirada de: http://
www.thermoscientific.com/en/product/oxoid-imagen-respiratory-scr
een-positive-negative-control-slide.html
(26-05-2015)
14
15
16
cDNA
cDNA
17
18
Fluorescence
was
monitored once at
each cycle at the
end of the annealing
phase.
Imagem retirada de: http://www.bio-rad.com/en-us/applications-technologies/qpcr-real-time-pcr
19
20
21
Retirado de: http://
mededu.cau.ac.kr/micro/research_pds/LC_FastStart_DNA_Master_SYBR_Green_I.pdf (Acesso
a 24-05-2015)
Culturas Celulares
Amostras
196 aspirados
nasofarngeos
Linhas
Linhas celulares
celulares
usadas
usadas
MDCK
LLC-MK2
HEp-2C
RD
22
Resumindo
Imunofluorescncia Direta
Feita em todas amostras de NPA e NPFS
Influenza A e B, RSV, parainfluenza tipo 1,2,3,
adenovrus.
Culturas celulares
RT-qPCR
Feita em todas amostras de NPA e NPFS
Pesquisa de Influenza A e B e RSV
RT-PCR ou PCR
Feito para pesquisa de outros vrus quando
surgiram resultados discrepantes
23
Resultados
24
Total= 80
Resultados
25
Resultados
26
Resultados
27
Resultados
74 positivos para
NPA + NPFS
80 positivos no
screening
6 positivos apenas
no NPA
3 Influenza A
Um RSV, um
Adenovrus , um
Parainfluenza tipo 3
N mdio de clulas:
18 (NPA) e 23
(NPFS)
N mdio de clulas
Influenza A 5,5
N de clulas
positivas para os
outros vrus 1
28
Discusso
29
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