Campilobacter jejune

Docente:

blog. wilbert Ziga Quispe

Integrantes:
Alexandra carbajal Amonez
Giovanni Quispe Quispe

INTRODUCCION

La familia Campylobacteraceae comprende 18 especies y sub

especies en el gnero campylobacter. Campylobacter
(campylo=curvada; bacter =vara) son organismos curvados o
espiralados, son bacilos Gram negativos no formadores de esporas,
mviles por estar provistos de flagelo en un extremo generalmente
son microaerofilas.
El campylobacter puede vivir solo pocas horas a 37C pero su
supervivencia se incrementa a bajas temperaturas en varios das a
4C incluso varias semanas en congelacin, la mayora de estas
especies colonizan en el intestino y por ese motivo la transmisin
son ms frecuentes es por va oral por medio de, alimentos o agua
contaminado.
Campylobacter jejuni son las especies de Campylobacter aisladas
con mayor frecuencia en enfermos humanos infectados y se pueden
transmitir directamente de los animales a los humanos por contacto
o por consumo y manipulacin de alimentos de origen animal.

Campylobacter

El trmino Campylobacteriosis se refiere a un grupo de infecciones

causadas por bacterias del gnero Campylobacter que afectan tanto
a seres humanos como a animales domsticos Muchas especies del
gnero son capaces de causar enfermedad transmitida por
alimentos (ETA) en seres humanos, destacndose Campylobacter
jejuni subespecie jejuni (C.jejuni) y Campylobacter coli (C.coli).

Caractersticas microbiolgicas.
Taxonoma
Las primeras especies de este gnero fueron identificadas hace ms
de 90 aos en animales, pero no fue sino hasta 1970 cuando se
reconoci como patgeno humano. Inicialmente incluidos dentro del
gnero Vibrio,en 1963 se encontr que presentaban notorias
diferencias bioqumicas y serolgicas con el agente del clera y otros
vibrios haloflicos, constituyndose entonces el gnero
Campylobacter. Aunque la clasificacin de estas bacterias est en
continua revisin y modificacin, actualmente se consideran dos
gneros dentro del Grupo Campylobacter

Morfologa y caractersticas fisiolgicas

Se trata de bacterias gram negativas, pequeas (0.3-0.6 m de
dimetro, 0.5-5 m de ancho), no
esporuladas, con una forma distintiva curva o en espiral, con
aspecto de vibrio, cuando se observan a partir de cultivos
jvenes; con ms de 48 horas de incubacin o tras prolongada
exposicin al aire adoptan una forma cocoide.
El Campilobacter jejuni tiene una temperatura ptima de
crecimiento de 42C, por lo que es prctica habitual en el
laboratorio la incubacin a esta temperatura con el fin de facilitar
el aislamiento selectivo del principal patgeno humano del
gnero. Su velocidad de desarrollo es ms lenta que la de las
bacterias de la flora normal entrica, por lo que para su
aislamiento a partir de materias fecales se requieren medios de
cultivo selectivos que inhiban esta flora.

ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL

Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura
de 2 8 C, en su envase original hasta momentos antes de su utilizacin.
Evitar la congelacin y el sobrecalentamiento. Las placas pueden
inocularse hasta la fecha de caducidad (vase la etiqueta del paquete) e
incubarse durante los perodos de incubacin recomendados. Las placas de
pilas abiertas de 10 unidades pueden utilizarse durante una semana
cuando se almacenan en un rea limpia a una temperatura de 2 8 C.
MATERIALES Y MTODOS

3.1 Materiales
Refrigeradora
Incubadora
Autoclave
Balanza
Cajas de Petri
Frascos de vidrio
Mechero de Bunsen
Asas para siembras bacteriolgicas de punta circular
Marcador para vidrio
Hisopos
Medios y soluciones:
Placas con agar Skirrow

3.2 Metodologa
Identificacin del agente
Las muestras que se recolectan son las muestras
fecales o intestinales de aves de corral y de
mamferos productores de carne (ganado vacuno,
ovejas y cerdos).
Los campilobacter son organismos bastante difciles
de cultivar. Su recuperacin del material fecal o de los
intestinos se puede llevar a cabo:
Aprovechando la rpida movilidad y el pequeo
tamao de campilobacter en relacin con otra flora
intestinal, permitiendo que estos organismos pasen a
travs de los filtros de membrana sobre medio de
crecimiento en agar, o usando agar que contenga
antibiticos selectivos . y la recuperacin de C. jejuni
y C. coli termfilo utilizando los medios anteriores se
puede mejorar por crecimiento selectivo a la
temperatura ptima de crecimiento de 42C, lo que
puede inhibir el crecimiento de bacterias
contaminantes.

Recogida de muestras
Ganado vacuno, ovejas y cerdos
Los campilobacters son colonizadores frecuentes del intestino de
ganado vacuno, ovejas y cerdos (2, 37, 38). El ganado vacuno y las
ovejas son colonizados fundamentalmente por C. jejuni, C. coli
Transporte y tratamiento de muestras
Medios de transporte
La funcin del medio no es el crecimiento de Campylobacter sino
proteger a las muestras de la sequedad y de los efectos txicos del
oxgeno.
Cuando solamente se puedan recoger cantidades pequeas de
muestras fecales/del ciego y no haya tubos de transporte disponibles,
se recomienda el envo del espcimen en medios de transporte. Se han
descrito varios medios de transporte: Cary-Blair, Cary-Blair modificado,
medio Stuart modificado, medio Campytioglicolato, agua con peptona
alcalina y medio de prueba de movilidad semislida. Se han descrito
buenos resultados de recuperacin utilizando Cary-Blair (18, 28).

 Tratamiento de las muestras

las muestras deberan refrigerarse nicamente cuando no se puedan
procesar el mismo da; de otra forma, se deben mantener a
temperatura ambiente. Cuando las muestras se envan o se
mantienen en el laboratorio a 4C, debe dejarse que se equilibren a
temperatura ambiente antes de su procesado, para evitar choques
trmicos.
Para muestras fecales o intestinales, no se necesita ningn
tratamiento, y se pueden poner directamente sobre medios selectivos.
Cuando se utiliza el mtodo de filtracin, se lleva a cabo una
suspensin de las heces (generalmente 1 en 10) en solucin salina
tamponada con fosfato (PBS) y diluida de forma que se puedan poner
gotas de la suspensin sobre el filtro.
Aislamiento de Campylobacter
El aislamiento de Campylobacter de muestras fecales o intestinales se
lleva cabo, generalmente, mediante colocacin directa sobre el medio
selectivo o utilizando el mtodo de filtracin sobre agar no selectivo.
Se recomienda el enriquecimiento para aumentar la sensibilidad del
cultivo de microorganismos potencialmente estresado por las
condiciones ambientales o en caso de bajos niveles de organismos en
las heces ,por ejemplo, ganado vacuno, ovejas y cerdos.

i)Medios selectivos para aislamiento:

Los medios selectivos se pueden dividir en dos grupos fundamentales:
medios que contienen sangre y medios que contienen carbn. Los
componentes de la sangre y del carbn sirven para eliminar los
derivados txicos del oxgeno. La mayor parte de los medios estn
disponibles comercialmente. La selectividad de los medios viene
determinada por los antibiticos utilizados.
Ejemplos de caldos de enriquecimiento selectivos:
Caldo Bolton
Caldo Preston
Caldo Exeter
Caldo Park y Sanders
CCDB (caldo con deoxicolato, cefoperazona y carbn)
Ejemplos de medios slidos selectivos con sangre:
Agar Preston
Agar Skirrow
Agar Butzler
Campy-cefex
Ejemplos de medios slidos con base de carbn
mCCDA (agar modificado con deoxicolate, cefoperazona y carbn),
versin ligeramente modificada de la CCDA descrita originalmente).
Agar Karmali o CSM (medio de carbn selectivo).
Agar CAT (cefoperazona, anfotericina y teicoplanina), facilitador del

ii) Inoculacin de medios

Para muestras que no necesiten enriquecimiento, se extiende
directamente una pequea cantidad (alrededor de 0.1 g utilizando un
asa) sobre un medio selectivo slido para facilitar el aislamiento de
colonias aisladas.
Para muestras que necesiten enriquecimiento (por ejemplo muestras de
piel y carne), se diluyen 25 g del material a 1/10 en medio de
enriquecimiento. Las muestras de carne o las canales completas de pollo
se pueden lavar con solucin salina o PBS, despus de lo cual se aade
un volumen de este lquido de lavado a nueve volmenes de medio de
enriquecimiento. Se pueden aadir volmenes ms grandes de lquido de
lavado a un volumen igual de caldo de enriquecimiento de doble
concentracin. Cuando se usan muestras de carne ms pequeas para el
anlisis, se pueden lavar con lquido de enriquecimiento, que se incuba
posteriormente.
iii.) Incubacin
Atmsfera
Se necesitan atmsferas microaerbicas de 5-10% de oxgeno, 5-10% de
dixido de carbono (y preferiblemente 5-9% de hidrgeno) para un
crecimiento ptimo . Se pueden producir condiciones atmosfricas
microaerbicas adecuadas mediante diferentes mtodos.

 Temperatura de incubacin
Los medios se pueden incubar a 37C o 42C, pero es una prctica
comn incubar a 42C para minimizar el crecimiento de
contaminantes y para seleccionar el crecimiento ptimo de
C.jejuni/C.coli. Se aaden los agentes fungostticos: cicloheximida o
anfotericina para impedir el crecimiento de levaduras y hongos a
37C.
Tiempo de incubacin
El caldo de enriquecimiento se incuba durante 24-48 horas y se
siembra por extensin sobre un medio selectivo slido.
Generalmente Campylobacter jejuni y C. coli manifiestan crecimiento
sobre medios slidos en 2448 horas a 42C. Se recomiendan 48 horas
de incubacin para el diagnstico rutinario.
iv) Identificacin sobre medio slido
En agar Skirrow u otros medios slidos que contengan sangre, las
colonias caractersticas de Campylobacter son ligeramente rosadas,
redondas, convexas, suaves y brillantes, con un borde regular.

d) Confirmacin
Se necesita un cultivo puro para pruebas confirmativas, pero se puede
obtener una confirmacin preliminar mediante examen microscpico
directo del material con colonias sospechosas.
Las pruebas confirmativas de la presencia de campilobacters termfilos y
su interpretacin se proporcionan en el Cuadro 1.

ii) Deteccin de oxidasa: Obtener material de una colonia sospechosa

y colocarlo en papel de filtro mojado con reactivo de oxidasa. La
aparicin en 10 segundos de color violeta o azul intenso significa que
la reaccin es positiva
iii) Fermentacin de azcares y produccin de sulfhdrico: El medio de
agar con hierro y triple azcar (TSI) se inocula por extensin
longitudinal sobre la superficie del agar inclinado y por picadura en la
base (el extremo del medio TSI en el tubo). Incubar
microaerbicamente a 42C durante 24-48 horas.

e) Identificacin de Campylobacter a nivel de especie

Entre las especies de Campylobacter spp. que crecen a 42C, las
que se encuentran ms frecuentemente en muestras de origen
animal son C. jejuni y C. coli. Sin embargo, se han descrito
frecuencias bajas de otras especies. Generalmente, C. jejuni se
puede diferenciar de otras especies de Campylobacter sobre la base
de la hidrlisis de hipurato, ya que es la nica especie que da
positiva a hipurato. Se ha descrito la presencia de cepas de C. jejuni
negativas a hipurato . El cuadro 3 proporciona algunas
caractersticas fenotpicas clsicas bsicas de las especies ms
importantes de Campylobacter termfilos.

RESULTADOS
Los resultados obtenidos luego de realizar las siembras de los
hisopados rectales en agar selectivo para Campylobacter jejuni y
hacer las lecturas 48 horas despus, mostraron crecimiento
caracterstico en algunas de las muestras. En el primer muestreo
realizado se observaron 2 placas con crecimiento caracterstico,
En las muestras con crecimiento caracterstico de Campylobacter
jejuni, se observaron colonias con una apariencia plana y color
grisceo.
De estas colonias se realizaron pruebas complementarias para
confirmar que el crecimiento tpico observado era debido a
Campylobacter jejuni (Anexos-Cuadro No. 2).

c
a
r
g

s
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